安息香配伍冰片在人工胃肠液中的成分变化研究

张慧，杨孟妮，胡攀，夏厚林

安息香配伍冰片在人工胃肠液中的成分变化研究

张慧，杨孟妮，胡攀，夏厚林

目的：研究安息香与冰片配伍后其主要成分苯甲酸及总香脂酸在人工胃肠液中的含量变化情况。方法：采用高效液相色谱法（HPLC）研究苯甲酸含量变化，采用紫外分光光度法（UV）研究总香脂酸含量变化。结果：HPLC测定苯甲酸含量大小为：人工肠液＞水＞人工胃液，配伍冰片组含量大于单味样品组含量；UV测定总香脂酸含量大小为：人工肠液＞水＞人工胃液；配伍冰片组含量大于单味样品组含量。结论：HPLC和UV测定结果表明安息香在人工肠液中吸收更好，而在人工胃液中吸收较少，表明安息香主要在肠道代谢；与冰片配伍有利于安息香的吸收，体现了冰片与安息香相须相使的作用，表明了配伍的合理性。

HPLC；UV；苯甲酸；总香脂酸；人工胃肠液

安息香［1］为安息香科植物白花树Styrax tonkinensis （Pierre） Craib ex Hart.的干燥树脂，是一种芳香开窍药，具有开窍醒神、行气活血、止痛的功效。根据前期研究，安息香主要有效成分总香脂酸发挥了芳香开窍的作用，其中的苯甲酸［2］发挥了抗菌防腐的作用。

安息香是芳香开窍药［3］，麝香，冰片，石菖蒲同属于开窍药。为了达到好的疗效，开窍药常配伍使用，已有研究麝香与冰片配伍对脑缺血缺氧小鼠模型的影响［4］，及冰片与石菖蒲的配伍研究［5］等方面的报道。实验室前期对安息香配伍冰片对小鼠脑缺血缺氧及血脑屏障通透性的影响［6］进行研究后发现安息香与冰片配伍后能显著延长小鼠存活时间，结果表明安息香与冰片有相须相使的配伍关系。在此基础上，我们研究安息香与冰片（4∶1）配伍后能否增加了安息香的主要成分在模拟的胃肠液中的溶出量，而使得他们的配伍在小鼠的脑缺血缺氧实验中发挥作用。

1 仪器与材料

1.1仪器

BS124S电子分析天平（十万分之一，赛多利斯科学仪器，北京有限公司），高效液相色谱仪（Agilent Technologies），空气浴振荡器（HZQ-C，中国哈尔滨市东联电子技术开发有限公司制造），紫外分光光度仪（UV1100 spectrophotometer），W201B恒温水浴锅（上海亚荣生化仪器厂），DHG-9075A型电热鼓风干燥箱（上海—恒科学仪器有限公司）。

1.2材料

安息香药材、冰片药材均购置于成都荷花池中药材市场，分别经成都中医药大学卢先明教授鉴定为安息香科植物白花树Styrax tonkinensis（Pierre）Craib ex Hart的干燥树脂和龙脑香科植物龙脑香dipterocarpaceae的树脂和挥发油加工品提取获得的结晶；苯甲酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：20141203），水为超纯水，胰蛋白酶（1：250，牛胰，T0458 25g，如吉生物科技），胃蛋白酶（上海伯奥生物科技有限公司，130131），实验所用其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1人工肠液的制备

参照《中华人民共和国药典》2010版配制，取6.8 g磷酸二氢钾，加500 mL水使溶解，用0.1 mol·L-1NaOH调节pH至6.8；再取胰蛋白酶10 g，加适量水使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000 mL即得。

2.2人工胃液的制备

参照《中华人民共和国药典》2010版配制，取16.4 mL稀盐酸，加约800 mL的水与10 g胃蛋白酶，摇匀后加水稀释成1000 mL即得。

2.3HPLC测定苯甲酸含量变化

2.3.1对照品溶液的制备 精密称取苯甲酸对照品10.10 mg，加甲醇定容到10 mL即得（1.01 mg·L-1）。

2.3.2供试品溶液的制备 精密取安息香药材粉末0.5 g 分别加入水/胃液/肠液300 mL；精密取安息香药材粉末0.5 g和冰片药材0.125 g分别加入水/胃液/肠液300 mL（注：安息香药材与冰片配伍比例根据本实验室前期试验优选比例4：1）；精密取冰片0.125 g分别加入水/胃液/肠液300 mL；以上每组做三个平行试验，总共有9*3=27个供试品。将上述27个样置于空气浴振荡器恒温震荡8 h取样过滤，取续滤液调pH 至7，再过微孔滤膜，即得供试品。

2.3.3色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-3，C18柱（4.6*250mm，5μm），流动相：甲醇-0.3％磷酸水（40：60），检测波长：230 nm，流速：1 mL·min-1，进样量：20 μL。

2.3.4方法学考察 取苯甲酸对照品溶液稀释成3.03 mg·mL-1、9.09 mg·mL-1、30.3 mg·mL-1、90.9 mg ·mL-1、151.5 mg·mL-1的浓度，分别进样20μL，按“2.3.3”项下色谱条件测定，记录峰面积。以进样量（mg）为横坐标，峰面积（mAU）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=101.00x+146.17，r=0.9997，结果表明苯甲酸在3.03～151.5 mg范围内线性关系良好。

取同一批次药材依法考察，精密度试验RSD为0.89％；24h内稳定性试验人工肠液中RSD为0.60％，水中RSD为1.09％，人工胃液中RSD为为0.85％；加样回收率试验人工肠液中平均回收率为93.74％、RSD为1.60％，水中平均回收率为94.28％、RSD为1.51％，人工胃液中平均回收率为94.07％、RSD为1.37％，表明该法可靠性较好。

2.3.5苯甲酸含量测定 照“2.3.1”和“2.3.2”项下供试品的制备方法制备。分别精密吸取对照品和供试品各20 μL，注入液相色谱仪测定，结果见图1～图3、表1。

图1　苯甲酸对照品色谱图

图2　空白胃液色谱图

图3　空白肠液色谱图

表1　苯甲酸含量测定结果（n=3）

根据结果显示苯甲酸含量大小为：配伍冰片组＞单味安息香组，人工肠液组＞水组＞人工胃液组，单味冰片组不含苯甲酸。

2.4UV测定总香脂酸含量变化

2.4.1对照品溶液的制备 精密称取20 mg苯甲酸对照品，加饱和碳酸氢钠溶液溶解，并加碳酸氢钠饱和溶液定容至5 mL，即得。

2.4.2供试品溶液的制备 照“2.3.2项”下调pH后加乙醚萃取3次，合并乙醚层液体，再加碳酸氢钠萃取3次，合并萃取液，取萃取液0.5 mL定容到10 mL即得。

2.4.3方法学考察 精密吸取对照品溶液10 μL、15 μL、20 μL、25 μL、30 μL、35 μL加水定容至10 mL，于考察波长223 nm下用1 cm比色皿测定吸光度A。以苯甲酸的浓度为横坐标，对应的吸光度为纵坐标得到以下回归方程y=71.200x-0.0565，r=0.9996，表明苯甲酸的浓度在0.004 mg·mL-1～0.014 mg·mL-1之间线性范围良好。

取同一批次药材依法考察，精密度试验RSD为1.19％；24h内稳定性试验人工肠液中RSD为0.60％，水中RSD为1.44％，人工胃液中RSD为为1.52％；加样回收率试验人工肠液中平均回收率为94.16％、RSD为0.95％，水中平均回收率为93.78％、RSD为0.75％，人工胃液中平均回收率为94.10％、RSD为1.25％。结果表明该法可靠性较好。

2.4.4总香脂酸含量测定

表2　总香脂酸含量测定结果（n=3）

安息香+胃液2.941.28安息香+冰片+胃液3.031.50冰片+肠液0-冰片+水0-冰片+胃液0-

根据结果显示总香脂酸含量大小为：配伍冰片组＞单味安息香组，人工肠液组＞水组＞人工胃液组，单味冰片组不含总香脂酸。

3 讨论

3.1本实验选取苯甲酸与总香脂酸作为研究指标，原因是安息香药材中这两个指标含量最高，也是药典收载的，这两个指标也是安息香的主要有效成分。

3.2安息香在人工肠液中的吸收比在人工胃液中的吸收强，说明安息香主要在肠液中代谢，由于肠液pH环境偏碱性，有利于酸性成分苯甲酸和总香脂酸的溶出，而胃液中pH环境偏酸性，阻碍了酸性成分的溶出，进而影响吸收。表明安息香适合制成肠溶药物。这个结论为安息香的药剂学提供了依据。

3.3通过实验发现安息香及总香脂酸与冰片配伍后的指标比单味使用的指标高，说明配伍有利于安息香的吸收，安息香和冰片都是芳香开窍药，具有功能上的协同作用，说明了冰片与安息香有相须相使的作用，表明了配伍的合理性，同时也为中医药理论指导用药提供了参考。

3.4总香脂酸的提取和安息香冰片（4：1）的配伍比都是采用本实验室前期研究结论。

3.5本实验考察了苯甲酸与总香脂酸的溶出度，结果显示空气浴震荡8h为最佳提取时间。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部［S］. 北京：中国医药科技出版社，2010：138.

［2］ 雷玲，王强，邓文龙，等.安息香的抗炎解热作用研究［J］. 中药药理与临床，2012，28（2）：109.

［3］ 倪彩霞，曾南，汤奇，等.芳香开窍药对正常小鼠血脑屏障通透性的影响［J］.江苏中医药，2011，43（2）：88.

［4］ 王洋，王建，夏厚林，等.麝香与冰片及其配伍对脑缺血缺氧小鼠模型的影响［J］.中药药理与临床，2011，27（2）：96.

［5］ 吴雪，欧阳丽娜，向大位，等.冰片及石菖蒲促进羟基红花黄色素A透过血脑屏障的实验研究［J］. 中草药，2011：42（4）：734.

［6］ 黄萍，夏厚林，贾芳，等. 安息香配伍合成冰片对小鼠脑缺血缺氧及血脑屏障通透性的影响［J］. 中药药理与临床，2013，29（5）：75.

（责任编辑：李芸霞）

Research on composition change of Anxixiang after compatibility with Bingpian in artificial gastric and intestinal fluid/

ZHANG Hui， YANG Meng-ni， HU Pan， XIA Hou-lin//（School of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine；Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine， Ministry of Education； National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research， Development and Utilization of Chinese Medicine Resources， Chengdu 611137， Sichuan）

Objective: To investigate the content change of main ingredients of Anxixiang （benzoic acid and total balsam acid） after compatibility with Bingpian in artificial gastric and intestinal fluid. Method: High performance liquid chromatography （HPLC） was used to detect benzoic acid content changes. UV spectrophotometry （UV） was used to research balsam acid content changes. Result: HPLC determination results showed that benzoic acid content in artificial intestinal fluid was larger than that in water which was more than in artificial gastric fluid. Bingpian increased benzoic acid content in each fluid. UV determination showed that total balsam content in artificial intestinal fluid was larger than that in water which was more than that in artificial gastric fluid. Bingpian increased total balsam content in each fluid. Conclusion: The HPLC and UV results indicate that Anxixiang absorption in artificial intestinal fluid is better than in artificial gastric fluid which may be caused by intestinal metabolism. Compatibility of Bingpin increases the absorption of Anxixiang which reflects rationality of compatibility.

HPLC； UV； benzoic acid； total balsam acid； artificial gastric intestinal fluid

R 284.1

A

1674-926X（2016）03-018-03

成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室 四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地，成都 611137

张慧（1991-），女，药物分析硕士，主要从事中药质量控制方向研究 Tel：13880459062 Email：zhanghui9101@163.com

夏厚林（1964-），男，教授，博士，主要从事中药学、药物分析学、物理化学方向研究Tel：13568899011 Email：XHL64@163.com

2015-07-22