金盏菊不同提取液体外抑菌作用初步研究

郑佳，卢先明，邓晶晶

金盏菊不同提取液体外抑菌作用初步研究

郑佳1，卢先明2，邓晶晶2

目的：考察金盏菊水提物和醇提物的体外抑菌作用。方法：采用2倍递增稀释浓度法检测金盏菊对金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌5种菌最低抑菌浓度（MIC）。结果：金盏菊醇提物在10倍稀释浓度时对大肠杆菌、金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌有抑菌作用，最低抑菌浓度（MIC）为0.1 g·mL-1；金盏菊水提物在10倍稀释浓度时对大肠杆菌有抑菌作用，最低抑菌浓度（MIC）为0.1 g·mL-1，其余稀释倍数均无抑菌作用。结论：金盏菊提取液对这5种细菌的抑制效果较差，可能与金盏菊药用部位、提取溶剂及生长环境有关。

金盏菊；体外抑菌作用；醇提取液；水提取液

金盏菊为菊科金盏花属植物金盏菊Calendula officinalis L.的干燥全草。具有清热解毒、活血调经的功效，主治中耳炎、月经不调等症［1］。金盏菊不仅作为民间药收载于《云南中草药》、《中华本草》等著作中，更作为一种国际传统药广泛应用于欧洲。据文献记载，早在欧洲12世纪的《简单药物》（欧洲草药第一部准药典）以及《关于不同植物和草药的特性的书》著作中就有关于金盏菊药用价值的记载［2］。国外学者对其做了大量研究，表明金盏菊的花、叶均具有抗菌、消炎等药理作用［3～4］，金盏菊花在国外更是被制成各种药膏用于皮肤病如外伤、感染等的治疗［2］。课题组前期已对金盏菊抗炎、止血药理作用方面做了基础研究［5］，其全草是否具有和花相同的抗菌作用目前并未见文献报道。为了考察这一点，本实验对金盏菊水提物和醇提物进行了体外抑菌实验研究，为其资源开发利用提供科学依据。

1 材料

1.1药材

实验用金盏菊于2013年3月21日采自四川省彭州市丽春镇合江村，经成都中医药大学卢先明教授鉴定为菊科金盏花属植物金盏菊Calendula officinalis L.的干燥全草。

1.2菌种

金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌5种菌均由成都中医药大学病原微生物与免疫学实验室提供。

2 实验原理与方法

2.1实验原理

分别将一定浓度的金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌5种菌接种到不同浓度的含药平板上，于37℃温箱中培养24 h，观察各种细菌的生长情况，从而判断供试药的体外抑菌效果。

2.2实验方法与步骤

2.2.1实验方法 首先用纸片扩散法进行粗筛，取直径6 mm滤纸在各供试原液中浸泡后，分别接种在涂布有各种供试菌的平板中，于37℃温箱中培养24 h，培养后抑菌圈无或较小（d≤10 mm），说明抑菌作用较弱；进一步采用2倍递增稀释浓度法检测金盏菊最低抑菌浓度。

2.2.2实验步骤

（1） 供试液的制备

称取金盏菊药材适量，平均分为2份，分别用水、60％乙醇回流提取，浓缩制成含生药1 g·mL-1的原药液，备用。

（2） 菌种的活化

各供试菌种需要在营养肉汤中转种、活化2～3代备用。

（3） 供试菌液的制备

取活化后的5种菌种营养肉汤培养物，用灭菌生理盐水稀释到104～105b CFU·mL-1菌液备用。

（4） 含药平板的制备

设定含药平板含药浓度分别为0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625 g·mL-1，即取2 mL、1 mL、0.5 mL、0.25 mL、0.125 mL供试原药液分别与0、1、1.5、1.75、1.875 mL营养肉汤混合置于灭菌空白平皿中，将已灭菌营养琼脂冷却至50℃左右，注入18 mL/皿，充分混匀，分别得到10倍、20倍、40倍、80倍、160倍稀释含药平板。

（5） 接种方法

用移液枪量取20 μL菌液点种在普通营养琼脂平板及含药平板上，做三个重复。

（6） 培养与观察

于37℃温箱中培养24 h，观察并记录各类细菌的生长情况。

3 实验结果

金盏菊体外抑菌结果见表1、表2。

表1　金盏菊水提液体外抑菌效果

表2　金盏菊醇提液体外抑菌效果

上述结果显示金盏菊提取液对这5种细菌的抑制效果较差。金盏菊醇提物在10倍稀释时对大肠杆菌、金色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有抑菌作用，最低抑菌浓度（MIC）为0.1 g·mL-1；金盏菊水提物在10倍稀释时对大肠杆菌有抑菌作用，最低抑菌浓度（MIC）为0.1 g·mL-1，其余稀释倍数均无抑菌作用。

4 讨论

从结果可知，金盏菊提取液对这5种细菌的抑制效果较差。金盏菊醇提物仅对大肠杆菌、金色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有较弱抑菌作用；金盏菊水提物仅对大肠杆菌有较弱抑菌作用。国外文献报道金盏菊花、叶有较强的抑菌作用，并被制成各种软膏用于抗菌、消炎。本次试验所用药材为金盏菊全草，并非单一的花和叶，且批次单一，其抑菌效果差，可能与药用部位选择、提取所用溶剂以及金盏菊所处生长环境等有关，具体原因有待进一步研究。

［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草［M］.上海：上海科学技术出版社，1998：751.

［2］ 江首彦.欧洲德语区草药文献整理及奥地利中药处方分析［D］.北京：北京中医药大学，2008：39.

［3］ Efstratiou E，Hussain AI，Nigam PS，et al.Antimicrobial activity of Calendula officinalis petal extracts against fungi， as well as Gram-negative and Gram-positive clinical pathogens［J］. Complement Ther Clin Pract，2012（18）：173.

［4］ 洪文旭.止血消炎金盏菊［N］.中国中医药报，2009-7-16（010）.

［5］ 郑佳，卢先明，徐利，等.金盏菊的安全性评价及药效学研究［J］.成都中医药大学学报，2013，36（1）：63.

（责任编辑：陈思敏）

Study on the bacteriostatic effects of Jinzhanju extract in vitro /

ZHENG Jia1， LU Xian-ming2， DENG Jing-jing2//（1.Leshan Vocational and Technical College， Leshan 614000， Sichuan；2.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu 611137， Sichuan）

Objective: To study the bacteriostatic effects of water extract and alcohol extract of Jinzhanju in vitro. Method: Minimal inhibitory concentrations of Jinzhanju extract were determined by double-fold dilution method on staphylococcus aureus，staphylococcus epidermidis， escherichia coli， pseudomonas aeruginosa and salmonella typhimurium. Result: The MIC of alcohol extract were 0.1 g·mL-1for E. coli， S. Aureus and S.epidermidis at 10 times diluted concentration. The MIC of water extract was 0.1 g·mL-1for E. coli at 10 times diluted concentration.Conclusion: Jinzhanju extract shows poor bacteriostatic effects on the tested bacterium which may be related to the medicinal part， extraction solvent and growth environment.

Jinzhanju； bacteriostatic effects in vitro； alcohol extract；water extract

R 285.5

A

1674-926X（2016）03-015-02

1.乐山职业技术学院，四川 乐山 614000 2.成都中医药大学，四川 成都 611137

郑佳 （1987-），女，硕士研究生，主要从事中药品种、品质与资源开发研究Tel：13980270251 Email：623432246@qq.com

邓晶晶（1982-），女，实验师，主要从事中药品种、品质与资源开发研究Tel：13880652682 Email：16640545@qq.com

2015-08-08