血清Chemerin水平与甲状腺癌临床病理特征及预后的相关性研究

曹芹 崔捷 刘卫平

血清Chemerin水平与甲状腺癌临床病理特征及预后的相关性研究

曹芹 崔捷 刘卫平

目的 观察甲状腺癌患者血清脂肪细胞因子（Chemerin）的水平变化，并探讨其与甲状腺癌临床病理特征及预后的相关性。方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定55例甲状腺癌患者、50例甲状腺良性肿瘤患者及20例健康对照患者的血清Chemerin水平。分析其表达水平与临床病理特征和生存预后的相关性。结果 血清Chemerin水平甲状腺癌组（2302.64±235.32）ng/L，良性甲状腺肿瘤组（1643.82±204.65）ng/L，健康对照组（1013.17±144.52）ng/L，三组比较差异有统计学意义（F=14.156，P＜0.05）。血清Chemerin在甲状腺癌中的表达与TNM分期、淋巴结转移有关（P＜0.05）；术后复发患者血清Chemerin水平（2562.73±251.35）ng/L明显高于未复发患者（2101.32±244.25）ng/L，（P=0.0013）。Chemerin低表达组患者生存时间明显高于高表达组（P=0.0001）；多因素分析显示，Chemerin水平和TNM分期是影响甲状腺癌生存的独立预后因素。结论 甲状腺癌患者外周血Chemerin水平显著升高，与术后复发和生存预后密切相关，可能成为指导治疗和判断复发和预后的一个参考指标。

脂肪细胞因子 甲状腺癌 预后

甲状腺癌约占所有癌症的1%，各种类型的甲状腺癌以乳头状腺癌最多见，可发生于＜10岁儿童至百岁老人。甲状腺结节包括结节性甲状腺肿、腺瘤等，其发病率约为4%。Chemerin是新发现的一种刺激先天免疫系统的脂肪细胞因子，与机体炎症、免疫、代谢综合征、肥胖等有关［1］。Wittamer等［2］认为其能通过与其受体ChemR23结合对树突细胞和巨噬细胞发挥免疫趋化作用。研究发现，Chemerin可能通过多种机制参与肿瘤的发生发展［3，4］。作者通过检测Chemerin在甲状腺癌患者外周血中的表达，分析其与甲状腺癌临床病理特征及预后的相关性，探讨Chemerin在甲状腺肿瘤疾病进展和预后判断的价值。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2011年4月至2015年5月手术或穿刺活检病理诊断为甲状腺癌患者55例，术前均未接受过放疗、化疗等相关治疗。临床资料包括患者年龄、性别、既往史、用药史、病理学资料和随访资料等。55例中男 19例，女36例；年龄32～73岁，中位年龄51.5岁。甲状腺乳头状癌（PTC）37例，滤泡状癌（FEC）8例，未分化癌（MTC）6例，髓样癌（UTC）4例。根据国际抗癌协会联盟（UICC）和美国癌症联合协会（AJCC2002）对甲状腺癌的TNM 分期，分为Ⅰ期22例、 Ⅱ期13例、Ⅲ期12例、Ⅳ期8例。甲状腺肿瘤患者50例中男15 例，女35例；年龄30～76岁，中位年龄53.4岁。结节性甲状腺肿26例、甲状腺腺瘤24例。另选同期健康体检者20例为对照组，其中男10例，女10例；年龄35～70岁，中位年龄47.6岁。

1.2 方法 （1） 标本采集：空腹采集静脉血5ml，肝素抗凝，于4℃条件下2500r/min，离心10min，分离血清，取上清液装于EP管中，置-70℃冰箱保存，集中待测。（2）血清Chemerin检测：采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清Chemerin。人Chemerin试剂盒购自美国R&D公司，操作严格按照说明书进行。分别设空白孔、标准孔和待测样品孔。采用酶标仪（450nm）测量各孔的吸光度（OD值）。通过标准曲线计算样品浓度。

1.3 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件。计量资料以（±s）表示，组间比较采用方差分析，采用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，生存曲线的比较采用Log-rank 检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清Chemerin水平比较 血清Chemerin水平甲状腺癌组（2302.64±235.32）ng/L，良性甲状腺肿瘤组（1643.82±204.65）ng/L，健康对照组（1013.17±144.52）ng/L，三组比较差异有统计学意义（F=14.156，P＜0.05）。

2.2 甲状腺癌患者血清Chemerin水平与临床病理特征的关系 血清Chemerin在甲状腺癌中的表达与患者年龄、性别、病理类型、分化程度差异无统计学意义（P＞0.05）；而与TNM分期、淋巴结转移差异有统计学意义（P＜0.05） 见表1。

表1 甲状腺癌患者血清Chemerin水平与临床病理特征的关系（s）

表1 甲状腺癌患者血清Chemerin水平与临床病理特征的关系（s）

参数n血清Chemerin水平（ng/L）P值年龄＜45岁342235.17±243.620.235 ≥45岁212389.28±226.37性别男性192246.31±251.320.587女性362368.43±231.79病理类型PTC372176.58±262.020.648 FEC82243.23±259.39 MTC62296.78±249.52 UTC42393.27±254.31分化程度高分化272267.18±246.320.739中分化132395.18±257.33低分化152235.97±272.54 TNM分期Ⅰ期221875.24±231.760.0164Ⅱ期132115.78±242.59Ⅲ期122538.43±257.44Ⅳ期82843.27±261.03淋巴结转移有202765.21±246.520.0041 无352247.33±239.83

2.3 甲状腺癌患者血清Chemerin水平与术后复发的相关性 45例术后患者中，19例（42.2%）患者在随访过程中肿瘤复发。复发患者血清Chemerin水平（2562.73±251.35）ng/L明显高于未复发患者（2101.32±244.25）ng/L（P=0.0013）。

2.4 血清Chemerin水平与患者生存预后的相关性 以2300ng/L为界（平均水平取整数），将55例甲状腺癌患者分为Chemerin高水平组（＞2300ng/L，n=18）和低水平组（≤2300ng/L，n=27）。Chemerin高水平组生存时间（29.38个月），明显低于Chemerin低水平组患者（46.67个月）（P=0.001）。见图1。

图1 Chemerin不同表达水平分组患者生存曲线

2.5 甲状腺癌患者预后的多因素分析 将患者年龄、病理类型、TNM分期、分化程度Chemerin水平等因素全部纳入COX回归模型进行多因素分析，采用前进法逐步筛选因子。结果显示，TNM分期及Chemerin水平是影响甲状腺癌预后的独立危险因素。见表2。

表2 甲状腺癌患者预后的多因素分析

3 讨论

Chemerin是一种脂肪细胞因子，在脂肪组织中高表达，调节脂肪细胞分化。人类Chemerin编码基因全长3289bp，位于染色体7q36.1，由3个内含子和4个外显子组成。在人体多种组织如脂肪组织、肺、肝脏、胰腺、卵巢、皮肤等均有表达［5］。正常状态下，Chemerin以前体Chemerin形式分泌到细胞外，炎症早期通过有关蛋白酶激活，成为有活性的Chemerin，与其配体ChemR23一起对抗原递呈细胞有征募和迁移作用，使未成熟树突状细胞和NK细胞向炎症部位聚集。因此，Chemerin在天然性免疫和被动性免疫之间起到重要的桥梁作用［6］。研究发现，在骨关节炎、胰腺炎等炎性疾病患者中血清Chemerin水平增高，表明炎症局部反应增强［7，8］。

目前有关Chemerin在肿瘤中的表达及其作用机制的研究较少，主要集中在胃癌、肝癌、肺癌等，尚无甲状腺癌的相关研究。其Chemerin主要是通过其活化的配体ChemR23，趋化未成熟树突状细胞和巨噬细胞到达肿瘤部位，参与肿瘤的细胞免疫过程。Wang等［9］研究发现，在口腔鳞状细胞癌中，Chemerin的过度表达与肿瘤血管生成和临床疗效不佳有关。曲晓翰等［10］研究认为，肺癌患者外周血Chemerin水平较正常人明显增高，具有作为肺癌诊断指标的潜力。殷宗宝等［11］研究显示，bag-1和Chemerin的灵敏度与CEA在肺癌的诊断灵敏度相似，两者联合检测诊断早期肺癌漏诊率少，有较高的临床意义。陈立武等［12］研究认为，胃癌患者血清Chemerin水平明显升高，与肿瘤的TNM分级有关，可能成为诊断胃癌发病和预测胃癌进展程度的重要血清标记物。Wang等［13］研究认为，胃癌患者血清Chemerin水平明显高于健康者（P＜ 0.01）。血清Chemerin水平增高与临床疾病进展和非肠型胃癌相关。Chemerin增加胃癌细胞的侵袭性。Chemerin能诱导P38和ERK1/2 MAPKs磷酸化和上调VEGF、MMP-7和IL - 6的表达。上述研究结果表明，血清Chemerin水平增高与肿瘤的进展密切相关。

本资料结果显示，甲状腺癌患者的血清Chemerin水平显著高于良性甲状腺肿瘤和正常人群，这可能与癌组织局部免疫作用增强有关。Zhang等［14］采集196例胃癌术前患者血清，检测Chemerin水平明显增高。表明肿瘤组织局部细胞免疫反应增强，产生趋化因子，局部树突状细胞和巨噬细胞增多。此外肿瘤组织的局部炎症反应使前体Chemerin活化，继而导致释放入血液的Chemerin浓度增加。Chemerin高水平表达与胃癌患者长期预后不良和生存有关，可能是胃癌患者生存预后的生物标志物［15］。Lin等［16］研究结果显示，在124例肝癌患者中，Chemerin蛋白在肿瘤组织中的表达显著低于肿瘤旁肝脏组织。Chemerin表达水平与肿瘤大小、组织学分级和树突状细胞及NK细胞侵袭有关。生存分析显示，低水平Chemerin表达与预后不良有关，COX回归分析显示Chemerin水平是影响预后的独立因素。表明Chemerin在肝癌的发展过程中起到重要的作用，同时也表明血清Chemerin水平在肿瘤中的作用还存在着争议的地方。

本资料显示，术后复发甲状腺癌患者中Chemerin水平明显高于无复发患者。血清Chemerin水平随着TNM分期的增加而增加，且淋巴结转移患者血清Chemerin水平高于无淋巴结转移患者。这些指标均与复发和预后相关，表明随着肿瘤的进展及局部免疫反应的增强，甲状腺癌患者的血清Chemerin水平也明显增高。血清Chemerin水平增高在甲状腺癌的进展和复发转移中起到重要作用。为评价血清Chemerin水平对预后的作用，作者对血清Chemerin水平和术后复发及生存率之间的相关性进行分析，发现复发患者血清Chemerin高水平组明显高于低水平组。这表明，血清Chemerin水平与甲状腺癌复发密切相关，可以作为术后复发转移的预测指标。在生存预后分析中，血清Chemerin低水平组的生存时间比高水平组明显延长。为进一步验证血清Chemerin水平在甲状腺癌生存预后中的作用，作者采用COX回归模型进行多因素分析，发现TNM分期及Chemerin水平是影响甲状腺癌预后的独立危险因素。因此，联合应用Chemerin水平和TNM分期可为甲状腺癌复发和预后的预测提供更为准确的信息。

目前关于外周血Chemerin的来源及其病理学作用仍然存在争议，其促进肿瘤发展的具体机制仍不明确，本资料证实血清Chemerin水平对甲状腺癌的复发和预后有一定的预测作用，但由于该研究样本量小，属于单中心横断面研究，因此仍需大样本量、多中心的前瞻性研究来进一步证实。

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Objective To investigate the change of serum Chemerin levels and its relation with clinicopathological characteristics in papillary thyroid carcinoma patients. Methods The expression of Chemerin was determined by ELISA in 55 papillsry carcinoma cases，50 benign thyroid tumor cases and 20 normal persons. The association of serum Chemerin level with the clinicopathological charactersistics，overall survival and prognosis were analyzed. Result s The level of Chemerin was the highest in papillary thyroid carcinoma cases ［（2302.64±235.32）ng/L］，higher in benign throid tumors［（1643.82±204.65）ng/L］，and low in normal persons［（1013.17±144.52）ng/L］，showing signifi cant difference among three groups （F=14.156，P＜0.05）. The serum level of Chemerin in papillary thyroid carcinoma were positively correlated with TNM stage and lymph node metastasis（P＜0.05）.A signifi cantly higher Chemerin level was found in patients with recurrence during the follow-up ［（2562.73±251.35）ng/L］compared with those without recurrence［（2101.32±244.25）ng/L，（P=0.0013）］. A higher serum Chemerin level was signifi cantly associated with a poorer overall survival （P=0.0001）.Multivariate analysis revealed that Chemerin level and TNM stage were independent predictors for overall survival. Conclusion The expression of Chemerin in patients with papillary thyroid carcinoma is increased. Chemerin may be used as a reference indicator to judge direction therapy and to predict the reccurrence and prognosis.

Chemerin Papillary thyroid carcinoma Prognosis

100096 中国人民解放军61741部队门诊部（曹芹）

100029总参谋部大气环境研究所卫生所（崔捷）

100091中国人民解放军总参谋部总医院（刘卫平）