高效液相色谱法测定柴黄口服液中黄芩苷的含量

马纪伟（南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473058）

高效液相色谱法测定柴黄口服液中黄芩苷的含量

马纪伟
（南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473058）

目的 建立柴黄口服液中黄芩苷含量的测定方法。方法 选用ZORBAX SB-C18分析柱（5 μm，4.6 mm×150.0 mm），甲醇-0.2%磷酸水溶液（46∶54）为流动相，检测波长276 nm，流速1.2 ml/min。结果 黄芩苷进样量为0.980～2.940 μg时与峰面积具有良好的线性关系，回归方程为：Y=3×106X+16 310，r=0.999 8，平均回收率为100.45%，相对标准偏差为1.13%。结论高效液相色谱（HPLC）法简便、准确、灵敏度高、分离效果好，可作为柴黄口服液的质量控制标准。

柴黄口服液；黄芩苷；高效液相色谱法；含量测定

柴黄口服液是由柴胡、黄芩等配制而成的口服液，具有清热解毒功效，适用上呼吸道感染、感冒发热［1］。为了有效控制药品质量，确保制剂疗效，本文参考有关文献［2，3］，以制剂中黄芩的有效成分黄芩苷为定量控制指标，采用高效液相色谱法（HPLC）测定黄芩苷的含量，为建立完整的质量控制标准提供依据。

1　仪器与试剂

仪器：LC—10ATvp型高效液相色谱仪（日本岛津），SPD— 10Avp型紫外检测器；N2000型色谱数据工作站；METTLER AE240电子天平。黄芩苷（中国药品生物制品检定所，批号：110715-201109）；柴黄口服液（山东福胶集团有限公司，批号：20100509，20100517，20100609）；超纯水；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18（5 μm，4.6 mm×150.0 mm），流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液（46∶54）；流速：1.2 ml/min；检测波长：276 nm；柱温：25℃；进样量：20 μl。

2.2对照品溶液制备

精密称取黄芩苷对照品（105℃下稳重的）9.8 mg，置于100 ml容量瓶中，加入70%甲醇溶解并稀释至刻度，制成1 ml含0.098 mg的溶液，即得。

2.3供试品溶液制备

精密量取柴黄口服液2 ml，置于100 ml容量瓶中，加入70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液，作为供试品溶液。

2.4线性关系考察

分别精密吸取上述对照品溶液1 μl，5 μl，10 μl，15 μl，30 μl，以2.1的色谱条件进样，测定峰面积。以对照品进样量为横坐标，峰面积积分为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=3× 106X+16 310，r=0.999 8。表明黄芩苷在0.980～2.940 μg之间线性良好。

2.5空白试验

按处方比例和制法，自制不含黄芩苷的样品，并按供试品溶液的制法制成空白对照溶液。依法进样测定，结果空白对照溶液在黄芩苷保留时间处无色谱峰，表明在实验条件下，其他成分对测定无干扰，见图1。

A.黄芩苷对照品　B.柴黄口服液　C.缺黄芩苷的阴性样品1.黄芩苷峰图1HPLC色谱图

2.6稳定性试验

取同一批号（20100509）的供试品溶液，按供试品溶液制备方法，依上述色谱条件，分别在0，2，4，6，8，10，12 h进样20 μl，积分值无明显变化，平均峰面积为716 561，RSD=0.91%，表明黄芩苷含量在12 h内稳定性良好。

2.7精密度试验

精密吸取同一份供试品溶液，每次20 μl，重复进样6次，结果平均峰面积为717 893，RSD=1.21%，表明仪器精密度良好。

2.8重复性试验

取样品（批号：20100509），精密量取6份，按上述色谱条件测定，平均含量为1.832 mg/ml，RSD=1.17%，表明该方法符合重复性要求。

2.9加样回收率试验

精密吸取6份1 ml已知含量样品（批号：20100509，测得黄芩苷含量为1.832 mg/ml），分别精密加入黄芩苷对照品适量，按照样品含量测定方法测定黄芩苷含量。结果表明，本法准确度较高（见表1）。

表1　黄芩苷加样回收率实验结果

2.10样品测定

取3批样品，分别精密称取，依法制成供试品溶液，均以20 μl进样，分别测定吸收峰面积，外标法计算黄芩苷含量，结果见表2。

表2　柴黄口服液中黄芩苷含量测定结果（mg/ml）

3　讨论

3.1检测波长选择

取黄芩苷对照品适量，加流动相溶解后，在200～400 nm波长范围内扫描，结果在276 nm和274 nm波长处均有最大吸收，由于在274 nm处呈现一个很小的未知溶剂峰，故选择276 nm作为检测波长。

3.2流动相选择

HPLC法测定黄芩苷含量多以甲醇-磷酸水溶液为流动相。我们对HPLC分析时的流动相系统组成和比例做了比较，对溶剂系统进行选择，结果显示，在甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.2%冰醋酸等流动相中，甲醇-0.2%磷酸（46∶54）分离黄芩苷的效果最好，故选择其为流动相。

3.3黄芩苷含量指标确定

黄芩为柴黄口服液的主药，黄芩苷为黄芩的主要成分，故可以将黄芩苷作为本药的质量控制定量指标。本文采用高效液相色谱法，建立了测定该口服液中黄芩苷的方法，具有简便、灵敏、准确，重复性好等优点，可用于柴黄口服液的质量控制。

［1］王筠默.中药药理学［M］.上海：科学技术出版社，1984.

［2］吕东，杨凤梅.HPLC测定润肺止咳胶囊中黄芩苷含量［J］.中成药，2003，25（7）：599-600.

［3］唐晓霞.银黄胶囊中黄芩苷的含量测定［J］.中国药师杂志，2005，8（11）：913-914.

R284.1

B

1671-1246（2016）15-0097-02