丹红、参麦和参附3种注射液抗氧化能力的研究*

代向东，胡晓慧，闫海峰，王　怡

·中药研究·

丹红、参麦和参附3种注射液抗氧化能力的研究*

代向东，胡晓慧，闫海峰，王怡

（天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室，天津300193）

［目的］探讨丹红、参麦和参附3种注射液的抗氧化活性强弱。［方法］采用1，1二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除法、铁离子还原法、总抗氧化能力试剂盒法3种方法测定丹红、参麦和参附3种注射液的抗氧化能力。［结果］丹红、参麦和参附3种注射液均具有DPPH自由基清除能力、铁离子还原能力和抗氧化能力。［结论］3种注射液均具有抗氧化能力，其强弱顺序为：丹红注射液＞参麦注射液＞参附注射液。

抗氧化；丹红注射液；参麦注射液；参附注射液

丹红注射液主要含有从丹参、红花提取的有效化学成分，临床常用于防治心脑血管疾病［1-3］，比如冠心病、心绞痛、心肌梗死，缺血性脑病、脑血栓等。参麦注射液主要含有从人参、麦门冬、五味子提取的有效化学成分，临床上对于冠心病的防治应用广泛，现代研究表明其具有强心，调节血压，改善脑、肺、肾、消化系统功能，提高机体免疫力，对恶性肿瘤的化疗有增效、减毒等作用［4-5］。参附注射液主要含有从红参和附片提取的有效化学成分，研究表明其能改善脑缺血以及抗自由基氧化神经元的作用［6-7］。有研究表明，丹红、参麦、参附3种注射液均具有抗氧化活性［8-10］并对心脑血管疾病均有防治作用。本实验通过1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除法、铁离子还原法、总抗氧化能力检测法测定了3种注射液的抗氧化能力强弱。

1　试剂与仪器

1.1主要试剂丹红注射液（菏泽步长制药有限公司，批号14041001），参麦注射液（正大青春宝药业有限公司，批号1402244），参附注射液（雅安三九药业有限公司，批号14061001），抗坏血酸（天津市北方医学化学试剂厂，批号20120207），DPPH（Sigma公司，批号STBB0827V），铁氰化钾［K3Fe（CN）6，天津市赢达稀贵化学试剂厂，批号20130318］，三氯乙酸（天津市福晨化学试剂厂，批号20150320），氯化铁（天津市赢达稀贵化学试剂厂，批号20140929），总抗氧化试剂盒（天津市赢达稀贵化学试剂厂，批号S0119）。

1.2主要仪器分析天平（Mettle Toledo公司），酶标仪（Molecular Devices公司）。

2　方法

2.1DPPH法测定自由基清除能力将不同浓度的样品溶液100 μL加入到96孔板中，再向其中加入100 μL 0.16 g/L的DPPH甲醇溶液，混匀。丹红、参麦及参附3种注射液均具有颜色，为了消除颜色对该体系的影响，将100 μL甲醇与100 μL不同浓度的样本溶液混匀，作为空白对照；再将100 μL甲醇与100 μL DPPH溶液混匀，作为阴性对照。在37℃条件下，反应50min，测定517nm波长的OD值。

2.23种注射液对铁离子还原能力的测定还原力的测定，实质上是检验物质是否为良好的电子供应者的过程。还原能力比较强的物质供应的电子除可以还原氧化性物质外，也可与自由基发生反应，使自由基成为稳定的物质。

2.2.1没食子酸（GAE）标准曲线的制备精密称取PBS，GAE标准品1 mg，用甲醇配成一系列浓度的标准品溶液，分别取等量标准品溶液加入磷酸盐缓冲溶液（PBS，pH 7.2）和铁氰化钾（1%，W/V），于50℃下混匀，水浴20 min。加入三氯乙酸（10%，W/V）后，取上清液用水稀释1倍，加入氯化铁溶液（0.1%，W/V），静置30 min后，在700 nm波长下测量吸光度，以甲醇溶液代替GAE作为空白溶液，每份样品平行操作3次。以GAE的浓度（X）为横坐标，吸光度（Y）为纵坐标，绘制GAE的标准曲线= 0.004 9X+0.084 4（r2＝0.994 9）。

2.2.2GAE当量的计算分别取等量丹红、参麦、参附3种注射液于EP管中，按照“2.2.1”项操作步骤进行实验，利用回归方程求出供试品溶液中折合GAE的浓度，即GAE当量。空白组用超纯水代替氯化铁溶液（0.1%，X/V）。

2.3总抗氧化能力试剂盒法测定3种注射液的抗氧化能力总抗氧化能力检测试剂盒，即Total Antioxidant Capacity Assay Kit，简称 T-AOC Assay Kit，是一种采用2，2’-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）作为显色剂，可以对各种抗氧化物（antioxidant）溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。

2.3.1水溶性维生素E（Trolox）标准曲线的制备精密吸取Trolox标准品溶液，分别配制成1.5、1.2、0.9、0.6、0.3、0.15 mmol/L的溶液。在96孔板的每个检测孔中，加入200 μL ABTS工作液，再加入10 μL各种浓度的Trolox标准溶液，轻轻混匀。6 min后，在734 nm波长下测量吸光度，以Trolox的浓度（X）为横坐标，吸光度（Y）为纵坐标，绘制Trolox标准曲线。

2.3.2Trolox当量的计算96孔板每个检测孔中加入200μLABTS工作液。空白对照孔中加入10μL PBS溶液，样品检测孔内加入10 μL各种样品，轻轻混匀。6 min后，在734 nm波长下测量吸光度。

2.4统计学方法使用SPSS18.0统计软件，所有实验数据使用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

3　结果

3.1丹红、参麦、参附3种注射液清除DPPH自由基能力比较通过DPPH自由基清除法，以半抑制浓度（IC50）值为指标，测定丹红、参麦、参附3种注射液的抗氧化活性。实验结果表明，丹红、参麦、参附3种注射液均具有较好的抗氧化活性，其中以丹红的抗氧化活性为最好，参麦注射液介于丹红与参附注射液之间。见图1。

图1　丹红、参麦、参附3种注射液IC50的比较Fig.1　Comparison of IC50of Danhong，Shenmai and Shenfu injections

3.2丹红、参麦、参附3种注射液对铁离子的还原能力测定通过测定3种注射液对铁离子的还原能力，得知丹红、参麦及参附3种注射液均具有良好的铁离子还原能力，其还原能力测定顺序为丹红注射液＞参麦注射液＞参附注射液。见图2。

图2　丹红、参麦、参附3种注射液GAE当量比较Fig.2　Comparison of the GAE of Danhong，Shenmai and Shenfu injections

3.3丹红、参麦、参附3种注射液的总抗氧化能力测定通过总抗氧化能力试剂盒法，测定3种注射液的抗氧化能力，实验结果表明丹红、参麦、参附3种注射液均具有抗氧化能力，其抗氧化能力强弱顺序为丹红注射液＞参麦注射液＞参附注射液。见图3。

4　讨论

近些年来，大量研究表明氧化应激是导致心血管系统结构、功能异常的重要原因之一［11］，因此研究抗氧化的病生理机制及防治是关键。氧化应激是细胞内抗氧化防御系统受损或氧自由基生成过多，进而氧自由基使机体组织与细胞受到损害的一种反应。氧化应激与各种病理生理机制相互作用，共同促进心血管疾病的发生、发展［12］。因此，抗氧化治疗能有效地保护、改善心肌和血管的结构和功能，为临床治疗心血管疾病开辟了新的思路和方法。研究证实，寻找天然、安全的生物抗氧化剂逐渐成为研究热点［13-14］。中国中药资源极其丰富，是天然抗氧化剂的重要来源，并且中草药的抗氧化性已经引起了充分的重视［15-16］。本实验中，采用DPPH自由基清除能力测定法、铁离子还原能力法、总抗氧化能力试剂盒法3种方法，测定丹红、参麦和参附3种注射液抗氧化能力的强弱，其中以丹红注射液的抗氧化活性最好，参麦注射液居于丹红注射液与参附注射液之间，抗氧化能力强弱顺序为丹红注射液＞参麦注射液＞参附注射液。

图3　丹红、参麦、参附3种注射液抗氧化能力比较Fig.3　Comparison of antioxidant activities of Danhong，Shenmai and Shenfu injections

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（本文编辑：高杉，于春泉）

Study on the antioxidant activities of Danhong，Shenmai and Shenfu injection

DAI Xiang-dong，HU Xiao-hui，YAN Hai-feng，WANG Yi
（Tianjin State Laboratory of Modern Chinese Medicine，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］This study aims to explore the antioxidant activites of Danhong，Shenmai and Shenfu injection.［Methods］Three methods，DPPH free radical scavenging，iron ion reduction method，total antioxidant capacity reagent box method，were used to determine the antioxidant capacity of three kinds of injection.［Results］Three injections were all of DPPH free radical scavenging，iron ion reduction and antioxidant capacity.［Conclusion］Three kinds of injection have antioxidant ability，the order is:Danhong injection＞Shenmai injection＞Shenfu injection.

antioxidant；Danhong injection；Shenmai injection；Shenfu injection

R285

A

1672-1519（2016）02-0104-03

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.02.11

国家重点基础研究发展计划项目（2012CB518404）。

代向东（1990-），女，硕士研究生，主要研究方向为心血管药理研究。

王怡，E-mail:vip_wangyi@126.com。

（2015-10-20）