固相凝集法血小板抗体检测与早期流产相关性探讨

林燕，聂宇波，徐静，张春燕

(江西省赣州市人民医院 输血科，江西 赣州 341000)

固相凝集法血小板抗体检测与早期流产相关性探讨

林燕Δ，聂宇波，徐静，张春燕

(江西省赣州市人民医院 输血科，江西 赣州 341000)

目的研究探讨通过固相凝集法检测血小板抗体对判断早期流产的临床意义，并分析血小板抗体检测结果与早期流产的相关性。方法选取江西省赣州市人民医院产科2015年9月～2016年6月就诊的有早期流产史的50例女性作为研究对象，采用固相凝集法对其血小板抗体进行检测，并计算检测阳性率。同时，选取同期在产科接受产前检查的正常孕妇1092例作为对照，行相同检测，比较2组受检女性的血小板抗体检测阳性率。结果有早期流产史的观察组女性血小板抗体阳性检出率(22.0%)显著高于无早期流产史的正常孕妇(3.1%)(P<0.05)；有早期流产史的女性中，流产次数>2次的女性血小板抗体筛查阳性率(40.0%)显著高于流产次数≤2次的女性(17.5%)(P<0.05)；血小板抗体检测阳性的女性早期流产的发生率(24.4%)显著高于检测阴性的女性(3.6%)(P<0.05)，且血小板抗体筛查结果与早期流产之间存在显著相关性(r=0.782，P<0.05)，其相对风险RR=6.96。结论通过固相凝集法对孕妇的血小板抗体进行筛查，有利于早期流产发生风险的预测，也有利于流产病因的分析及新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜的预防。

固相凝集法；血小板抗体；早期流产

有调查研究显示，当母婴之间的血小板血型不合的情况下，妊娠免疫会诱发早期流产、新生儿同种免疫血小板减少性紫癜等一系列不良反应的出现[1]。因而，对不同妊娠时期孕妇的血小板抗体进行检测具有十分重要的意义。本文选择早期流产史的女性50例作为研究对象，通过固相凝集法对其血小板抗体进行检测，并分析其检测结果与早期流产之间的相关性，具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取江西省赣州市人民医院产科2015年9月～2016年6月就诊的有早期流产史的女性50例作为观察组，其年龄在22～37岁，平均年龄为(32.1±2.8)岁；其中，有1～2次自然流产史的女性40例，有2次以上自然流产史的女性10例，所有被调查者的流产时间均发生于妊娠后的3个月左右。

选取同期在妇产科接受产前检查的正常孕妇1092例作为对照，其年龄在23～38岁，平均年龄为(31.2±3.0)岁，所有孕妇均无输血史，且经红细胞不规则抗体筛查结果呈阴性，IgG抗-A、抗-B效价均在64以下。

2组受检者在年龄等方面的比较差异无统计学意义。

1.2 方法 采集受检者的静脉血液标本3 mL，并将其置于含有乙二胺四乙酸二钾的采血管中进行抗凝处理，在3000 r/min的速度下离心5 min，吸取上层血浆。选择长春博德生物科技有限公司生产的固相凝集法血小板抗体检测试剂盒对血小板抗体结果进行判断，操作严格按照试剂盒说明进行：①制备血小板悬液(有效期内机采血小板用0.9%NaCl进行5～10倍稀释)；②向反应孔中加入50 μL血小板悬液，轻摇反应板10s，平板离心机50 g离心5 min，使血小板固定在反应孔底部，倒出反应孔中液体，洗涤工作液洗涤3次，最后一次洗涤后将反应板倒置于吸水纸上吸干残余液体；③立即向每个反应孔中加入100 μL低离子强度溶液，并分别在相应孔中加入50 μL患者样本、阳性及阴性对照，封口胶封好混匀置于37 ℃水浴孵育30 min；④弃去封口膜洗涤5次，加入50 μL抗人IgG及指示红细胞，轻轻振荡混匀，200 g离心5 min。红细胞平铺于反应孔的底部表面或者红细胞只能够结合到部分孔底部的情况为阳性；以红细胞在反应孔底部中央发生红细胞聚集的情况为阴性[2]。

比较2组受检女性的血小板抗体检测阳性率，探讨早期流产史女性的流产次数与血小板抗体检测结果的影响，并分析血小板抗体检测阳性与早期流产之间的相关性。

2 结果

2.1 不同组别女性的血小板抗体筛查结果比较 经固相凝集法检测2组受检女性的血小板抗体，有早期流产史的观察组女性和无早期流产史的正常孕妇抗体阳性检出率分别为22.0%和3.1%，观察组显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同组别女性的血小板抗体筛查结果比较[n(%)]Tab.1 Comparison of platelet antibody screening between two groups[n(%)]

*P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.2 不同流产次数的女性的血小板抗体阳性率检测结果 有早期流产史的女性中，流产次数≤2次和>2次的女性，血小板抗体筛查阳性率分别为17.5%和40.0%，流产次数>2次的女性显著高于流产次数≤2次的女性，2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同流产次数的女性的血小板抗体阳性率检测结果[n(%)]Tab.2 Comparison of platelet antibody screening between different abortion frequency[n(%)]

*P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.3 血小板抗体与早期流产之间的相关性 血小板抗体检测阳性与阴性的女性中，早期流产的发生率分别为24.4%(11/45)、3.6%(39/1097)，血小板抗体筛查阳性的女性，早期流产率显著升高，比较差异有统计学意义(P<0.05)，提示血小板抗体筛查结果与早期流产之间存在显著相关性(r=0.782，P<0.05)，其相对风险RR=6.96。见表3。

表3 血小板抗体与早期流产之间的关系Tab.3 Corelation of platelet antibody and early abortion

3 讨论

血小板表面的复杂血型抗原是由遗传决定，且属于常染色体显性遗传[3]，血小板血型抗原中，与其他细胞表面或组织共有的血型抗原，被称为血小板相关抗原，包括人类白细胞抗原HLA-A、HLA-B及ABH红细胞血型系统抗原；另一类则为分布于血小板膜糖蛋白上的血小板特异性抗原HPA[4]，目前被国际公认的血小板特异性抗原有5个系统10个抗原，由于其存在独特的型特异性，被称为血小板血型，血小板抗原不合是导致机体产生血小板抗体的重要原因，而血小板抗体的产生原因又包括了自身免疫因素、输血因素等多种[5]。人类血小板抗原与多次输血后血小板输注无效、输血后紫癜以及新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜等之间都有密切的关系。机体在被血小板特异性抗原或HLA等相关免疫因素影响会产生抗血小板抗体[6]。

本文讨论的是血小板抗体与女性早期流产之间的关系，则只考虑自身免疫因素的影响。母婴间血小板血型不合的妊娠免疫会导致母亲对胎儿血型抗原免疫产生抗体，并对胎儿的血小板进行破坏，胎儿的血小板减少则会诱发流产，且由于这种IgG抗体一般在妊娠第14周就可以通过胎盘屏障，孕妇发生流产的时间也一般在3个月左右；即使未出现早期流产的情况，也可能因新生儿血小板减少造成新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜，重者还会对新生儿的中枢神经系统、重要脏器等造成影响，导致水肿、出血等严重症状出现，或因急性颅内出血等情况导致死亡，危害十分严重。因而，对于孕妇的血小板抗体筛查意义十分重大，特别是那些有早期流产史或者习惯性流产的女性而言，血小板抗体的筛查需得到高度重视。

本文对有早期流产史的女性、正常孕妇的血小板抗体筛查结果进行了比较，发现有早期流产史的女性血小板抗体阳性率显著高于正常孕妇，且有流产次数越多，血小板抗体阳性率也相应升高的情况，这与刘凌[7]的研究结果基本一致，且本文有早期流产史的女性血小板抗体阳性率(22.0%)较之更高，与正常孕妇之间的差异也更为显著(P<0.05)。而通过血小板抗体筛查结果与早期流产发生风险的相关性分析可见，2者呈显著正相关(P<0.05)，血小板抗体筛查阳性女性的早期流产高(相对风险RR=6.96)。

需要注意的因母婴间血型不合导致流产的情况有2种，一种为母婴间红细胞ABO系或Rh系血型抗体不合，另一种是母婴间血小板血型不合的血小板抗体，也就是本文研究的内容，前者被认为是导致晚期习惯性流产的主要原因[8], 而后者则被认为是导致早期流产的主要原因。这是由于相对于红细胞，血小板在妊娠早期更容易进入母体血液循环，并因血小板血型的抗原抗体同种免疫反应诱发早期流产[9-10]。

本研究应用固相凝集法进行血小板抗体检测发现离心速度和孵育温度需严格把控，该方法结果直观，易于判读，敏感性和特异性强，方便临床应用，且易于标准化。但也存在以下影响因素：样本抗凝不充分容易形成纤维蛋白凝块及指示红细胞溶血或污染出可导致假阳性。

综上所述,通过固相凝集法对孕妇的血小板抗体进行筛查，有利于早期流产发生风险的预测，也有利于流产病因的分析及新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜的预防。

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[3] 杜振军.妊娠对女性血小板抗体的影响[J].国际输血及血液学杂志,2012,35(5):402-405.

[4] 谢仁伟,王明泉,李丽群，等.孕晚期孕妇2038例血小板抗体筛查分析[J].福建医药杂志,2016,38(2):98-99.

[5] 张趁利,庞桂芝,娄白敏，等.反复输血患者的血小板抗体检测及配型前后的疗效对比[J].临床输血与检验,2014,16(1):66-68.

[6] 毛淑清,黄宇翔,王晴，等.固相凝集法检测血小板抗体的临床意义[J].中国临床研究,2014,27(1):98-99.

[7] 刘凌,帅虎,李流娇，等.固相凝集法在产前血小板抗体检测中的临床意义[J].检验医学与临床,2012,9(11):1360-1361.

[8] 夏世勤,苏莉,刘秋洪，等.血液病患者血小板抗体检测及其与血小板输注疗效的相关性研究[J].中国当代医药,2013,20(22):82-84,86.

[9] 朱伟峰,古国荣,谢国勇，等.孕妇血小板抗体与新生儿血小板减少的相关性研究[J].当代医学,2011,17(20):89-90.

[10] 肖慧英.妊娠合并血小板减少的研究新进展[J].医学综述,2013,19(8):1398-1400.

(编校：王俨俨)

Relationshipbetweenplateletantibodydetectionandearlyabortionbysolidstateagglutination

LIN YanΔ, NIE Yu-bo, XU Jing, ZHANG Chun-yan
(Department of Blood Transfusion, Ganzhou People’s Hospital, Ganzhou 341000, China)

ObjectiveTo investigate the clinical significance of platelet antibodies in the determination of early abortion by solid-phase agglutination, and to analyze the correlation between the results of platelet antibody detection and early abortion.Methods50 women selected from Ganzhou People’s Hospital of Jiangxi province from September 2015 to June 2016 had early abortion history as the research object, using solid agglutination method to detect platelet antibody, and calculate the positive detection rate.At the same time, 1092 cases pregnant women undergoing normal prenatal examination were selected as control group, for the same detection, compare platelet antibody positive rate between two groups.ResultsThe platelet antibody positive rate in early history of abortion in observation group female was 22%, which was significantly higher than that in normal pregnant women without early abortion (3.1%)(P<0.05); the platelet antibody screening positive rate in abortion time above twice of early abortion women was 40.0%, significantly higher than bellow twice(17.5%)(P<0.05); the early abortion rate of platelet antibody positive women was 24.4%, significantly higher than that of negative women (3.6%), there were statistically significant differences (P< 0.05), and there was a significant correlation between the platelet antibody screening results and early abortion(r=0.782，P<0.05), the relative risk ofRR=6.96.ConclusionIt is helpful to predict the risk of early abortion and the analysis of the cause of abortion and the prevention of neonatal autoimmune thrombocytopenia purpura by the method of solid state agglutination.

solid state agglutination; platelet antibody; early abortion

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.10.043

林燕，通信作者，女，本科，副主任技师，研究方向：输血检验，E-mail：1403247326@qq.com。

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