肝动脉栓塞联合T细胞克隆技术治疗结肠癌肝转移临床研究

陈文生　冯　燕　郝忠臣　侯传伟　王振奇　赵　雷　孙庆春吉化集团公司总医院介入科，吉林吉林　132022

肝动脉栓塞联合T细胞克隆技术治疗结肠癌肝转移临床研究

陈文生冯燕郝忠臣侯传伟王振奇赵雷孙庆春
吉化集团公司总医院介入科，吉林吉林132022

目的探讨肝动脉栓塞（TACE）联合T细胞克隆技术治疗结肠癌肝转移的临床疗效。方法选择2010年1月～2014年12月结肠癌肝转移患者64例的临床资料进行回顾性分析，33例患者给予肝动脉栓塞治疗为对照组，31例患者在此基础上给予T细胞克隆技术治疗为研究组。比较两组的临床疗效及治疗后外周血T细胞亚群。结果研究组总有效率显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。研究组治疗后总T细胞亚群、CD4+T细胞亚群、CD8+T细胞亚群显著高于对照组，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。结论肝动脉栓塞联合T细胞克隆技术治疗结肠癌肝转移能够改善患者的预后。

肝动脉栓塞；T细胞克隆技术；结肠癌；肝转移

［Abstract］Objective To discuss clinicalefficacy of hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology in the treatment of livermetastasis from colon cancer.M ethods Clinical data of 64 cases with liver metastasis from colon cancer from Jan 2010 to Dec 2014 were respectively analyzed.33 cases of control group were treated with hepatic arterial embolization，and 31 cases of study group were treated with hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology.Clinical efficacy and peripheral blood T cell subsets after treatment of two groups were compared. Results Total effective rate of study group was higher than control group（P＜0.05）.After treatment，the total T cell subsets CD4+T cell subsets and CD8+T cell subsets in study group were higher than control group（P＜0.01）.Conclusion Hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology in the treatment of liver metastasis from colon cancer can improve the prognosis.

［Key words］Hepatic artery embolization；T cell cloning technology；Colon cancer；Livermetastasis

结肠癌是临床常见的恶性肿瘤，一旦发生肝转移，具有较高的死亡率，是导致治疗失败的主要原因。结肠癌无肝脏转移的患者5年的生存率较有肝脏转移的患者要高。提高发生肝脏转移结肠癌患者的生存率是治疗的关键。肝动脉介入治疗是治疗结肠癌肝脏转移的主要方法。T细胞克隆技术，能够促进增殖，提高杀瘤活性，并且杀瘤谱广［1，2］。自体细胞免疫治疗成为治疗晚期结肠癌的重要方法，并且具有毒性低的优点［3，4］。本文采用肝动脉栓塞联合T细胞克隆技术治疗结肠癌肝转移取得了较好的效果。现将结果报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

选择2010年1月～2014年12月在我院治疗的结肠癌肝转移患者64例的临床资料进行回顾性分析。纳入标准：所有患者均符合临床诊断标准，结肠癌腺癌，肝转移诊断明确，KPS评分70分及以上，临床资料完整。排除标准：合并其他系统内科疾病的患者，肾功能、心功能异常的患者。其中男38例，女26例，年龄41～77岁，平均（48.4±9.7）岁。根据患者的治疗方法分为对照组和研究组。对照组33例，其中男18例，女15例，平均年龄（47.8±8.9）岁；研究组31例，其中男20例，女11例，平均年龄（48.9±9.3）岁。两组患者一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究通过医院医学伦理会同意。

1.2治疗方法

1.2.1肝动脉栓塞所有患者均给予TACE治疗，应用Seldinger技术，局麻下行股动脉穿刺，插入导管，造影，观察肿瘤组织血供，明确主要供血动脉，插入导管至供血动脉内，栓塞肿瘤供血动脉注入化疗药物，常用药物奥沙利铂、亚叶酸钙、替加氟、丝裂霉素等。结束后拔出导管，局部加压包扎，制动24 h。常规心电监护，观察生命体征，观察是否有病情变化、保肝等治疗。

1.2.2T细胞克隆技术研究组在TACE术后大约1周行T细胞克隆生物治疗。患者在术前采集外周血进行T细胞培养。每次TACE+T细胞克隆序贯治疗间隔时间为4～6周，随访6个月～1年，每个治疗周期后评价病情。经病理、影像等相关检查证实的结肠癌肝转移患者，行规律肝动脉化疗栓塞治疗，并且控制稳定后，所有患者治疗前采静脉血进行免疫评估，并行免疫功能重建，再根据不同免疫情况对T细胞行培养增殖，回输入患者体内，连续3个疗程。具体过程如下：（1）外周血单个核细胞的分离：采集患者静脉血80mL，用聚蔗糖400（Lympholyte-H，Cedarlane产品）分离单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs），经生理盐水洗涤细胞3次后备用。（2）DC细胞的分离及体外培养：PBMCs悬浮于DC培养基后，在培养皿内37℃贴壁培养3 h，悬浮细胞用于T细胞培养，贴壁细胞培养于DC培养基中并添加GM-CSF 1000 U/mL和IL-4 1000 U/mL，培养第4天添加相应肿瘤抗原提取物，培养第5天添加TNF-α1 ng/mL，培养第7天后对DC细胞表型（CD80/CD83/CD86/HLADR）进行检测分析，微生物及内毒素检验合格后收集DC，按方案回输至患者皮下。（3）T细胞的体外培养和扩增：将贴壁处理后的悬浮细胞用T细胞培养基悬浮并调细胞密度为2×106/mL，添加IL-2 1000 U/mL、CD3McAb 50 ng/mL。此后每2天计数细胞并适当补充新鲜培养基。分别在培养的第10天、第12天和第14天进行细胞表型、微生物及内毒素检测，各项指标符合要求后收集T细胞、洗涤，按方案回输至患者静脉内。主要材料及仪器：日本泰尔茂公司提供的RH导管及1.5 m超滑导丝，北京医疗设备厂提供的电热恒温水浴锅，日本奥林巴斯（Olympus）公司提供的BX41显微镜，上海安亭科学仪器厂提供的LXJ-B离心机，上海安亭科学仪器厂提供的TGL-16B高速离心机，日本三洋电器集团提供的MC0-15AC二氧化碳培养箱，美国Thermo公司提供的1300 series B2 100%外排生物安全柜，成都金凤液氮罐厂提供的YDS-35-80液氮罐，上海之信仪器有限公司提供的LX200手掌型离心机，美国奥林巴斯Olympus公司提供的CKX31显微镜，丹麦NUNC公司提供的96孔细胞培养板，美国Axygen公司提供的微量加样枪头，美国Eppendorf公司提供的离心管，美国ABI公司提供的ABI3730DNA分析仪及GeneMapper软件。

1.3评价方法

临床疗效判断［5］：包括完全缓解（CR）：所有目标病灶消失；部分缓解（PR）：基线病灶长径总和缩小超过30%；无变化（SD）：基线病灶长径总和有缩小但未达PR或有增加但未达PD；进展（PD）：基线病灶长径总和增加超过20%或出现新病灶。完全缓解+部分缓解=总有效。采用流式细胞术分析T细胞亚群评估患者免疫功能情况，所有荧光标记的流式细胞抗体均购自美国BD公司，细胞表面标记分析和细胞内标记分析按说明书操作。

1.4统计学处理

采用SPSS15.0统计学软件对数据进行分析，计数资料采用［n（%）］表示，采用χ2检验，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组临床疗效比较

见表1。与对照组比较，研究组总有效率更高，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1　两组临床疗效比较［n（%）］

2.2两组患者治疗后外周血T细胞亚群变化

见表2。与对照组比较，研究组治疗后总T细胞亚群、CD4+T细胞亚群、CD8+T细胞亚群高于对照组，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。

表2　两组患者治疗后外周血T细胞亚群变化［n（%）］

3　讨论

结肠癌容易发生肝脏转移，部分患者在确诊时已经发生肝转移。发生肝转移后虽然部分患者可通过肝切除术获得一定的5年生存率，但是手术适应证要求较严格，并且术后容易发生复发。手术并不能根本上解决结肠癌。保守治疗包括全身化疗以及其他的姑息性治疗，但毒副作用较大，并且效果较差，影响患者的生存质量。经肝动脉介入化疗能够直接将化疗药物送至病变处，具有更高的针对性，效果优于全身化疗，并且全身毒副作用较小，两者联合，效果优于单纯使用全身化疗。生物治疗已经成为恶性肿瘤治疗的第四种模式。自体T细胞过继免疫治疗作为生物治疗中最主要的方法之一已经广泛应用于临床的治疗，该治疗符合生理低毒高效的特点，有着巨大的治疗潜力和生命力，是未来肿瘤治疗的发展方向。虽然近年自体T细胞过继免疫治疗技术取得了长足的发展，但由于缺乏客观评价方法，导致体外培养的细胞不能被有效地质控监测，回输至患者体内后其疗效又不能被准确和及时地评价，而阻碍了这项新技术规范化与标准化的实施。过继性免疫治疗是肿瘤生物治疗的方法之一。

研究证实，肿瘤的发生与发展与机体的免疫功能状态密切相关，肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群的比例常发生变化［6-8］。而且在结肠癌肝转移中也不例外。本研究中经自体T细胞过继治疗后，24例总T淋巴细胞比例升高，CD4+T淋巴细胞比例获显著改善者22例，CD8+T淋巴细胞亚群比例升高者21例。这些结果说明自体T细胞过继治疗确实能改善患者体内淋巴细胞比例，也提示该疗法可以不同程度地提高患者抗肿瘤免疫应答能力。因为CD8+T细胞是杀伤肿瘤细胞的主力，CD4+T细胞对于维持长期免疫记忆十分重要［9，10］。还有其他一些淋巴细胞亚群的变化也可能作为评价免疫功能指导临床工作的指标，如检测辅助性纯真、记忆T细胞亚群，杀伤性纯真、记忆T细胞亚群可以了解机体内免疫应答基础及活跃程度［11-13］。检测免疫效应T细胞亚群，如CD4+/CD8+/CD45RA+/CD45RO+/ CD62L+，可以了解肿瘤的负荷情况和抗肿瘤细胞免疫应答的活跃程度［14，15］。另外，检测调节性T细胞亚群（CD4+/CD25+/Foxp3+及CD8+/CD28+），可以了解体内抗肿瘤细胞免疫应答受到抑制的情况，这些T淋巴细胞亚群有待于今后临床应用的实践。

综上所述，肝动脉栓塞联合T细胞克隆治疗结肠癌肝转移能够改善患者的预后，改善患者的免疫状态，有利于肿瘤细胞的清除。

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Clinical study of hepatic artery embolization combined with T cell cloning technology in the treatment of liver metastasis from colon cancer

CHENWensheng FENG Yan HAO Zhongchen HOU Chuanwei WAGN Zhenqi ZHAO Lei SUN Qingchun
Interventional Section，the General Hospital of Jilin Chemical Group Company，Jilin 132022，China

R735.35

B

1673-9701（2016）15-0009-03

吉林省卫生计生委科研计划（2013Z096）

2016-03-25）