右美托咪定联合肢体远程缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

武　懿　刘晶晶　李玲芝

(河北大学附属医院麻醉科，河北　保定　071000)



右美托咪定联合肢体远程缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

武懿刘晶晶1李玲芝

(河北大学附属医院麻醉科，河北保定071000)

目的探讨右美托咪定(DEX)联合肢体远程缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注(IRI)的保护作用。方法选取成年雄性SD大鼠60只，按随机数字表法分为对照组、DEX后处理组DEX组、远程缺血后处理组(远程缺血组)和联合处理组(联合组)各15只。通过采用线拴阻闭大脑中动脉1.5 h，再灌注48 h的方法建立大鼠局灶性脑IRI模型，其中对照组大鼠给予缺血期分离左股动脉，再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理盐水处理；DEX组给予缺血期分离左股动脉，再灌注前15 min腹腔注射10 ml 3 μg/kg的盐酸DEX处理；远程缺血组给予缺血期钳夹夹闭左股动脉15 min后恢复血流10 min，循环3次，大脑中动脉再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理盐水处理；联合组进行DEX、远程缺血组的联合处理。24 h后进行大鼠脑神经功能缺损评分(NDS)，48 h后以Image J软件测量大鼠的脑梗死面积比例。结果DEX、远程缺血、联合组的NDS评分及脑梗死面积比例均显著低于对照组，且联合组低于DEX、远程缺血组(P<0.05)；而DEX、远程缺血组比较无统计学差异(P>0.05)。结论DEX及肢体远程缺血后处理均可显著改善大鼠的局灶性脑缺血再灌注损伤，二者联合处理具有协同保护作用。

脑缺血再灌注损伤；右美托咪定；肢体远程缺血后处理

随着溶栓术、心脏搭桥术等血管疏通术的广泛应用，缺血再灌注损伤(IRI)成为临床医师急需解决的重大难题。肢体远程缺血后处理法是一种脑损伤保护措施〔1〕。右美托咪定(DEX)是临床常用的一种镇静类药物。有研究发现〔2〕，其对大鼠脑IRI具有保护作用。但DEX联合肢体远程缺血后处理法的临床研究较少。本研究旨在通过建立大鼠中动脉阻塞(MCAO)线栓模型观察二者的联合处理效果。

1　材料与方法

1.1实验动物选择60只清洁级成年雄性SD大鼠(由北京动物实验中心 提供)，6～10周龄，体质量240～300 g。于动物实验室适应性饲养1 w，室温(25.0±2.0)℃，自然光照。

1.2实验分组与大鼠模型制备根据随机数字表法分为对照组、DEX后处理组(DEX组)、远程缺血后处理组(远程缺血组)和联合处理组(联合组)各15只。参照改良的Longa等〔3〕的线栓法建立大鼠大脑MCAO线栓模型：禁食12 h后，采用10%水合氯醛麻醉大鼠，仰卧固定，逐层解剖分离颈部腺体、肌肉组织，暴露右侧颈动脉，结扎翼鄂动脉，由颈总动脉分叉处推送合适型号的尼龙栓线至有抵触感(深度约18 mm)。缺血1.5 h后拔出线栓进行中动脉血流再灌注。实验过程中保持大鼠体温(37.0～37.5)℃。

1.3处理方法对照组：模型制备时缺血1.5 h期间分离左股动脉，血流再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理盐水，再灌注48 h。DEX组：模型制备时缺血1.5 h期间分离左股动脉，血流恢复前15 min腹腔注射10 ml剂量为3 μg/kg的盐酸DEX(江苏恩华药业股份有限公司)，恢复血流再灌注48 h。远程缺血组：模型制备时缺血1.5 h期间分离左股动脉，使用钳夹夹闭15 min后放开10 min，循环3次，大脑中动脉恢复再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理盐水，再灌注48 h。联合组：采用DEX组和远程缺血组的联合处理方法。

1.4观察指标

1.4.1神经功能缺损评分(NDS)大鼠苏醒后置于鼠笼内，自由进水饮食。脑缺血再灌注24 h进行NDS评分，根据大鼠的活动情况及意识表现进行评估，评分越高表示大鼠的神经功能缺损状况越严重。以无功能障碍计为0分，无法伸展左前肢为1分，向左侧旋转为2分，向左侧倾倒为3分，无自主活动伴意识丧失为4分，死亡为5分；

1.4.2脑梗死面积比例再灌注48 h后麻醉大鼠，断头处死，迅速取出大鼠脑组织置于-20℃冰箱中冰冻20 min。于冠状面均匀制成5～6片厚度为2 mm的切片，分别经2%氯化三苯四唑(TTC)染色20 min、甲醛缓冲液固定10 min。染色后粉红色组织为正常脑组织，白色区域为脑梗死区。24 h后以Image J软件计算所有切片的脑梗死面积比例之和。脑梗死面积比例=梗死区面积/总面积×100%，用于反映脑梗死的严重程度。

1.5统计学方法采用SPSS14.0软件进行单因素方差分析、SNK-q检验。

2　结　果

再灌注24 h后，四组大鼠NDS有统计学意义(F=19.201，P=0.000)，两两比较，DEX、远程缺血、联合组的NDS均显著优于对照组，且联合组优于DEX、远程缺血组(P<0.05)。而DEX、远程缺血组比较无统计学差异(P>0.05)。再灌注48 h后，四组大鼠脑梗死面积比例总体有统计学意义(F=24.358，P=0.000)，两两比较，DEX、远程缺血、联合组均显著低于联合组，且联合组比例低于DEX、远程缺血组(P<0.05)。而DEX、远程缺血组比较无统计学差异(P>0.05)。见表1。

表1　四组大鼠NDS、脑梗死面积比例比较

与对照组比较:1)P<0.05；与联合组比较:2)P<0.05

3　讨　论

IRI病因与发病机制十分复杂，涉及血流动力学、细胞分子、能量代谢障碍等诸多因素，且各因素互为因果、相互关联，通过级联反应，最终导致细胞的凋亡或坏死。IRI是造成患者致残及死亡的重要原因，由于大脑中动脉是脑梗死患者的最常见发病部位。研究发现〔4〕，DEX及肢体远程缺血后处理可增加组织器官对IRI的耐受性，减轻IRI。

DEX是一种新型的肾上腺受体激动剂，具有镇静、抗焦虑、稳定血流动力学等作用，广泛应用于手术麻醉等过程中，其对机体多脏器亦具有保护作用。本研究提示DEX对脑IRI具有保护作用，与以往研究结果相符〔5〕。关于其作用机制，有研究认为可能与其抑制细胞凋亡和交感神经的兴奋、减少脑内兴奋性神经递质的释放和炎症因子等作用有关，也有研究发现其对海马区神经元具有保护作用〔6〕。

远隔缺血后适应(RPC)是指通过对远隔器官采用短暂的非致死性的缺血再灌注处理措施，可减轻缺血器官的IRI。于2005年由Kerendi等〔7〕首次提出，其发现采用阻断肾动脉5 min、再灌注1 min处理对大鼠缺血心肌具有保护作用，心肌梗死面积较对照组减少50%。目前该处理方法的保护作用已在缺血的脑〔8〕、肾脏〔9〕等器官中得到证实。四肢由于对缺血较耐受，因此肢体远程缺血后处理成为对缺血器官进行保护的重要措施。本研究结果说明肢体远程缺血后处理对脑IRI具有保护作用，与既往研究结果相符〔10〕。对其作用机制目前尚未完全阐明，而研究认为其主要与抑制IRI过程中脏器的炎性反应、调节免疫系统有关〔11〕。同时也有研究认为其与传入神经通路和氧化-内质网应激信号通路有关〔12〕。本研究结果发现，DEX与肢体远程缺血后处理的联合处理效果显著优于二者的单独处理效果，说明二者对大鼠局灶性脑IRI具有协同作用，与李刚等〔13〕的研究结果一致。这可能与二者共同作用于多个靶点或启动多种保护机制有关。但这仅为小样本动物实验的结果，临床应用还有待大样本实验及临床研究的进一步探索。

1常莉莎.远隔肢体缺血后适应对大鼠脑缺血TLR4介导的保护作用机制的研究〔D〕.天津：天津医科大学，2014.

2史曼，黄青青.右美托咪定的临床应用研究进展〔J〕.现代医药卫生，2011；27(7)：1022-4.

3Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，etal.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats〔J〕.Stroke，1989；20(1)：84-91.

4张晓峰.蛋白激酶C在电针预处理和远程缺血后处理诱导脑保护中的作用〔D〕.西安：第四军医大学，2010.

5林生.右美托咪定对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制〔D〕.济南：山东大学，2013.

6Slosberg PS.The neuroprotective effect of dexmedetomidine in the hippocampus of rabbits after subarachnoid hemorrhage〔J〕.Surg Neruol，2009；72(6)：648.

7Kerendi F，Kin H，Halkos ME，etal.Remote postconditioning.Brief renal ischemia and reperfusion applied before coronary artery reperfusion reduces myocardial infarct size via endogenous activation of adenosine receptors〔J〕.Basic Res Cardiol，2005；100(5)：404-12.

8Wang Q，Zhang X，Ding Q，etal.Limb remote postconditioning alleviates cerebral reperfusion injury through reactive oxygen species-mediated inhibition of delta protein kinase C in rats〔J〕.Anesth Analg，2011；113(5)：1180-7.

9冷玉芳，姚爱军.肢体缺血后处理和肾脏缺血后处理对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤的影响〔J〕.临床麻醉学杂志，2009；25(11)：974-7.

10刘强.远隔缺血后适应对大鼠局灶脑缺血-再灌注炎性损伤的保护作用及其机制的研究〔D〕.济南：山东大学，2014.

11Shimizu M，Sexena P，Konstantinov IE，etal.Remote ischemic preconditioning decreases adhesion and selectively modifies functional responses of human neutrophils〔J〕.J Surg Res，2010；158(1)：155-61.

12Anrather J，Hallenbeck JM.Biological networks in ischemic tolerance-rethinking the approach to clininal conditioning 〔J〕.Transl Stroke Res，2013；4(1)：114-29.

13李刚，王袁，赵娇妹，等.右美托咪定联合远程缺血后处理增强脑保护效应的研究〔J〕.重庆医学，2014；43(36)：4849-51.

〔2016-02-15修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.027

刘晶晶(1981-)，女，硕士，主治医师，主要从事临床麻醉及药理学研究。

武懿(1979-)，女，硕士，主治医师，主要从事临床麻醉及药理学研究。

R743

A

1005-9202(2016)14-3413-02；

1武警北京市总队第二医院麻醉科