高效液相色谱法测定硫酸阿托品的含量

2016-08-12 01:53高武吴勇
安徽医药 2016年7期
关键词:阿托品色谱法回收率

高武,吴勇

(1.国药集团精方(安徽) 药业股份有限公司,安徽 宣城 242000;2.马鞍山市食品药品检验中心,安徽 马鞍山 243000)



高效液相色谱法测定硫酸阿托品的含量

高武1,吴勇2

(1.国药集团精方(安徽) 药业股份有限公司,安徽 宣城242000;2.马鞍山市食品药品检验中心,安徽 马鞍山243000)

摘要:目的建立一种用HPLC法测定硫酸阿托品含量的方法。方法色谱柱:Agilent Eclipse X DB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:0.05 mol·L-1KH2PO4溶液(含庚烷磺酸钠0.002 5 mol·L-1)-乙腈(84∶16)(用磷酸或氢氧化钠试液调节pH值至5.0);检测波长:225 nm;柱温30℃;流速1.0 mL·min-1。结果硫酸阿托品在2.6425~42.48 mg·L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。回归方程为A=11 938C-1348 8,r=0.999 9(n=3),回收率为:100.19%,RSD 为1.33% 。结论HPLC法操作简单,可靠,准确性及重现性好。

关键词:色谱法,高压液相;阿托品;回收率

硫酸阿托品属于莨菪碱类生物碱,是临床上常用的处方药,其作用原理主要是与毒蕈碱型胆碱受体(简称M受体)相结合,竞争性拮抗乙酰胆碱或其它胆碱受体激动药的作用。药理作用主要表现减少腺体分泌、抑制胃肠道及膀胱平滑肌兴奋、松弛瞳孔括约肌使瞳孔扩大、升高眼压、心率加快、治疗量的阿托品可轻度兴奋延髓及迷走神经的兴奋。临床上常用于缓解各种内脏绞痛,眼科扩瞳用于验光配眼镜、眼底检查、治疗虹膜睫状体炎症,全身麻醉前给药用于减少腺体的分泌,治疗缓慢型心律失常、各种感染性休克及有机磷类农药中毒的抢救[1-2]。硫酸阿托品使用不当可引起不良反应,故相关制剂研究较多,如有LC-MS、毛细管电泳、HPLC法等[3-6],硫酸阿托品片及注射液标准收载于中国药典,其含量测定方法为酸性染料比色法[7],但实际操作过程中较繁琐,且准确性及重复性不高,因而建立更为简便的液相色谱法,为相关的制剂含量测定作参考。

1 仪器与试药

1.1仪器Waters 2695高效液相色谱仪, 2998检测器,Empower 2色谱工作站(美国 waters 公司);梅特勒AL-104电子天平,Sartorius BP211D电子天平,JK-2200 超声仪(合肥金尼克机械制造有限公司),METTLER TOLEDO FE 20 pH酸度计。

1.2试药硫酸阿托品对照品(购自中国食品药品检定研究院,批号为100040-201011,供含量测定用,按(C17H23NO3)2·H2SO4计,含量为96.5%),硫酸阿托品注射液与片剂为市场上抽查品种,水为纯化水,乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件[2]色谱柱:Agilent Eclipse X DB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:0.05 mol·L-1KH2PO4溶液(含庚烷磺酸钠0.0025 mol·L-1)-乙腈(84∶16)(用磷酸或氢氧化钠试液调节pH值至5.0);柱温为30℃;检测波长:225 nm;流速为1.0 mL·min-1。

2.2溶液的制备

2.2.1供试品溶液的制备将硫酸阿托品片剂碾碎,精密称取供试品适量(约相当于硫酸阿托品2.5 mg),置50 mL容量瓶中,加30 mL水超声使溶解,加水稀释至刻度,摇匀,滤过,即得。注射剂精密量取直接稀释即可。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取硫酸阿托品对照品适量,置100 mL容量瓶中,加水60 mL超声使溶解后,定容,摇匀,即制成对照品溶液(每1 mL约含100 μg的溶液)。

2.3测定法分别取供试品溶液和对照品溶液于色谱用测试瓶中,进样量为20 μL,注入高效液相色谱仪,测定,即得HLPC 色谱图,见图 1。

A.对照品

B.供试品 图1 HPLC色谱图

2.4系统适宜性按2.1项下色谱条件进行测定,硫酸阿托品主峰应与相邻色谱峰的分离度符合要求,理论塔板数应不低于5 000。

2.5线性范围考察取对照品溶液,按上述色谱条件,以Waters自动进样器分别进样5、10、20、30、40、60及80 μL,注入Waters液相色谱仪中,记录硫酸阿托品的色谱图,峰面积分别为46 487.67、100 044、227 664.5、345 772、469 653.3、700 985.3、939 798,以色谱图中硫酸阿托品峰面积A为纵坐标,对照品的浓度C(mg·L-1)为横坐标,绘制相应的标准曲线,得硫酸阿托品的回归方程为:A=11 938C-13488,r-0.9 999(n=3),结果表明硫酸阿托品浓度在2.6425~42.48 mg·L-1范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。

2.6精密度试验取2.2.2项下的对照品溶液,按2.1项下的色谱条件连续进样6针,测得硫酸阿托品的色谱峰面积分别为224489、223916、230142、232629、227287、227524,RSD为1.46%,表明该方法精密度良好。

2.7稳定性试验取同一批次硫酸阿托品供试品溶液,分别在0、1、2、4、8及12h取样测定,结果硫酸阿托品峰面积17500、18500、19580、19580、17580,RSD为0.26%,表明硫酸阿托品供试品溶液在12 h内稳定。

2.8重复性试验取同一批次硫酸阿托品供试品,按“供试品溶液制备”项下方法制备供试品溶液 5 份,精密进样 20 μL进行测定峰面积分别为289376、287531、291152、285531、290180,RSD 为0.78%,表明该方法重复性良好。

2.9加样回收试验取已知含量的硫酸阿托品供试品共 6 份,精密加入相同量的对照品溶液进行平行操作,分别按样品含量测定方法进样进行测定,计算硫酸阿托品的回收率。结果见表 1。平均回收率为100.19%,RSD 为1.33% 。

表1 回收率实验结果(n=3)

2.10样品的含量测定按上述溶液的制备2.2项下的方法配制相应的供试品溶液及对照品溶液,按“2.1”项下方法进样进行测定,记录相应的硫酸阿托品色谱图,按外标法以硫酸阿托品的峰面积进行计算,即得。结果见表2。

表2 样品测定结果(n=3)

3 讨论

硫酸阿托品片剂及注射液的含量测定采用酸性染料比色法,先用三氯甲烷提取,再用溴甲酚绿显色,用紫外分光光度法测定,该操作比较繁琐,且三氯甲烷毒性较大,不利于环保,用分液漏斗提取过程较复杂,测定过程中吸收波长不在给定波长处等影响因素较多,使得测定的结果重复性极差,因而对提高标准势在必行。

流动相及色谱条件的选择:参照相关文献及中国药典中硫酸阿托原料中有关物质的测定方法,发现药典中测原料有关物质的色谱条件测硫酸阿托品含量更简便可行,这与药典中大多数药品的含量测定与有关物质的测定方法相同相吻合[8-10]。

本法测硫酸阿托品,同时用Agilent 1260及Kromasil C18,Hypersil C18色谱柱测定,均能取得相近的结果,说明本法适用性好。此外,测试中无其它杂质峰的干扰,简化了实验操作,与现行的标准相比[7],本法操作更简便,准确度、精密度更高,可用于硫酸阿托品类相关药品的质量控制,具有较好的实际应用价值。

参考文献

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[3]徐洁,胡文卉,顾冬飞,等.联用技术鉴定与测定硫酸阿托品有关物质[J].中国药科大学学报,2014,45(4):438-443.

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[9]李启彬,李树立.高效液相色谱法测定硫酸阿托品注射液的含量[J].临床合理用药杂志,2014,7(8A)59-60.

[10] 陈德俊,徐志洲,张雷,等.HPLC测定硫酸阿托品片的含量及含量均匀度[J].中国现代应用药学,2015,32(7)853-855.

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.07.016

(收稿日期:2016-02-11,修回日期:2016-04-09)

Determination of Atropine Sulfate by HPLC

GAO Wu1,WU Yong2

(1.SinopharmGroupJingfang(Anhui)PharmaceuticalCo.Ltd,Xuancheng,Anhui242000,China;2.Ma’anshanCenterforFoodandDrugInspection,Ma'anshan,Anhui243000,China)

Abstract:ObjectiveTo establish a method for the analysis of Atropine Sulfate by HPLC.MethodsThecolumnwas Agilent Eclipse X DB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm).The mobile phase consisted of 0.05 mol·L-1potassium dihydrogen phosphate solution(containing 0.002 5 mol·L-1sodium heptanesulfonate) -acetonitrile(84∶16)(the pH value adjusted to 5.0 by phosphoric acid or sodium hydroxide solution).The detection wavelength was set at 225 nm with a column temperature at 30℃,and the flow rate was 1.0 mL·min-1.ResultsThe linear range was 2.6425~42.48 mg·L-1.The regression equation was A=11 938C-13 488,r=0.9 999(n=3).The average recovery was 100.19% and RSD was 1.33%.ConclusionThis method of operation is simple,reliable,accurate and well reproducible.

Key words:Chromatography,high pressure liquid;Atropine;Retrieving rate

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