正交试验法优选山麦莱口服液的提取工艺

蒲秀峰，汪霞平，杨劝生

（甘肃天水岐黄药业有限责任公司，甘肃　天水　741018）

正交试验法优选山麦莱口服液的提取工艺

蒲秀峰，汪霞平，杨劝生

（甘肃天水岐黄药业有限责任公司，甘肃天水741018）

山麦莱口服液是一种新型保健饮品，具有消食、除积、助消化的多种功能。其主要功效成分为黄酮，研究不同提取条件对山麦莱中总黄酮含量的影响，相同条件下，不同溶剂提取；相同溶剂，不同提取方法提取。根据实验结果，同样条件下，超声波提取方法简单、得率高、剩余物无有害残留，可以综合利用。

正交试验法；山麦莱口服液；黄酮

山麦莱口服液是根据元代著名医家朱丹溪《丹溪心法》之保和丸等医家名方，由我国著名老中医胡伯虎开发而成的一种新型保健饮品，具有消食、除积、助消化等多种功能。该饮料的处方为山楂、麦芽、莱菔子、陈皮，其主要功效成分为黄酮。为了使该饮料的提取工艺更加合理可靠，本试验以黄酮含量和出膏率为考察指标，采用正交实验设计，优选其最佳提取工艺。

1　仪器与试剂

JYT—1架盘药物天平（上海光正医疗仪器有限公司马头牌）；AS系列超声波清洗机（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；HH—6型智能数显恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）；干燥器（国营上海医疗厂）；BP211D分析天平（德国赛多利斯公司生产）；UV—5300PC型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。

实验所用药材均购于天水天森药业公司，符合2010年版《中华人民共和国药典》（一部）相关规定；芦丁对照品购于中国药品生物制品检定所；聚酰胺粉（上海中秦化学试剂有限公司）；其余试剂为分析纯。

2　方法与结果

山麦莱饮料处方中山楂为君药，黄酮为主要功效成分，本实验采用超声水提取的制备方法，选取提取时间A、提取温度B和提取次数C作为提取工艺的3个因素（见表1），进行正交试验。

表1　正交试验因素水平表

2.1山麦莱饮料中黄酮的测定

2.1.1试样处理

称取10 ml的试样，加乙醇定容至25 ml，摇匀后，超声提取20 min，放置，吸取上清液1.0 ml，于蒸发皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20 ml苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25 ml。此液于波长360 nm测定吸收值。同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量。

2.1.2芦丁标准曲线

吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml于10 ml比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于波长360 nm比色。求回归方程，计算试样中总黄酮含量。

2.1.3计算和结果表示：

X=A×V2×100/V1×M×1 000

式中：X—试样中总黄酮的含量，mg/100 g；

A—由标准曲线算得被测液中黄酮量，μg；

M—试样质量，g；

V1—测定用试样体积，ml；

V2—试样定容总体积，ml。

计算结果保留二位有效数字。

2.2出膏率的测定

取原药材的量，共20 g，取9份，按照（L933）正交试验的方法进行提取，滤过，浓缩。将浓缩液置于鼓风干燥箱中烘干后，精密称定所得干膏质量，计算出膏率。

出膏率=干膏质量/原药材质量×100%

2.3试验结果

（1）正交试验结果的统计分析

实验共有9个观测值及实验组（见表2），总变异由A、B、C因素变异及误差变异四部分组成，分析时平方和与自由度的计算式为：

平方和SST=SSA+SSB+SSC+SSe

自由度dfT=dfA+dfB+dfC+dfe

a=b=c=3表示A、B、C三个因素的水平数，ka=kb= kc=3表示不同因素对应的每个水平的重复次数。

表2　山麦莱口服液的正交试验与分析（L933）

（2）下面对出膏率（%）单独进行各个因素（见表3～表6）观测值正交试验结果的方差分析：

表3　C因素对标准观测值的方差分析表

表4　A因素对标准观测值的方差分析表

表5　B因素对标准观测值的方差分析表

表6　　山麦莱口服液的出膏率（%）正交试验结果的方差分析表

统计结论：

由于df1=df2=1，查临界F值表，得F0.05（1，1）=161，F0.0，1（1，1）= 405。FA＜F0.05（1，1）对应的概率值pA＞0.05，差异不显著；F0.05（1，1）＜FB＜F0.0，1（1，1），对应概率0.01＜pB＜0.05，差异显著；

FC＜F0.05（1，1），pA＞0.05，所以差异不显著。

根据上述分析，对于出膏率，提取温度间的差异显著，即温度的变化对实验测量指标有影响，而提取时间和次数对出育率的影响不是很大。

（3）黄酮含量进行各个因素观测值正交试验结果的方差分析，具体见表7～表10。

表7　A因素对标准观测值的方差分析表

表8　B因素对标准观测值的方差分析表

表9　C因素对标准观测值的方差分析表

表10　山麦莱口服液的黄酮含量正交试验结果的方差分析表

（4）统计结论：

由于df1=df2=1，查临界 F值表，得F0.05（1，1）=161，F0.0，1（1，1）=405。FA＜F0.05（1，1）概率值 pA＞0.05，差异不显著；FB＜F0.05（1，1），差异不显著；FC＜F0.05（1，1），差异不显著。

3　结束语

由方差分析结果可以看出：以出膏率为考察指标时，因素C的影响比较显著，且C＞A，因素B的影响不显著；通过极差大小分析，可以得出结论，影响水提效果的顺序为C＞A＞B，因此最佳提取工艺为A1B2C3。以黄酮含量为考察指标时，C因素的影响比较显著，且C＞B＞A，A因素影响不显著；通过极差大小分析，可以得出结论，影响水提效果的顺序为C＞B＞A，因此最佳提取工艺为A1B2C3。因此，可以确定水提取最佳工艺为A1B2C3，即加热到70℃，提取40 min，提取3次。

［1］ 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂（第8册）［S］.北京：人民卫生出版社，1993：131.

［2］ 赵焕谆，丰宝田.中国果树志一山楂卷［M］.北京：中国林业出版社，1996.

［3］ 中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典2010年版一部［M］.北京：化学工业出版社，2010.

［4］ 李化，杨滨.山楂的炮制研究［J］.中国中药杂志.2004，29 （6）：501-504.

［5］ 中国林业科学院.中国树木志（第二卷）［M］.北京：中国林业出版社.1985.

［6］ 李苑，张敏.中草药中黄酮类化合物质提取工艺的研究［J］.广东药学杂志，1999（2）：4-6.

［7］ 张世润，王立娟.山楂叶中黄酮类化合物提取工艺条件的筛选［J］.东北林业大学报，2001，23（5）：289-291.

［8］ 卫生部卫生法制与监督司编.保健食品检验与评价技术规范［M］.北京：人民卫生出版社，2003.

TQ461

A

10.3969/j.issn.1672-6375.2016.04.029

2015-12-15

蒲秀峰（1974-），女，汉族，甘肃天水人，大学本科，助理工程师，主要从事中草药的提取研究、制剂工艺与标准研究等工作。