DcR3蛋白在鼻咽癌组织中表达的临床意义及其与EB病毒关系的研究

杜玉晓+王彩红+王军+陈炳强+刘翠

【摘要】 目的 研究诱捕受体3（DcR3）蛋白在鼻咽癌中表达的临床意义， 并探讨在鼻咽癌组织中DcR3与EB病毒（EBV）的关系。方法 采用免疫组化SABC法检测40 例鼻咽鳞状细胞癌组织中DcR3蛋白的表达情况， 同时应用癌旁正常组织和40例鼻咽正常组织做对照。并用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测40例鼻咽癌组织中EBV的阳性率， 探讨两者之间的关系。结果 鼻咽癌组织中DcR3蛋白的阳性表达明显高于癌旁正常组织及正常鼻咽组织（P<0.05）， 癌旁正常组织与正常鼻咽组织中DcR3的表达差异无统计学意义（P>0.05）；DcR3的表达与淋巴结转移、临床分期、病理分级有关（P<0.05）， 与患者年龄和性别无关（P>0.05）；鼻咽癌组织中EBV的阳性率为72.50%， DcR3在EBV阳性的鼻咽癌组织中呈高表达， 在鼻咽癌阴性的组织中呈低表达， 差异有统计学意义（P<0.05）。结论 DcR3蛋白在鼻咽癌组织的高表达， 可作为判断鼻咽癌分化、浸润、转移的重要指标， 其与EBV共同作用促进了鼻咽癌的发生、转移及不良预后。

【关键词】 鼻咽肿瘤；诱捕受体3；EB病毒

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.20.028

DcR3是肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族的新成员。EBV是一双链DNA病毒， 属于疱疹病毒科。在鼻咽癌中DcR3的表达及与EBV的关系国内外鲜见报道， 本文作者采用免疫组化SABC法对鼻咽癌中的DcR3蛋白进行检测， 并用RT-PCR的方法检测EBV的阳性率， 探讨DcR3在鼻咽癌发生、发展中的作用， 及其与EBV的关系， 现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 40例鼻咽癌组织及相应癌旁正常组织取自2010年1月～2015年12月在平煤神马医疗集团总医院耳鼻咽喉头颈外科住院活检的鼻咽癌患者， 40例鼻咽正常组织来源于行鼻内窥镜手术的非肿瘤患者。术前均未接受放、化疗， 诊断均经病理学检查证实。

1. 2 主要实验仪器及设备 ABI 7300 Real Time PCR system， Benchmark XT 全自动免疫组化染色仪。

1. 3 方法

1. 3. 1 免疫组织化学SABC法主要试剂：一抗， 鼠抗人免疫球蛋白（Ig）G 型 DcR3蛋白单克隆抗体（美国eBioscience公司）。即用型广谱SABC组化试剂盒及显色试剂盒均购自武汉博士德公司；具体操作按照试剂盒上的操作完整。DcR3阳性表达为胞浆着棕黄色。无着色或着色<25%为阴性（-）， 着色范围25%～50%为阳性（+）， 着色范围>50%为强阳性（++）。所有切片由病理科医生协助阅片判读。

1. 3. 2 RT-PCR方法：总DNA抽提试剂盒购于凯杰公司， 荧光定量PCR试剂盒购于中山达安公司。具体操作按照试剂盒上操作完成。所有检测结果均由具备卫计委临床检验中心PCR上岗证的工作人员协助判读。

1. 4 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件进行统计分析。实验数据比较采用非参数检验法。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 DcR3在鼻咽癌组织、癌旁正常组织和正常鼻咽黏膜组织中的表达 鼻咽癌组织中DcR3蛋白的表达明显高于癌旁正常组织和正常鼻咽组织（P<0.05）。见表1。DcR3在各鼻咽组织中的表达见图1， 图2， 图3。

2. 2 DcR3在鼻咽癌组织中的表达与临床病理参数的关系

DcR3的表达与淋巴结转移、临床分期、病理分级有关（P<0.05）， 与患者年龄和性别无关（P>0.05）。见表2。

2. 3 DcR3表达与EBV的关系 鼻咽癌组织中EBV的阳性率为72.50%， DcR3在EBV阳性鼻咽癌组织呈高表达， 在鼻咽癌阴性组织呈低表达， 差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

3 讨论

DcR3是一种新发现的TNFR超家族成员， 属于分泌性的非膜联接的蛋白分子， 广泛存在于肿瘤组织中， 能抑制细胞凋亡， 并参与肿瘤细胞的免疫逃逸。文献报道[1]， DcR3蛋白及基因在人类的许多恶性肿瘤如肝癌、胃肠道肿瘤、胰腺癌、乳腺癌等呈高度表达状态， 提示DcR3具有高度的肿瘤特异性。Weissinger 等[2]研究发现在肾细胞癌中DcR3与integrinα4、MMP7、uPA均阳性表达， 与肾细胞癌的临床病理参数密切相关， 导致了肾细胞癌的局部淋巴结转移、远处转移及不良预后， 证实DcR3是通过PI3K/AKT途径导致了肿瘤的发生发展。本次研究显示DcR3在鼻咽癌组织中呈高表达， 在其临近组织中无表达或偶尔低表达。DcR3与肿瘤的淋巴结转移、临床分期及病理分化程度等临床病理参数密切相关， 与年龄和性别无关。

在一些病毒相关性肿瘤中， DcR3过度表达尤为显著。自1996年Old等首先在鼻咽癌患者血清中检测到EBV以来， 逐渐证实EBV在鼻咽癌的发病因素中的重要作用， 其拷贝数与其TNM分期密切相关。本次研究显示在鼻咽癌组织中EBV的阳性率为72.50%， 在EBV阳性组织中DcR3的表达明显高于EBV阴性组织， 差异有统计学意义（P<0.05）， 说明DcR3与EBV共同作用促进了鼻咽癌局部浸润。这与Ho等[3]关于鼻咽癌中DcR3及EBV的研究结果相一致。其可能机制为EBV转录激活RTA， 通过结合到其启动子上调DcR3的表达。也可能是EBV膜蛋白1 （LMP1） 通过NF-кB及PI3K途径上调DcR3导致了肿瘤的发生[2]。

综上所述， DcR3在鼻咽癌组织中高表达， 其与EBV共同促进了鼻咽癌的发生发展、浸润及转移。DcR3在许多恶性肿瘤组织及血清中呈阳性表达， 而其单克隆抗体的制备也在研究中， 本研究为鼻咽癌预防、生物治疗提供了理论依据。

参考文献

[1] Zhou J， Song S， Li D， et al. Decoy receptor 3 （DcR3） overexpression predicts the prognosis and pN2 in pancreatic head carcinoma. World J Surg Oncol， 2014， 12（1）：1-7.

[2] Weissinger D， Tagscherer KE， Macher-Gppinger S， et al. The soluble Decoy Receptor 3 is regulated by a PI3K-dependent mechanism and promotes migration and invasion in renal cell carcinoma. Molecular Cancer， 2013， 12（1）：3365-3370.

[3] Ho CH， Chen CL， Li WY， et al. Decoy receptor 3， upregulated by Epstein-Barr virus latent membrane protein 1， enhances naso?pharyngeal carcinoma cell migration and invasion. Carcinogenesis， 2009， 30（8）：1443-1451.

[收稿日期：2016-04-20]