高效液相色谱法测定鞣柳硼三酸散中水杨酸含量

曹桂红，黄春青，许　波，周　欣

(1.贵州省食品药品检验所，贵州 贵阳　550004；2.贵州师范大学 天然药物质量控制研究中心，贵州 贵阳　550001)



高效液相色谱法测定鞣柳硼三酸散中水杨酸含量

曹桂红1，黄春青1，许波1，周欣2

(1.贵州省食品药品检验所，贵州 贵阳550004；2.贵州师范大学 天然药物质量控制研究中心，贵州 贵阳550001)

摘要：通过采用高效液相色谱法，建立了对鞣柳硼三酸散中水杨酸的含量测定方法。以Agilent SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)为流动相，检测波长305nm，流速1.0mL/min，25℃柱温，在此优化的条件下，水杨酸在0.063 44～1.268 8μg之间线性关系良好(r=1.000 0，n=5)，回收率为101.26%，RSD为0.48%(n=9)。该方法简便、准确，可用于鞣柳硼三酸散中水杨酸的含量测定，对控制制剂质量有一定指导意义。

关键词：鞣柳硼三酸散；水杨酸；高效液相色谱法

0引言

鞣柳硼三酸散是由鞣酸、水杨酸、硼酸组成的外用复合制剂，具有防腐收敛，杀菌止痒的功效，主要用于手、足癣的治疗。收载于《国家药品标准》化学药品地方标准上升国家标准第十册[1-4]。其中水杨酸具有抗菌作用[5]，用于治疗各种慢性皮肤病如痤疮(青春痘)、癣等。该制剂的质量标准检验项目仅有性状、鉴别和检查，未对水杨酸的含量做出限定，有关水杨酸的含量测定的研究较多[6-14]，为了有效控制其质量，经过试验对制剂中的水杨酸进行了定量研究，该方法简便，结果准确可靠，重现性好，可作为该制剂中水杨酸的质量控制方法，为该品种质量标准的提高提供参考。

1仪器、试剂与药品

Agilent 1260高效液相色谱仪；色谱柱：Agilent SB-C18 4.6×250mm柱号：880975-902，梅特勒电子天平(生产地美国，仪器型号XS205)。水杨酸对照品(中国食品药品检定研究院 批号：100106-201104)、甲醇(色谱纯)、磷酸(分析纯)、乙醇(分析纯)、水(超纯水)，鞣柳硼三酸散(贵州金桥药业有限公司)。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Agilent SB-C18 (250mm×4.6mm，5μm)，检测波长：305nm，流速1.0mL/min，流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)，柱温：25℃，进样体积：10μL。

2.2溶液制备

精密称取水杨酸对照品15mg，置25mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密量取对照品储备液1mL置10mL容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取鞣柳硼三酸散10包混合均匀，研细，精密称取(约相当于水杨酸0.075g)，置50mL量瓶中，加乙醇约40mL超声10min，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL，置50mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按处方制法，配制不含水杨酸的阴性对照样品以及阴性对照溶液。结果见图1。

3方法学验证

3.1线性范围考察

取对照品溶液(质量浓度为0.063 44mg/mL)1μL、5μL、10μL、15μL、20μL注入液相色谱仪进行分析，记录色谱图，以进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程y=156 20x，r=1.000 0(n=5)，结果表明，水杨酸在进样量0.063 44μg～1.268 8μg范围内与峰面积有良好的线性关系(见图2)。

A．对照品溶液　 B.供试品溶液　 C.阴性对照品溶液图1　高效液相色谱图Fig.1　Chromatographic of HPLC

图2　标准曲线Fig.2　The standard curve line

3.2精密度试验

取同一水杨酸对照品溶液(0.063 44mg/mL)10μL，按2.1色谱条件连续进样6次，记录色谱峰面积。RSD为0.04%(n=6)，仪器的精确度良好。

3.3稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h，按2.1色谱条件进样，以峰面积计算相对标准偏差(RSD)为1.04%(n=5)。供试品溶液在8h内稳定性良好。

3.4重复性试验

取同一批样品，按上述方法制备供试品溶液6份，按2.1色谱条件进行测定，记录色谱图，计算水杨酸含量：平均含量为371.53mg/g，RSD为0.94%(n=6)；试验结果表明方法重复性良好。

3.5加样回收试验

取同一批样品9份，每份约0.1g，置50mL容量瓶中，按样品含量与对照品的量比例为80%、100%、120%，分别加入1.502mg/mL的对照品溶液20mL、25mL、30mL，按2.1色谱条件进行测定，记录色谱图，计算回收率，平均回收率为101.26%，平均RSD为0.48%。结果见表1。

表1　加样回收率试验结果(n=9)

3.6样品含量测定

取13批鞣柳硼三酸散样品，按拟定方法制备供试品溶液，按拟定色谱条件进行测定，计算水杨酸的含量，计算结果见表2。

表2　水杨酸含量测定结果(n=2)

4讨论

通过考察不同磷酸浓度(0.3%、0.4%、0.5%)对色谱峰的影响，结果表明，磷酸的浓度不同对峰的保留时间影响不大，但是对峰型有较大的影响，当磷酸浓度为0.4%时峰型较好，所以选择甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)为流动相。

比较了5种超声溶解时间：分别超声5，8，10，12，15min，结果发现超声10min后便已溶解完全，故选用超声10min。

为考察实验条件的微小变化对分析结果可能带来的影响，实验分别考察色谱仪、色谱柱、柱温、流动相比例、流速的因素[3，4]。取同一样品溶液进行测定。结果表明，水杨酸的含量在实验条件有微小变化时测得的结果无显著性差异，表明建立的方法简便、快速、耐用性好，可满足鞣柳硼三酸散中水杨酸的含量测定要求。

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文章编号：1004—5570(2016)03-0094-04

收稿日期：2016-03-29

作者简介：曹桂红(1983-)，女，硕士研究生，研究方向：药物分析，E-mail:caoguihong2008@163.com.

中图分类号：O657.7+2

文献标识码：A

Determination of salicylic acid in tannic acid, salicylic acid and boric acid powder by HPLC

CAO Guihong1,HUANG Chunqing1,XU Bo1,ZHOU Xin2

(1.Guizhou Institute for Food and Drug Control, Guiyang 550004, Guizhou, China; 2. The Research Center for Quality Control of Natural Medicine, Guizhou Normal University, Guiyang, Guizhou 550001, China)

Abstract:We established a HPLC method for determining the content of salicylic acid in tannic acid, salicylic acid and boric acid power. The chromatographic column was Agilent SB-C18, and the mobile phase was Methanol-0.4% phosphoric acid solution (60∶40). The detection wavelength was 305 nm, with the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was 25 ℃. The average recovery and the RSD of salicylic acid was 101.26% and 0.48% (n=9), respectively. This method is effective, simple, accurate, and can be used to determine the content of salicylic acid in tannic acid, salicylic acid and boric acid powder.

Key words:tannic acid; salicylic acid and boric acid power; salicylic acid; HPLC