Id-1和VEGF在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义

汪　佳，安　峰，申叶春，谢丽娟，王钟华

(河北北方学院附属第一医院，河北 张家口 075061)



Id-1和VEGF在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义

汪佳，安峰，申叶春，谢丽娟，王钟华

(河北北方学院附属第一医院，河北 张家口 075061)

[摘要]目的探讨DNA结合分化抑制蛋白-1(Id-1)和血管内皮生长因子(VEGF)在涎腺腺样囊性癌中的表达及与肿瘤侵袭、转移的关系。方法采用免疫组织化学方法检测Id-1和VEGF在60例涎腺腺样囊性癌组织与癌旁正常组织中的表达情况，分析二者的表达与涎腺腺样囊性癌临床病理特征的关系及二者表达的相关性。结果涎腺腺样囊性癌组织中Id-1和VEGF阳性表达率均明显高于癌旁正常组织(P均<0.05)；有淋巴结转移、肺转移者Id-1和VEGF阳性表达率高于无转移者(P均<0.05)，Ⅲ+Ⅳ期者高于Ⅰ+Ⅱ期者(P<0.05)，中低分化者明显高于高分化者(P<0.05)，有脉管浸润者明显高于无脉管浸润者(P<0.05)，而不同性别、年龄及肿瘤部位患者Id-1和VEGF阳性表达率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)；Id-1和VEGF在涎腺腺样囊性癌组织中的表达呈正相关(r=0.469,P<0.05)。结论Id-1和VEGF与涎腺腺样囊性癌的侵袭、转移密切相关，两者可能在涎腺腺样囊性癌的演进中存在协同作用，相互影响。

[关键词]涎腺腺样囊性肿瘤；Id-1；VEGF；浸润转移

涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)系口腔涎腺上皮组织发生的恶性肿瘤，病理类型以腺癌多见，恶性度较高，早期即可出现局部蔓延或沿神经及血管向远处转移[1]。SACC组织呈侵袭性生长，复发和远处转移是SACC患者预后较差的重要原因，而新生血管的形成是肿瘤侵袭、转移的基础[2]。DNA结合分化抑制蛋白-1(Id-1)能促进细胞增殖，诱导肿瘤血管生成，其表达沉默、缺失与乳腺癌、食管癌、子宫内膜癌等多种恶性肿瘤的发生、进展密切相关[3-5]。血管内皮生长因子(VEGF)是体内特异性极高的血管内皮分裂原，能刺激血管内皮细胞增殖迁移，促进肿瘤血管形成[6]。目前，国内关于Id-1在SACC组织表达的相关报道较少，其在SACC组织中的浸润转移机制并不明确，本实验以Id-1和SACC的关系为中心，通过免疫组化方法检测Id-1和VEGF在SACC组织中的表达及与临床病理特征之间的关系，并分析二者的相关性，旨在为探索SACC发生、浸润、转移的机制及精准化治疗提供科学依据。

1临床资料

1.1一般资料收集2013年6月—2015年6月在我院口腔科行手术切除的60例SACC患者组织标本，癌组织标本取自癌灶中心处，癌旁正常组织标本经病理证实为正常组织。所有患者术前均未接受放化疗治疗，男36例，女24例；年龄39～61(52±2.7)岁；2005版WHO涎腺腺样囊性肿瘤病理分型：筛孔型22例，实体型18例，管状型20例；TNM分期Ⅰ+Ⅱ期33例，Ⅲ+Ⅳ期27例；小涎腺22例，大涎腺38例。

1.2试剂兔抗人单克隆浓缩型Id-1抗体、兔抗人浓缩型VEGF单克隆抗体均购于香港abcam公司, DAB显色试剂盒购于武汉博士德公司。

1.3免疫组化染色方法10%福尔马林溶液固定标本，石蜡包埋，切片厚度为4 μm，HE染色。80 ℃烤箱烤片30 min，乙醇脱水，灭活内源性过氧化物酶，枸橼酸缓冲液高温水化修复；PBS冲洗，加一抗(1∶100)、二抗(1∶200)。室温下DAB显色，苏木精复染，乙醇分化、冲洗、梯度乙醇脱水，松节油透明，树胶封片。PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4Id-1、VEGF阳性判定标准[7]Id-1和VEGF均以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性表达，根据着色细胞占视野细胞总数的百分比及着色细胞染色强弱评分计算总积分。着色细胞占视野细胞总数的百分比≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，> 75%为4分；细胞染色无着色为阴性计0分，细胞染色弱(+)计1分，中() 计2分，强() 计3分。上述2项积分相乘，0分为(-),1～4分为(+),5～8分为(),9～12分为(),(+)～()均视为阳性。

1.5统计学方法运用SPSS 17.0统计软件统计并分析数据。计数资料用百分率表示，采用2检验；计量资料用±s表示，相关性分析采用Spearmen检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1SACC组织和癌旁正常组织中Id-1和VEGF的表达情况Id-1和VEGF在SACC 组织和癌旁正常组织中的表达定位于细胞质和细胞膜，呈棕黄色或棕褐色颗粒，见图1～4。Id-1和VEGF在SACC 组织中的阳性表达率分别为68.33%(41/60)和76.67%(46/60)，在癌旁正常组织中的阳性表达率分别为13.33%(8/60)和16.67%(10/60)，Id-1和VEGF在SACC 组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(2=18.956，21.117，P均<0.05)。

2.2Id-1和VEGF表达与SACC临床病理参数的关系有淋巴结转移、肺转移者Id-1和VEGF阳性表达率高于无转移者(P均<0.05)，Ⅲ+Ⅳ期者高于Ⅰ+Ⅱ期者(P<0.05)，中低分化者明显高于高分化者(P<0.05)，有脉管浸润者明显高于无脉管浸润者(P<0.05)，而不同性别、年龄及肿瘤部位者Id-1和VEGF阳性表达率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

图1　癌旁正常组织中Id-1表达情况(SP×200)

图2　癌旁正常组织中VEGF表达情况(SP×200)

图3　SAAC组织中Id-1表达情况(SP×200)

图4　SAAC组织中VEGF表达情况(SP×200)

2.3SACC组织中Id-1和VEGF表达的相关性SAAC组织中Id-1和VEGF共同阳性35例，共同阴性8例，表达一致率为71.67%(43/60)，两者呈明显正相关(r=0.469，P<0.05)。见表2。

表1　Id-1和VEGF表达与SACC临床病理参数间的关系

表2　SACC组织中Id-1和VEGF表达的相关性　例

3讨论

Id-1系螺旋-环-螺旋(HLH)转录因子家族重要成员，其在正常组织中呈不表达状态或低表达，而在恶性肿瘤及体外培养的肿瘤细胞系中均呈高表达趋势[8-9]。大多数HLH结构存在一个碱性HLH因子(bHLH)与其紧密相邻，二者相互结合形成异质二聚体，其碱性区与目标DNA结合，诱导启动子中的E-盒样结构的靶基因转录并整合成所谓的“E-box”DNA序列，从而调控细胞增殖分化[8]。Id-1通过与E2A结合形成特异性复合物抑制E2A活化P21，激活CDK2诱导Rb蛋白磷酸化，而Rb蛋白的磷酸化在肿瘤增殖中发挥重要作用，能抑制细胞分裂周期中G1/S停滞，促使细胞分裂周期顺利进行[9]。Lee等[10]报道Id-1表达上调能激活Raf-1及MAPK激酶信号传导途径，抑制细胞凋亡，参与肿瘤发生发展。

VEGF作为一种特异性极高的血管内皮分裂原，对肿瘤血管基质形成及肿瘤恶性生物学行为均有非常重要的影响。VEGF能促进内皮细胞变形、迁移，分裂和增殖，通过与相应受体结合引起一系列信号传导，释放FGF、EGF等因子来诱导内皮细胞生成新生血管[11]；此外，VEGF增加微血管通透性致血浆蛋白外渗，为肿瘤新生血管的生成提供必要的细胞外基质，通过加速金属蛋白酶、间质胶原酶等蛋白的合成，促使血管间质纤维和基底膜屏障的降解，促进肿瘤血管生成[12]。

Ling等[13]研究发现，Id-1在前列腺癌组织中的异位表达可诱导VEGF 表达水平升高，通过应用RNA干扰抑制Id-1的表达，发现VEGF 的表达水平也明显下调。Lee等[14]研究报道Id-1在肝细胞癌组织中能通过缺氧诱导因子(HIF)诱导VEGF的活化，从而促进癌细胞的血行转移，但具体机制还需进一步探讨。本研究结果表明，Id-1和VEGF在SACC组织中的阳性表达远高于正常组织，Id-1和VEGF的表达与SACC的分化程度、TNM分期、肺转移、淋巴结转移和脉管浸润均具有相关性，且两者在SACC组织中的表达水平呈明显正相关。

综上所述，Id-1的异常表达参与SACC的发生、演进，并与血行转移等恶性生物学行为密切相关，其诱导VEGF的过表达可能是促进其浸润、转移的重要途径之一，因而对二者作用机制的深入探讨将有望为SACC精准化治疗提供科学依据。

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[作者简介]汪佳，男，医师，主要从事口腔颌面头颈部肿瘤临床研究。 [通信作者]安峰，E-mail：yfyanfen@163.com

[基金项目]河北省张家口市科学技术研究与发展计划指令项目(11110012D)；河北北方学院自然科学面上项目(2013010)

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.21.002

[中图分类号]R739.8

[文献标识码]A

[文章编号]1008-8849(2016)21-2286-04

[收稿日期]2016-01-10

Clinical significance of Id-1and VEGF expression in salivary adenoid cystic carcinoma

WANG Jia, AN Feng, SHEN Yechun, XIE Lijuan, WANG Zhonghua

(The First Affiliated Hospital of Hebei North University, Zhangjiakou 075061, Hebei, China)

Abstract:Objective It is to investigate the expression of DNA binding inhibitor of Differentiation-1(Id-1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in salivary adenoid cystic carcinoma (SACC), and approach its relationship with invasion and metastasis. Methods The expression of Id-1 and VEGF in 60 cases of SACC group and 60 cases of tumor adjacent normal tissues were detected by immunohistochemical method. The relationship between their expression and clinic pathologic features in SACC and their correlation were analyzed. Results The positive expression rates of Id-1 and VEGF protein in SACC tissues were significantly higher than those in the normal tissues (all P<0.05), those in patients with lymph node metastasis and lung metastasis were significantly higher than those without metastasis (all P<0.05), those in stage Ⅲ+Ⅳ were higher than those in Ⅰ+Ⅱ stage (all P<0.05), those with low differentiation were significantly higher than those in high differentiation (all P<0.05), those with vascular invasion group were significantly higher than those without vascular invasion (all P<0.05), but there were no significant differences with positive expression rates of Id-1 and VEGF in gender, age and tumor size (all P>0.05). There was positive correlation between the positive expression rates of Id-1 and VEGF in SACC tissues (r=0.469, P<0.05). Conclusion The expression of Id-1 and VEGF are closely correlated to the invasion and metastasis of SACC and they may both play an important role in the progression of SACC.

Key words:salivary adenoid cystic carcinoma; DNA binding inhibitor of differentiation-1; vascular endothelial growth factor; clinical significances; invasion; metastasis.