多倍体萱草的离体快繁技术1)

尹立辉　武术杰　　　刘亚亮　　　温娜　王丽兰　王雪松

(长春大学,长春，130012)　　　(吉林省技秾种业有限公司)　　　　　(中邦园林股份有限公司)



多倍体萱草的离体快繁技术1)

尹立辉武术杰刘亚亮温娜王丽兰王雪松

(长春大学,长春，130012)(吉林省技秾种业有限公司)(中邦园林股份有限公司)

摘要以多倍体萱草的嫩叶、生长点、腋芽、花蕾、花瓣和花茎作外植体进行离体快繁技术研究。结果表明：以幼嫩的花蕾和花瓣为外植体最为适宜；以MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+2,4-D 0.7 mg/L为最适诱导培养基，诱导分化率可达74%以上；以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L为最适继代增殖培养基，增殖系数可达5.8；以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.02 mg/L+马铃薯20 g/L为壮苗培养基。培养1～2周后转入MS+NAA 0.04 mg/L的生根培养基中，其平均根长、根长势等最为理想，生根率达100%，且移栽后成活率高，生长健壮。

关键词多倍体萱草；花蕾；花瓣；离体快繁

多倍体萱草，百合科萱草属。花色鲜艳，园林中多用于花境或路旁栽植，是优良的园林地被植物。但其自然分蘖繁殖的速度慢，远不能满足商品化生产的需要。而利用组培快繁技术，可以极大地提高萱草的繁殖数量，加快繁殖速度，实现规模化生产。目前已有一些关于萱草组培快繁的研究，张洁茹、毕晓颖、兰丽婷[1-4]等对诱导培养、增殖培养、生根培养、移栽等过程进行了研究，但由于萱草品种间差异性大、特异性强，因此结果不尽相同。不同学者研究的不同萱草品种、不同外植体的培养方法和培养基配方都存在较大差异[5-7]，因此，开展多倍体萱草组培快繁研究具有重要价值。笔者对多倍体萱草从外植体选取部位至炼苗移栽进行了系统的研究，为其规模化生产提供了依据。

1材料与方法

于长春公园选取成年、健壮、无病菌的植株移栽于长春大学温室过渡培养备用。各阶段培养以MS为基础培养基，附加不同质量浓度的6-BA、IBA、NAA、2，4-D、蔗糖(30g/L)，琼脂(9g/L)等，pH=5.8。所有培养条件均为温度(25±2)℃、光照强度1 500～2 000lx、光照时间12h/d。

外植体的建立：取多倍体萱草的嫩叶、生长点、腋芽、花蕾、花瓣、花茎为外植体，洗衣粉液泡洗后，用自来水冲洗1～2h；然后在75%酒精中浸泡10s后，用无菌水冲洗；再转入0.1%的升汞(加1～2滴吐温)液中浸泡12min后，用无菌水冲洗，以备接种。

诱导培养：将外植体接种于诱导培养基上，每种外植体接种40瓶，每瓶4株，培养期间观察萌芽及生长状况。出愈率=出现愈伤组织外植体数量÷接种外植体数量×100%；诱导分化率=已分化的外植体数量÷接种外植体数量×100%；污染率=污染的外植体数量÷接种外植体数量×100%；褐变率=褐变外植体数量÷接种外植体数量×100%；增殖倍数=继代后芽苗数量÷继代前芽苗数量；生根率=生根的组培苗数量÷接种组培苗数量×100%。

继代培养：将诱导培养基上萌发的生长良好、健壮的嫩芽切下转接到继代培养基中培养。

壮苗培养：将瓶内苗木转至壮苗培养基中培养，观察生长状况。生根培养：将瓶内苗高剪至2～3cm，转至生根培养基中，观察生根状况及苗木生长状况。

2结果与分析

2.1多倍体萱草诱导培养

从表1可见，将不同外植体接于同一培养基上，以花蕾和花瓣为外植体出愈率和诱导率最高，大约在1周左右开始膨大变绿，并且有淡黄绿色的愈伤组织颗粒产生(见图1)。在培养10d时观察，均无不定芽产生；在培养15d左右发现，以花瓣和花蕾为外植体在Y3培养基上和Y4基上有不定芽产生(见图2)；且20d时在Y4培养基上，以花蕾和花瓣为外植体的诱导率均达74%以上。以花瓣为外植体的诱导率最高，达78%，不定芽浓绿健壮。各培养基中以嫩叶为外植体接种后其愈伤组织出现晚，且不宜诱导分化，褐化率最高。

表1　外植体诱导分化

序号外植体出愈率/%嫩叶生长点腋芽花蕾花瓣花茎Y181921303220Y261524423722Y3102835403931Y4256571858882Y551418253111Y682229373423

序号外植体诱导率/%嫩叶生长点腋芽花蕾花瓣花茎Y118811109Y236622014Y371920252824Y4125155747868Y5022480Y621116182212

2.2多倍体萱草继代培养

将诱导芽剪取转接到继代培养基上，25d左右继代一次。继代增殖培养结果见表2。可见，NAA质量浓度为0.1mg/L时，随着6-BA质量浓度的增加，增殖倍数增加；6-BA质量浓度达2.0mg/L时，增殖倍数最大，达3.8倍。NAA质量浓度为0.2mg/L时，随着6-BA质量浓度的增加，增殖倍数增加；6-BA质量浓度达2.0mg/L时，增殖倍数最大，达5.8倍，且该增殖培养基中苗木生长速率快，叶较宽、浓绿，苗木健壮(见图3)。

图1　多倍体萱草的愈伤组织诱导

图2　多倍体萱草的愈伤组织分化

培养基(MS)质量浓度/mg·L-1NAA6-BA增殖倍数试管苗长势0 0 1.2±0.2+0.11.02.8±0.2++1.53.0±0.2+++2.03.8±0.2+++2.53.5±0.2+++3.03.4±0.2+++0.21.04.2±0.2+++1.54.0±0.2+++2.05.8±0.2++++2.53.3±0.2+++3.03.0±0.2++

注：表中数值为平均值±标准差；供试样品均为40瓶，每瓶4株；+为发育不良(根少、细)，++为发育较好(根较少、细长)，+++为发育良好(根较多、粗长)，++++为发育很好(根多、粗长)；试验过程中出现少量褐化现象，分别在褐化的培养基中加入0.25%活性炭，褐化效果消除不明显。

2.3多倍体萱草壮苗培养

经过增殖培养，试管苗整体长势较弱，且有玻璃化现象，影响移栽后的成活率，因此生根前将试管苗转入MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.02mg/L+马铃薯20g/L培养基中进行壮苗培养(见图4)，以提高瓶苗质量。

图3　多倍体萱草的继代增殖培养基

图4　多倍体萱草的壮苗培养基

2.4多倍体萱草生根培养

将生长健壮，高2～3cm的无根幼苗转入生根培养基中，大约1周左右开始分化出根的生长点，25d后的生根情况见表3。可见，萱草在MS+0.04mg/LNAA培养基中平均根长可达7cm，生根率达100%，且根毛密集、粗长、白润，生长健壮(见图5)。

2.5多倍体萱草炼苗与移栽

将组培苗从培养瓶中取出，洗净根部培养基。将根部置于盛满水的容器中，罩上透明塑料薄膜，保持温度和湿度，3d后清洗根部培养基后移栽。移栽后成活率达98%以上。

表3　不同生根培养基对萱草生根的影响

注：供试样品均为40瓶，每瓶4株；++为发育较好(根较少、细长)，+++为发育良好(根较多、粗长)，++++为发育很好(根多、粗长)。

图5　多倍体萱草的生根培养基

3结论与讨论

以幼嫩的花蕾和花瓣为多倍体萱草最佳外植体，培养1周左右愈伤组织开始膨大，15d左右出现不定芽，大大缩短了获得无菌幼苗的时间。最适诱导培养基为MS+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L+2,4-D0.7mg/L；最适增殖培养基为MS+NAA0.2mg/L+6-BA2.0mg/L；最适壮苗培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.02mg/L+马铃薯20g/L；最适生根培养基为MS+0.04mg/LNAA。炼苗可直接在盛满水的容器中进行，3d后即可移栽，套袋保湿，加强管理，成活率达98%。

此外，试验中发现种植于不同基质中的生根苗其长势各不相同。栽植于草炭土中的植株长势要明显好于园土+草炭的基质，即萱草适宜生长在通气透水性好的草炭土中；但在透气性差的园土+草炭中也能生长，只是长势较弱。试验中出现的褐化问题还是没有更好的办法解决，有待于进一步研究。

参考文献

[1]张洁茹，刘晓嘉，陈丽飞，等.矮壮素对萱草组培苗生根及移栽的影响[J].东北林业大学学报，2014，42(7):95-99.

[2]张洁茹，刘晓嘉，陈丽飞，等.萱草优良单株花茎离体快繁[J].东北林业大学学报，2014，42(2):73-77.

[3]毕晓颖，王宁.萱草花茎离体培养与快速繁殖[J].东北林业大学学报，2012，40(11):56-59，158.

[4]兰丽婷，李冲，任爽英，等.萱草新品种组培再生体系的建立[J].东北林业大学学报，2011，39(4)：14-17.

[5]姜凤英,栾绍武,吴志刚,等.多倍体萱草“金娃娃”的离体培养研究[J].辽宁农业科学,2007(1)：51-52.

[6]路光,王岩,涂传炜.大花萱草—金娃娃组培苗继代增殖因素的研究[J].北方园艺,2006(6)：139-140.

[7]王晓娟,金樑,陈家宽.大花萱草不同外植体诱导愈伤组织的比较研究[J].生命科学研究,2005,9(3)：242-246.

第一作者简介：尹立辉，女，1978年11月生，长春大学园林学院，讲师。E-mail：51442591@qq.com。

收稿日期：2015年5月20日。

分类号Q813.1

RapidinVitroPropagationofPolyploidHemerocallis fulva//

YinLihui,WuShujie

(ChangchunUniversity,Changchun130012,P.R.China);LiuYaliang(JilinJinongSeedIndustryLimitedCompany);WenNa,WangLilan,WangXuesong(ZhongbangGardenLimitedCompany)//JournalofNortheastForestryUniversity，2016,44(8)：41-43,67.

TheexperimentwasconductedtostudytherapidinvitropropagationofpolyploidyHemerocallis fulvawithtenderleaf,growingpoint,axillarybud,bud,petalandscapeasexplants.Theyoungbudandpetalwerethemostsuitableexplants.MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+2,4-D0.7mg/Lwasthemostsuitableinducingmedium,andtheinducingdifferentiationratewas74%.MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/Lwasthemostsuitablesubculturemedium,andproliferationcoefficientwas5.8.MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.02mg/L+Potato20g/Lwasthestrongseedlingmedium.After1-2weeks,tissuecultureseedlingwastransferredtotherootingmediumofMS+NAA0.04mg/L.Theaveragerootlengthandrootgrowthoftissuecultureseedlingswerethemostidealwiththerootingrateof100%,thesurvivalratewashigh,andthegrowthwasstrong.

KeywordsPolyploid Hemerocallis fulva; Bud; Petal; Rapid in vitro propagation

1)吉林省科学技术开发(委托)项目(2010220001000250)。

责任编辑：戴芳天。