纳豆红曲银杏的毒理安全性评价

朱春阳+周婷婷+林立鹤+隋自洁

【摘要】 目的 探讨纳豆红曲银杏（NHY）的安全性。方法 选取无特定病原体（SPF）级健康昆明种小白鼠、Wistar大鼠， 按《食品安全性毒理学评价程序和方法》进行试验。结果 小鼠急性毒性试验LD50>10.0 g/kg BW， 属实际无毒级；遗传毒性试验均未呈现致突变作用。大鼠30 d喂养试验表明动物各项生理指标均未发生异常。结论 NHY安全无毒、无致突变性。

【关键词】 纳豆红曲银杏；无毒；致突变；安全性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.18.197

纳豆[1]作为黄豆为原料的发酵品， 是一种营养价值很高的食品， 可调节血脂， 降低胆固醇、血脂， 预防高血压和动脉硬化；可调节肠道菌群平衡， 预防痢疾、肠炎和便秘；还有防癌抗癌、缓型减肥、排毒养颜、延缓衰老等功效。银杏叶提取物是从银杏科属植物叶中提取的一种营养物质， 它具有促进机体循环、抗氧化、延缓衰老、提高记忆力、防治高血压、调节血糖等方面的功效与作用。纳豆红曲银杏是以纳豆冻干粉、功能性红曲粉、银杏叶提取物为主要原料的保健食品[2]。依照《食品安全性毒理学评价程序和方法》对其安全性进行毒理试验， 以保证其对人体食用安全。

1 材料与方法

1. 1 受试物 纳豆红曲银杏。

1. 2 实验动物 SPF级健康昆明种小白鼠、Wistar大鼠， 吉林大学白求恩医学院动物实验中心提供， 使用许可证号SCXK-（吉）-2011-0004。本清洁级实验动物环境设施合格证号， 吉动设字10-1005。

1. 3 试验方法

1. 3. 1 小鼠急性毒性试验 采用急性经口毒性实验， 一次最大量法进行。选取18～22 g的小鼠20只， 雌雄各10只。受试物用蒸馏水配制， 灌胃最大浓度25%， 灌胃2次， 每次0.2 ml/10 gBW， 剂量为10 g/kgBW， 给予受试物后， 观察14 d。

1. 3. 2 遗传毒性试验 ①小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验： 选用25～30 g的小鼠50只， 雌雄各半， 随机分组， 每组10只。以40 mg/kgBW的环磷酰胺为阳性对照， 蒸馏水为阴性对照， 试验设5.00、2.50、1.25 g/kgBW三个剂量组。间隔24 h 2次经口灌胃， 末次灌胃后6 h颈椎脱臼处死动物， 取股骨骨髓常规制片。每只动物计数1000个骨髓嗜多染红细胞的微核发生率。②小鼠精子畸形试验：选用25～30 g 雄性小鼠25只， 随机分组。以40 mg/kgBW的环磷酰胺为阳性对照， 蒸馏水为阴性对照， 试验设5.00、2.50、1.25 g/kgBW三个剂量组。连续灌胃5 d， 首次灌胃后35 d处死动物， 常规制片。每只动物计数1000个结构完整精子的畸变精子发生率。③Ames试验：试验菌株TA97、TA98、TA100、TA102， 经鉴定符合要求， 均为鼠伤寒沙门氏菌组胺酸缺陷型。体外代谢活化系统用多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆。试验设5000、1000、200、40、8 μg/皿5个剂量， 同时设阴性对照（蒸馏水）和阳性对照， 平板掺入法， 每个剂量3个平行， 整套试验重复2次。

1. 3. 3 大鼠30 d喂养试验 设三个受试物组分别为2.93、2.20、1.47 g/kgBW及对照组， 每组20只， 雌雄各半。三个试验组受试物用逐步扩大量法分别均匀掺入基础饲料中， 含量分别为2.93%、2.20%、1.47%， 基础饲料为阴性对照组。单笼喂养， 记录大鼠每周的体重、进食量， 连续喂养30 d。实验第31天， 麻醉后下腔静脉取血， 进行血液学、生化学指标测定， 处死大鼠， 大体解剖， 观察每只大鼠脏器有无异常， 取肝、肾、脾脏和睾丸（卵巢）称重， 计算脏体系数， 高剂量组大鼠的肝、肾、脾脏、胃、睾丸、卵巢进行病理组织学检查。

1. 4 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 小鼠急性毒性试验 该受试物小鼠急性毒性试验雌、雄小鼠LD50>10.0 g/kgBW， 按急性毒性分级标准为实际无毒级。

2. 2 遗传毒性试验 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验和Ames试验结果均为阴性， 未见致突变作用。

2. 3 大鼠30 d喂养试验

2. 3. 1 实验动物一般状况 在30 d喂养期间， 各剂量组大鼠生长良好， 活动正常， 无死亡。各剂量组动物体重、进食量、动物食物利用率等一般情况未见异常。

2. 3. 2 对大鼠血常规的影响 按高、中、低、对照组顺序， 血红蛋白（HGB）雄性分别为（138.00±4.35）、（139.20±4.83）、（136.70±3.27）、（139.10±3.31）g/L， 雌性分别为（135.80±2.90）、（135.30±2.63）、（135.90±3.00）、（136.40±2.27）g/L；红细胞（RBC）雄性分别为[（7.06±0.48）、（7.08±0.36）、（7.11±0.26）、（7.29±0.29）] ×1012/L， 雌性分别为[（6.77±0.34）、（6.79±0.32）、（6.80±0.16）、（6.99±0.30）] ×1012/L；白细胞（WBC）雄性分别为[（4.69±0.32）、（5.01±0.66）、（4.66±0.46）、（4.68±0.53）] ×109/L， 雌性分别为[（4.58±0.28）、（4.53±0.26）、（4.83±0.32）、（4.56±0.26）] ×109/L。各剂量组HGB、RBC及WBC与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。

2. 3. 3 对大鼠血生化的影响 各剂量组的谷丙转氨酶（ALT）、尿素（BUN）、谷草转氨酶（AST）、肌酐（Cr）、血糖（GLU）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、胆固醇（CHO）、甘油三脂（TG）与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。且无剂量反应关系。见表1。

2. 3. 4 病理学检查 各剂量组与对照组比较， 肝、肾、脾脏和睾丸（卵巢）各脏器绝对重量及脏器系数， 差异无统计学意义（P>0.05）。组织病理学观察肝、肾、脾脏、胃、睾丸、卵巢均未见明显病理改变。

3 讨论

纳豆、银杏叶都有较高的食用安全性[1， 3]， 功能性红曲无毒副作用， 但传统工艺生产的红曲可能有真菌毒素桔霉素的存在， 真菌毒素桔霉素是红曲菌的一种次级代谢产物， 具有肾毒性， 还可致畸、致癌和诱发基因突变， 因而使功能性红曲的使用安全性受到挑战[4]。以纳豆冻干粉、功能性红曲粉、银杏叶提取物（所占比例分别为20%、12%、7%）为主要成份的NHY是否安全呢， 小鼠急性毒性试验说明该受试物为实际无毒级。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验是对体细胞染色体结构完整性改变的评估， 小鼠精子畸形试验是评价受试物对体内生殖细胞的遗传毒性作用， Ames试验是检测受试物是否具有诱发基因突变的能力， 遗传毒性试验结果表明NHY对体细胞和生殖细胞均无染色体畸变作用， 亦无基因突变作用。大鼠30 d喂养试验结果说明NHY不影响动物的生长发育， 对造血功能、肝肾功能亦无损害作用， NHY对大鼠脏器的病理组织学无明显影响， 在2.93 g/kgBW剂量范围内未观察到有害作用。在本研究剂量范围内NHY无毒、无致突变性， 认为NHY食用较安全。

参考文献

[1] 胡景柱， 夏寿华， 吴林.纳豆冻干粉的安全性研究.安徽农业科学， 2000， 28（3）：380-381.

[2] 卢连华， 吴世富， 张云端， 等.一种银杏叶提取物胶囊的毒理学安全性评价.预防医学论坛， 2013（7）：517-520.

[3] 张卫明， 顾龚平， 史劲松.银杏叶食用安全性的毒理学评价.南京师大学报（自然科学版）， 2005， 28（1）：80-83.

[4] 黄艳， 李从发， 姚广龙.红曲及其安全性研究进展.食品研究与开发， 2006， 27（8）：217-219.

[收稿日期：2016-03-23]