阻断ELISA 法检测非洲猪瘟抗体

邓　飞，李　丽，裴超信，周丽媛，张　睿，邵　靓（四川省动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041）

阻断ELISA 法检测非洲猪瘟抗体

邓飞，李丽，裴超信，周丽媛，张睿，邵靓
（四川省动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041）

摘要：非洲猪瘟（ASF）是我国重点防范的外来动物疫病，目前我国尚无疫情发生，为防患于未然，仍需加强病原监测。本试验采用西班牙Ingenasa非洲猪瘟阻断ELISA抗体检测试剂盒对来源于四川省内的92份猪血清进行检测，结果表明92份血清样本均为ASFV抗体阴性。

关键词：非洲猪瘟；阻断ELISA；抗体检测

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病。其临床症状和病理变化与猪瘟相似，表现为发热、皮肤发绀和淋巴结、肾、胃肠黏膜充血、出血，急性型死亡率高达100%［1］。国际兽医局（OIE）将该病列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病，是重点防范的外来动物疫病。近年来，俄罗斯等国家的非洲猪瘟疫情频发，并呈继续扩散蔓延的态势。由于与俄罗斯毗邻，我国面临着巨大的跨境传播防控压力，一旦传入，将给我国养猪业带来灾难性危害［2］。因此我们应防患于未然，必须防止ASFV传入。除了加强对引进商品猪和猪肉制品的检验检疫外，还要积极开展非洲猪瘟的实验室监测工作。本试验通过阻断ELISA法对ASF抗体进行了检测，现报告如下：

1　材料与方法

1.1血清样本血清样本来源于四川省阿坝、广元、巴中、达州、广安的规模场及散养户，共计92份。

1.2检测试剂西班牙Ingenasa（英吉纳）非洲猪瘟阻断ELISA抗体检测试剂盒，批号：160316。

1.3检测方法

1.3.1使用前将所有试剂恢复至室温。

1.3.2在ELISA反应板上每孔加50μL稀释液。两孔加50 μL阳性对照血清（E12和F12孔），两孔加50μL阴性对照血清（G12和H12孔），其余每孔加入50μL血清样品，每份样品重复2孔（如A1、B1为同一份样品，C1、D1为同一份样品，以此类推）。共两个反应板，37℃孵育1h。

表1　ELISA反应板1检测46份血清的OD值

表2　ELISA反应板2检测46份血清的OD值

1.3.3将孔中溶液倒入含NaOH溶液的容器中，用洗板机洗涤4次。

1.3.4每孔加100μL酶结合物，37℃孵育30min。

1.3.5按洗涤步骤洗板5次。

1.3.6每孔加100μL底物，室温避光放置15min。

1.3.7每孔加100 μL终止液，5 min内用酶标仪在450nm处读取OD值。

2　结果

2.1OD值样品检测的OD值见表1、表2。

2.2结果有效性若阴性对照OD值/阳性对照OD值≥4，则两个反应板的试验检测结果均有效。

2.3Cut Off值计算阳性Cut Off值=NC-［（NCPC）×0.5］；阴性Cut Off值=NC-［（NC-PC）×0.4］。

2.4结果判定样品OD值＜阳性Cut Off值，则ASFV抗体阳性；样品OD值＞阴性Cut Off值，则ASFV抗体阴性；样品OD值介于2个Cut Off值之间，则需重新检测样品或用另外的方法检测。经计算，本试验所测样品的OD值＞阴性Cut Off值，证明ASFV抗体呈阴性（样品OD值取其平均值）。

3　讨论

非洲猪瘟的检测主要包括抗原检测和抗体检测，检测抗体对于诊断亚急性、慢性、隐性感染具有重要意义。用阻断ELISA法检测ASF抗体是一种无感染性的实验室检测方法，对于未发生ASF的国家来说具有现实意义。由于我国目前尚无ASF发生的报道，所以我们采用阻断ELISA法对样本进行检测，试验所用Ingenasa试剂盒为OIE指定参考的ASF诊断试剂盒。本试验对来源于四川省北部、东北部边境地区的部分规模场及散养户的猪血清样品进行检测，结果ASFV抗体均为阴性，表明未发生ASFV感染。

非洲猪瘟是一把令世界各国养猪业闻之色变的“杀猪刀”，目前无有效疫苗防制，所幸我国境内尚无该病发生。然而中国作为养猪业大国，又与俄罗斯接壤，所以我们应保持最高程度的警戒，平时应加强对ASF的监测，建立快速、准确的检测和诊断系统，以确保清洁无疫，同时提高兽医人员对ASF的应对能力和实验室检测水平。

参考文献：

［1］殷震，刘景华.动物病毒学［M］.2版.北京：科学出版社，1997：1197-1205.

［2］王君玮.非洲猪瘟传入风险与应对策略［J］.现代畜牧兽医，2011（6）：15-18.

中图分类号：S854.43

文献标识码：B

文章编号：1001-8964（2016）06-0022-02

收稿日期：2016-02-29

作者简介：邓飞（1982-），女，四川成都人，硕士研究生，兽医师。

Detection of African Swine Fever Antibody by Blocking ELISA

DENG Fei，LI Li，PEI Chaoxin，et al.
（Animal Disease Prevention and Control Center of Sichuan Province，Sichuan Chengdu 610041，China）

Abstract：African swine fever is an important exotic animal disease in China，although there is not outbreak of ASF in our country，but the situation of prevention and controlis very severe.In this study，92 serum samples of pigs from Sichuan were detected by ASFV blocking ELISA antibody detection kit of Spain′s Ingenasa.The results showed that theseserum samples were negative for ASFV antibody.

Key words：African swine fever（ASF）；Blocking ELISA；Antibody detection