甘南地区牦牛隐性乳房炎病原菌的分离鉴定

白建生（甘肃省卓尼县畜牧工作站，甘肃 卓尼 747600）

甘南地区牦牛隐性乳房炎病原菌的分离鉴定

白建生
（甘肃省卓尼县畜牧工作站，甘肃 卓尼 747600）

摘要：为了调查甘南卓尼县牦牛隐性乳房炎的流行情况，以便为该县牦牛隐性乳房炎的控制提供科学有效地防治措施，本试验选取具有代表性的牦牛为试验对象，采集乳样，分离鉴定乳样中的细菌，结合该县牦牛的饲养管理，与目前对牦牛疾病防治的现状，提出了牦牛隐性乳房炎的综合性防治措施。

关键词：牦牛；隐形乳房炎；分离鉴定；甘南地区

乳房炎是奶牛的乳腺受到物理、化学、微生物等刺激所发生的一种炎性变化。乳房出现红肿热痛的炎性反应，乳汁中的体细胞增多导致乳汁的营养成分下降。1978年美国乳房炎委员会（NMC）根据奶牛在乳房部位和和分泌出的乳汁中是否有无变化，将乳房炎分为隐性乳房炎和临床型乳房炎两种。隐性乳房炎因没有明显的临床症状而常被忽视[1]，因此在实际生产中隐性乳房炎给畜牧业造成了很大的经济损失。

细菌、病毒等致病微生物存在于乳汁中，当乳制品加工过程消毒不严时，很容易使致病微生物残存于牛奶中，饮用后会导致人体不适，甚至发病。根据国际奶牛联合会统计，奶牛隐性乳房炎发病率高达50％，而临床型乳房炎发病率只有2％。在世界范围内，每年因乳房炎损失乳汁估计可达380万t。奶牛乳房炎不仅造成了重大的经济损失，而且还严重危害着奶牛饲养业的健康发展。

1　材料与方法

1.1样品来源

2015年5月随机采集卓尼县4个草场的牦牛乳样品60份。

1.2仪器设备

生化培养箱，型号SPX-150B型，上海博迅实业有限公司医疗设备厂生产；电热恒温培养箱，型号YXQ-SG46-280SA，上海佳胜试验设备有限公司生产；洁净工作台，型号SPY-115D型，上海博迅实业有限公司医疗设备厂生产；显微镜,型号Motic DMBA450型，上海博迅实业有限公司医疗设备厂生产；电子天平(感量0.00019)；以上仪器均由卓尼县畜牧局实验室提供。

1.3试剂药品

营养肉汤、普通营养琼脂培养基、5％绵羊血液琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基、M-H琼脂培养基、生化试剂、CMT诊断试剂等。

环境消毒药物包括惠福星和立可灵。

1.4奶牛隐性乳房炎的检测方法与判定标准

CMT方法[2]在隐性乳房炎检查方面具有快速、检出率高、准确、操作简单等优点,判定标准参照《兽医产科学实习指导》[3]。

表1　隐性乳房炎CMT法的判定方法

1.4.1奶牛乳样的采集采样前先用温水清洗采样乳头，再用75％酒精棉球消毒乳头，在每次消毒乳头后均用消毒纸巾擦干，弃去采样乳区的头两把乳汁，大约10～15 ml，然后采集乳样约5～10 ml，挤入灭菌瓶

中，作好标记待检病原菌，处于干奶期的牦牛仅可采1～2 ml奶样。在每次采样后均要乳头消毒，以防细菌感染。采样后将样品迅速放入冰水中或冷藏，尽快送检。

1.4.2细菌分离鉴定一是牦牛生活环境中细菌的分离及初步分类。样品采集完成后，立即将放有样品的平板送回实验室，置于37℃的温箱中培养1～2 d，然后用肉眼观察平板上的细菌生长状况，根据菌落形态特征、生长特性进行初步的分类。挑取典型菌落，涂片，用常用的革兰氏染色最后镜检，依据细菌形态特征及革兰氏染色的特性，将其分离细菌分为革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性球菌、革兰氏阳性杆菌、革兰氏阴性杆菌[4]。二是牦牛奶样中细菌的分离鉴定。取适量奶样，摇匀，每个样品无菌采取0.05 ml，预先准备好的血液平皿、普通营养琼脂平皿、麦康凯琼脂平皿等。然后接种细菌，置于37℃下培养1～2 d。观察细菌生长情况，根据菌落形态特点，挑取较为典型的菌落进行涂片，染色，镜检。鉴定分离病菌的染色特性，进行肉汤接种试验，根据细菌的生长与生化特性进一步鉴定细菌。

根据细菌培养特性及其镜检结果，可初步区别球菌与杆菌。根据细菌革兰氏染色、溶血以及所产生的菌落颜色特性都可以对细菌特性进行鉴定。

2　乳样中细菌的分离结果

在本次牦牛隐性乳房炎病原菌的调查中，共检验了60份患牛奶样，共分离出了116株细菌，细菌检验结果如下表3所示，金黄色葡萄球菌和链球菌是乳房炎的主要病原菌，其次是大肠埃希氏菌。

表2乳样中细菌的分离结果

参考文献:

[1]陈北亨,王建辰.兽医产科学(第二版)[M].北京：中国农业出版社,1990.

[2]张庆茹.奶牛隐性乳房炎研究进展[J].当代畜禽养殖业,2003,(8):56-60.

[3]赵兴绪.兽医产科学实习指导[M].北京:中国农业出版社,2002.

[4]桂炳东,孙敬,徐建民.细菌药物敏感性试验测定手册[M].南昌：江西科学技术出版社,2001.

（编辑：赵鹏飞）

中图分类号：S857.2+6

文献标识码：B

文章编号：1006-799X(2016)04-0088-01

作者简介：白建生（1976-），男，甘肃卓尼人，主要从事畜牧兽医技术推广工作。