一起猪伪狂犬与猪圆环病毒病混合感染的诊断

郝志香，李　乐，马　健，鲁　毅（.河南省新乡市动物疫病预防控制中心；.河南省新乡市动物卫生监督所，河南 新乡 453000）

一起猪伪狂犬与猪圆环病毒病混合感染的诊断

郝志香1，李乐2，马健1，鲁毅1
（1.河南省新乡市动物疫病预防控制中心；2.河南省新乡市动物卫生监督所，河南 新乡 453000）

摘要：2015年9月新乡市某猪场发生一起猪死亡率的40％的传染病，病猪精神不振，食欲减退，体温升高至40℃，站立不起，皮肤有圆形坏死灶，抗生素治疗无效，发病率100％。通过流行病学调查，并对其进行病理剖检、实验室诊断，确诊为该猪场育肥猪是由猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型混合感染引起的发病和死亡。

关键词：猪伪狂犬病；猪圆环病毒病；混合感染

猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的猪的急性传染病。该病在猪呈爆发性流行。引起妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪的大量死亡，育肥猪呼吸困难、生长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。猪圆环病毒病（porcine circovirus diseases，PCVD)是由猪圆环病毒2型引起的一种传染病，是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎肾病综合征（PNDS）、猪呼吸系统混合疾病、繁殖障碍综合征等与PCV-2相关的疾病统称。PCV-2及其相关的猪病，死亡率10％～30％不等，较严重的猪场在暴发本病时死淘率高达40％，给养猪业造成严重的经济损失。PCV-2感染可引起猪的免疫抑制，从而使机体更易感染其他病原，这也是圆环病毒与猪的许多疾病混合感染有关的原因。

1　流行病学调查

该猪场共养殖有100日龄生猪200头，起初个别生猪发病，一周后陆续感染，精神不振，食欲减退，体温升高至40℃，呼吸急促，站立不起，皮肤有圆形坏死灶，抗生素治疗无效，发病率100％，死亡率40％。初步怀疑感染病毒。

2　病理变化

剖解病死仔猪发现，关节水肿有积液，胸腹腔有积液和粘连，全身淋巴结周边有出血且肿大，肺部和肾脏有出血点和黄褐色斑点，肝、脾肿大，有灰白色坏死灶，肌肉褪色，盲肠和结肠部位淤血并有出血点。

3　实验室诊断

3.1样品采集与处理

采集解剖死亡猪后的组织（脾、肺、肝、肾、扁桃体及腹股沟淋巴结）样品2份，加入少许PBS液稀释研磨，在-70℃反复冻融3次后，4℃下12 000 rpm离心5 min，取上清置-20℃保存备用。

3.2核酸提取

核酸提取采用RNA/DAN纯化试剂盒（购自世纪元亨），具体操作方法如下：取已处理样品，加入裂解液600μl,充分颠倒混匀，室温静置3～5 min；将液体吸入吸附柱中，13 000 rpm离心30 s；弃去收集管中的液体，加入600μl洗液，13 000 rpm离心30 s，重复一次；弃去收集管中液体，13 000 rpm空柱2 min，以除去残留液；将吸附柱移入新的1.5 ml离心管中，向中央加入洗脱液25～50μl，室温静置1 min，13 000 rpm离心30 s，离心管中的液体即为病毒核酸模板。

3.3猪伪狂犬病毒荧光PCR鉴定

猪伪狂犬病毒（PRV）荧光PCR鉴定采用猪伪狂犬病毒（PRV）核酸扩增试剂盒（PCR-荧光探针法），购自广州维伯鑫生物科技有限公司，检测方法及判定标准按照试剂说明书进行。对两份病料提取的模板及阳性质控和阴性质控进行荧光PCR扩增后，得到的结果见图1。根据结果可以看出，两份病料均为猪伪狂犬病毒阳性。

图1临床组织样品荧光PCR鉴定PRV结果

3.4猪圆环病毒2型荧光PCR鉴定

猪圆环病毒2型(PCV-2)荧光PCR鉴定采用猪圆环病毒2型(PCV-2)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)，购自广州维伯鑫生物科技有限公司，检测方法及判定标准按照试剂说明书进行。对两份病料提取的模板及阳性质控和阴性质控进行荧光PCR扩增后，得到的结果见图2。根据结果可以看出，2份病料均为猪圆环病毒2型阳性。

4　结果与讨论

根据实验室诊断结果，可以确诊该猪场育肥猪是由猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型混合感染引起的发病和死亡。

该猪场发生的PRV与PCV-2混合感染，在很大程度上与PCV-2感染引起的免疫抑制有关。PCV-2具有免疫抑制特性，因为PCV-2感染猪的淋巴器官中T、B淋巴细胞数量减少，淋巴组织中巨噬细胞浸润，外周血和淋巴组织中的巨噬细胞单核细胞数量升高，导致PCV-2感染猪群免疫功能下降，使猪群对其他病原体的抵抗力大大降低，从而使机体更易感染其他病原，引起混合感染。

从该猪场的两头病死猪中均检出PRV和PCV-2，并且引起免疫抑制的疾病越来越多，可以推断，目前猪场多重感染或者混合感染已经成为发病的规律，也导致猪群发病后的临床症状更加复杂，病情更加严重，确诊更加困难，防治效果差，在以后的疾病预防和诊断过程中应该引起重视。

图2临床组织样品荧光PCR鉴定PCV-2结果

（编辑：高真贞）

中图分类号：S858.28

文献标识码：B

文章编号：1006-799X(2016)04-0050-01

作者简介：郝志香（1986-），女，河南辉县人，助理兽医师，主要从事动物疫病防控工作。