一种实验兔膝关节滑膜组织提取新方法

王俊伟，陈利锋，王华松，陈 芳，王丽平，刘 琴（.湖北中医药大学针灸骨伤学院，武汉430065；.广州军区武汉总医院，武汉 430060）



简 讯

一种实验兔膝关节滑膜组织提取新方法

王俊伟1，陈利锋2，王华松2，陈 芳2，王丽平2，刘 琴2
（1.湖北中医药大学针灸骨伤学院，武汉430065；2.广州军区武汉总医院，武汉 430060）

类风湿性关节炎（RA）典型病理表现之一为滑膜组织增生。成纤维样滑膜细胞（FLSs）在RA的发生、发展中发挥着重要作用。在原代FLSs体外培养过程中，滑膜组织提取成功与否是实验顺利进行的关键。以往兔膝关节滑膜组织提取大都是提起髌骨上下进行分离，在实验中我们发现将髌骨提起分离两侧及胫骨时需要将髌骨翻转，此时难以辨认关节囊内外层组织的解剖关系，致使分离困难，可能将纤维层混杂导致培养细胞纯度不高。本研究在此基础上进行改良，建立一种简单易行的提取方法并附图做详尽说明。

方法：取新西兰兔一只，耳缘静脉空气栓塞处死，75%酒精浸润双大腿皮肤5 min。沿踝关节切开皮肤至大腿根部，充分剥离皮肤，显露膝关节。将膝关节周围筋膜层剥离，扪及髌骨骨性标志。采取髌骨下极上缘0.5 cm处切开长约1 cm横行切口，离断髌腱，保留髌下脂肪垫作为识别滑膜组织标志。沿切口向内外侧髁游离，提夹关节囊层，必要时离断内外侧副韧带。仔细辨认关节囊内壁一层薄薄的组织，即为滑膜。助手辅助下仔细分离小心钳夹，剔出滑膜组织上的血液及脂肪组织。将取出滑膜组织置于EP管中（内含100 U/mL青霉素、100 mg/mL链霉素的PBS液）。

提取前明确滑膜组织解剖关系将大大减少术中辨认时间（图1）。本研究中，取髌骨下极上缘0.5 cm处切口，考虑此处为关节间隙水平，其下方为髌下脂肪垫。髌下脂肪垫与滑膜组织毗邻，可作为滑模层辨认的标志，术中需离断外侧副韧带（图2）。横行切开髌韧带，从一侧打开即可肉眼见到关节囊的内外分层，内层即为实验所需的滑膜层（图3）。研究组以该法提取兔膝关节滑膜组织，操作简单，实验时间约1 h，组织纯度高，经传代培养，细胞呈典型纤维样改变（图4），是一种切实可行且简单的实验方法。

术中注意：（1）提取时需避免滑膜组织混杂血液及脂肪；（2）正常滑膜组织透亮，有一定黏性，但韧度不足，操作需动作轻柔，切勿粗暴。关节炎诱导模型兔滑膜组织则因充血、炎性增生而变厚、质韧，形态学发生一定改变，需注意辨清层次关系。

图1 正常膝关节解剖

图2 实验兔膝关节组织层次关系

图3 实验兔膝关节组织层次关系

图4 所提取滑膜培养的细胞

【中图分类号】

【文献标识码】A

【文章编号】1671-7856（2016）06-0094-01

doi：10.3969.j.issn.1671-7856.2016.06.017

［基金项目］湖北省卫生厅中医药科研课题（2013Z-Y37）；广州军区武汉总医院课题（YZ201422）。

［作者简介］王俊伟，湖北中医药大学研究生院，2014级硕士研究生在读。

［通讯作者］陈利锋，广州军区武汉总医院中西医结合科，副主任医师。