精子DNA碎片率与男性不育的关系研究

黎智彪　严共全　黄莉　梅金梁?陈亮

[摘要] 目的 分析研究精子DNA碎片率与男性不育的关系，探究不育患者年龄、精子碎片率和精液常规参数的相关性。方法 选择我院收治的男性不育患者100例作为本次研究的对象，收治时间在2013年3月～2014年6月，按照年龄将这100例患者分成三组，25～29岁组（n=33），30～35岁组（n=33），36～50岁组（n=34），使用SCD检测其精子DNA碎片率，分析检测其精液常规参数。结果 正常形态精子率和精子活力不存在相关性（r=0.65，P>0.05）；精子活力和年龄存在负相关（r=-2.41，P<0.05）；和精子DFI存在正相关关系（r=0.33，P<0.05）。结论 随着年龄的增长精子活力会逐渐的下降，对男性的生育能力具有影响，且精液常规参数与精子DNA碎片率不存在密切的联系，故认为，精子DNA碎片检测可以在精液常规分析中应用，作为反映男性生育能力的重要指标。

[关键词] 精子DNA碎片率；男性不育；关系

[中图分类号] R711.6 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2016）09-128-03

[Abstract] Objective To analyze and research the relationship between sperm DNA fragmentation rate and male infertility， and to explore the relativity among age， sperm fragmentation rate and semen routine parameters of infertile patients. Methods 100 male infertility patients who were selected as the study object this time from March 2013 to June 2014 in our hospital were divided into three groups according to the age， which were 25-29 years old group（n=33）， 30-35 years old group（n=33）， and 36-50 years old group（n=34）， SCD was utilized to detect the sperm DNA fragmentation rate and analyze semen routine parameters. Results There was no correlation between normal sperm morphology rate and sperm motility（r=0.65， P>0.05）. There was a negative correlation between sperm motility and age（r=-2.41， P<00.05）， and positive correlation between sperm motility and sperm DFI（r=0.33， P<00.05）. Conclusion With the increase of age， the sperm activity would gradually decrease， which had an effect on the male fertility. There was no close relationship between semen routine parameters and sperm DNA fragmentation rate. Therefore， sperm DNA fragmentation detection could be applied in semen routine analysis， which was considered as an important indicator of male fertility.

[Key words] Sperm DNA fragmentation rate， Male infertility； Relationship

男性不育是指育龄夫妇同居1年，未采取任何避孕措施，因男方原因造成不育的现象称为男性不育。相关的临床研究资料表明[1]，男性的年龄和自然流产具有密切的关系，男性年龄越大，意味着精子碎片率的概率越大，相关的研究资料认为，精子碎片率和男性生育力存在密切的联系，精子碎片率越高，男性的生育力则相对较弱，目前临床学术上关于精子脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）碎片率与男性不育关系方面的研究资料较少，临床尚未有完全的定论[2]。本研究为进一步探究精子DNA碎片率与男性不育的关系，特选择了我院收治的100例男性不育患者作为研究对象，经研究发现精子DNA碎片率和精液常规各参数不存在相关性，通过整理汇总分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将我院2013年3月～2014年6月收治的男性不育患者100例作为本次研究的对象，按照年龄将这100例患者分成三组，20～29岁组（n=33），30～35岁组（n=33），36～50岁组（n=34）。

25～29岁组患者的平均年龄为（26.1±1.3）岁，不育时间为（3.1±2.3）年，精液体积为（2.32±0.15）mL；30～35岁组患者的平均年龄为（32.1±1.3）岁，不育时间为（4.0±2.3）年，精液体积为（2.32±0.15）mL；36～50岁组患者的平均年龄为（36.3±1.3）岁，精液体积为（2.45±0.17）mL，育龄夫妇婚后一直同居，性生活正常，亦未采取任何避孕措施，一年以上未怀孕者称为不孕症，自确诊为不孕症后已有（5.2±2.6）年，即不育时间为（5.2±2.6）年。

经确认，参与本次研究的所有患者均在婚后同居1年以上、夫妻性生活正常、未采取避孕措施而未育者，且将心肝肾功能异常、血液系统异常、神经系统异常及不愿配合本次调查研究的患者排除在外，所有患者均符合本次研究的基本条件。

1.2 方法

提醒患者在检测前1个星期禁欲，使用手淫法采集患者的精液标本，并使用洁净的塑料容器放置标准，待标本液化后，使用伟力彩色精子质量检测系统对5μL的精液进行常规分析，检测各组的精子活力、密度和精液量，使用瑞-吉染色镜检观察[3]。

使用精子染色质扩散法对精子DNA碎片检测，使用生理盐水将新鲜的精液稀释至10×106/mL，稀释结束后进行常规的精液检查，将60μL的待测标本加入至熔化的易熔凝胶管中，并充分混匀，将标本放入37℃中的暖箱中孵育待用，将精子凝胶混合液加入至预先处理的载玻片上，放入22cm2的盖玻片上，放入2～8℃的冰箱中，凝固5min[4]。

1.3 观察指标

对所有研究患者的精液体积、精子浓度、精子活力、正常形态精子率、精子DFI（精子DNA完整性）进行观察，并探讨精子DNA碎片率与男性不育的关系。

1.4 统计学处理

对所有研究患者的精液体积、精子浓度、精子活力、正常形态精子率、精子DFI使用SPSS18.0软件进行数据处理，以95%作为可信区间，精液体积、精子浓度、精子活力、正常形态精子率、精子DFI使用（）表示，使用t检验，数据结果显示P<0.05，则认为差异具有统计学意义，使用Pearson相关系数对不育男性的年龄、精子密度、活力、形态、精液量等指标的相关性进行检验和分析。

2 结果

2.1 各年龄段的精子参数比较表

精子DFI，精液体积，精子浓度、精子活力、正常形态精子率在3个年龄组组间差异无统计学意义（P>0.05），具体如表1所示。

2.2 精子活力和年龄的关系

本研究统计结果表明，正常形态精子率和精子活力不存在相关性（r=0.65，P>0.05），精子活力和年龄存在负相关（r=-2.41，P<0.05），和精子DFI存在正相关关系（r=0.33，P<0.05）。

3 讨论

不育症给家庭造成了严重的危害，相关的研究资料表明，有50%的不育夫妇均因为男性存在生殖功能缺陷，但是男性的生育能力的检测手段相对缺乏，精子浓度、活力、形态是评估男性生育能力的重要指标，近年来，以精子DNA损伤为特征的精子染色结构异常对男性生育能力具有较好的预测价值。

遗传物质正确传递给后代需要以精子DNA保持完整为前提，精子DNA的完整性在受精过程和胚胎发育中扮演着重要的角色[5]，多年的临床实践经验表明[6]，自然生育、辅助生殖技术治疗结局与精子质量的优劣具有密切的联系，精子DNA的损伤会给辅助生殖技术治疗结局、自然生育造成不良影响，且其损伤与复发性流产具有密切的关系，目前，临床上关于DNA的损伤机制尚未有明确的阐述，但多认为该病与多因素的联合作用结果有关。稳定态二氧化氯（stabilized chlorine dioxide，SCD）法检测是反映男性不育患者精子DFI的常见手段，精液常规参数检测结果表明，不育患者的精液量、密度、男性精子DFI、正常形态比率不会受患者年龄增长的影响，但精子活力会受年龄增长的影响，但是精子DNA碎片率、精子活性等与精液常规各参数无明显的联系[7-8]。

目前临床上对胚胎发育、受精率是否与精子DNA碎片化有关存在较大的争论，相关的临床资料表明，男性精子DFI如果在30%以上，就会降低正常妊娠的可能性，精子细胞核内的DFI含量一般经历着从少到多的过程，DFI的分布含量较少，非蛋白编码区分布就会有大量的精子DNA损伤断裂区域，但该现象并不会导致精子功能下降，但是当精子DNA的损伤断链得不到及时有效的修复时[9-10]，精子DNA蛋白编码区基因就会在精浆中有害因素的影响下发生损坏，精子功能在此影响下也会受到损伤。还有相关的临床资料认为，精子染色质中的DFI也会影响精子的稳定性，导致IVF受精过程中雄性原核的形成受阻，降低受精率[11-13]。另一方面，精子卵裂停滞、卵裂率的降低与男性不育患者精子表达微管的基因损伤有关，胚胎数量增多后，胚胎的质量就会受损[14-15]。

本研究结果表明，正常形态精子率和精子活力不存在相关性（r=0.65，P>0.05），精子活力和年龄存在负相关（r=-2.41，P<0.05），和精子DFI存在正相关关系（r=0.33，P<0.05）。故认为随着年龄的增长精子活力会逐渐的下降，对男性的生育能力具有影响，且精液常规参数与精子DNA碎片率不存在密切的联系，故认为，精子DNA碎片检测可以在精液常规分析中应用，作为反映男性生育能力的重要指标。

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（收稿日期：2015-12-21）