联合检测血浆中BIRC5、MYC的自身抗体水平在宫颈癌诊断中价值分析*

麦丽萍　麦志周



联合检测血浆中BIRC5、MYC的自身抗体水平在宫颈癌诊断中价值分析*

麦丽萍①麦志周②

【摘要】目的：探讨联合检测血浆中BIRC5、MYC的自身抗体水平在宫颈癌诊断中的价值，以期寻找早期诊断宫颈癌的新型肿瘤标志物。方法：选取2014年2月-2015年7月本院收治的宫颈癌患者91例作为宫颈癌组，另选取同期在本院体检的86例健康女性作为对照组。采用ELISA法检测两组外周血中BIRC5、MYC及BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体水平，并进行组间比较。结果：宫颈癌组外周血中BIRC5、MYC自身抗体水平均高于对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）；两组BIRC5 与MYC混合抗原的自身抗体水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；ROC分析结果显示，BIRC5自身抗体检测的曲线下面积（AUC）、特异性、敏感性、阳性预测值、阴性预测值依次为0.680、91.28%、21.05%、66.48%、52.49%；MYC自身抗体检测的AUC、特异性、敏感性、阳性预测值、阴性预测值依次为0.662、89.64%、8.14%、44.65%、49.52%；BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体水平检测的AUC、特异性、敏感性、阳性预测值、阴性预测值依次为0.752、92.34%、28.43%、73.58%、55.50%。结论：BIRC5、MYC自身抗体均与宫颈癌具有一定的相关性，BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体检测诊断宫颈癌的敏感性和特异性明显优于单一抗原自身抗体检测，联合检测可提高检测效率。

【关键词】宫颈癌； BIRC5； MYC； 混合抗原； 诊断

①广东省佛山市顺德区第一人民医院附属杏坛医院 广东佛山 528325

②广东省佛山市第一人民医院禅城医院

First author’s address：Xingtan Hospital Affliated to Shunde District First People’s Hospital of Foshan City，Foshan 528325，China

1　资料与方法

1.1一般资料 选取2014年2月-2015年7月本院收治的宫颈癌患者91例作为宫颈癌组，年龄34~64岁，平均（50.18±5.83）岁；其中Ⅰ期44例，Ⅱ期47例。纳入标准：（1）首次经临床表现、体征、细胞学检查、阴道镜检查及病理组织学检查确诊为宫颈癌患者，国际妇产科联盟（FIGO）分期为Ⅰ~Ⅱ期；（2）未曾接受过化学治疗、放射治疗等抗肿瘤治疗，无宫颈手术史。排除标准：（1）合并自身免疫性甲状腺疾病、强制性脊柱炎、系统性红斑狼疮等严重自身免疫系统疾病史或合并其他恶性肿瘤；（2）器官移植，需长期应用免疫抑制剂；（3）有严重宫颈炎症性疾病。另选取同期在本院体检的86例健康女性作为对照组，年龄31~62岁，平均（49.87±6.05）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经本院医学伦理委员会审批，所有纳入对象均对本研究相关事项了解，并签署书面知情同意书。

1.2方法 所有研究对象均于清晨无菌采集空腹肘静脉血2~3 mL，于室温下静置，待血细胞和血浆自然分层后离心（2500 r/min）10 min，取上层清液于离心管中，并置于-20 ℃冰箱中保存待测。所有检测操作均于冰浴条件下进行。将新合成的抗原采用抗原包被缓冲液稀释至适宜浓度（BIRC5 10 μg/mL，MYC 10 μg/mL，BIRC5与MYC混合抗原15 μg/mL，对照抗原20 μg/mL），按照棋盘法设计96孔酶标板，每孔加入100 μL的抗原工作液。采用封板膜将96孔酶标板封闭，摇匀后置于4 ℃条件下孵育过夜。摘除封板膜，将包被缓冲液和残留液体弃掉后置于自动洗板机中进行洗涤。每孔加入100 μL含有血浆样本的分析缓冲液（血浆样本：分析缓冲液=1∶200），封板膜封闭，摇匀后置于20 ℃条件下孵育1.5 h。摘除封板膜，将分析缓冲液和残留液体弃掉后置于自动洗板机中进行洗涤。每孔加入100 μL稀释于分析缓冲液的辣根过氧化物标记的羊抗人抗体（酶标抗体：分析缓冲液=1∶25000），封板膜封闭，摇匀后置于20 ℃条件下孵育1.0 h。摘除封板膜，将分析缓冲液和残留液体弃掉后置于自动洗板机中进行洗涤。每孔加入100 μL的TMB显色液，摇匀后置于25 ℃、避光条件下孵育20 min。每孔加入50 μL硫酸（10.9%）终止显色反应。利用酶标仪检测光密度值，计算抗原与抗体的特异结合指数（SBI），即血浆中抗原自身抗体水平。以健康对照组第95百分位数的SBI值作为阳性阈值，统计阳性率。

1.3统计学处理 所有数据均经SPSS 17.0统计学软件进行分析，计量资料用（±s）表示，比较采用t检验，计数资料用率（%）表示，比较采用Χ2检验，采用受试者工作曲线（ROC曲线）分析抗原自身抗体水平检测价值，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组外周血中BIRC5、MYC及BIRC5与MYC混合抗原自身抗体水平比较 宫颈癌组外周血中BIRC5、MYC自身抗体水平均高于对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）；两组BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体水平比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1 两组外周血中BIRC5、MYC及BIRC5与MYC混合抗原自身抗体水平比较（±s）

表1 两组外周血中BIRC5、MYC及BIRC5与MYC混合抗原自身抗体水平比较（±s）

组别　BIRC5　MYC　BIRC5+MYC宫颈癌组（n=91）1.301±0.192　1.400±0.241　0.872±0.098对照组（n=86）　1.172±0.211　1.288±0.269　0.857±0.087 t值　4.258　2.921　1.075 P值　0.001　0.006　0.089

2.2血浆中BIRC5、MYC及BIRC5与MYC混合抗原自身抗体检测诊断宫颈癌的ROC曲线分析 ROC分析结果显示，BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体检测诊断宫颈癌的敏感性和特异性明显优于单一抗原自身抗体检测，见表2及图1。

表2 血浆中BIRC5、MYC及BIRC5与MYC混合抗原自身抗体检测诊断宫颈癌的ROC分析

图1 血浆中BIRC5、MYC及BIRC5与MYC混合抗原身抗体检测诊断宫颈癌的ROC曲线

3　讨论

研究证实，肿瘤相关抗原可诱导机体产生自身抗体，可否以肿瘤相关抗原的自身抗体作为肿瘤标志物已成为临床研究热点之一[4-6]。BIRC5是一种癌基因，在正常生理状态下，其表达受P53抑制，故当P53发生突变时，其表达水平异常升高，进而通过阻断细胞凋亡信号通路，促进细胞增殖和细胞转化，最终导致肿瘤的发生[7-9]。MYC是一种定位于人体的第8号染色体上的原癌基因，编码与细胞增殖相关的转录因子，其异常表达可导致细胞增殖和凋亡调控紊乱，导致细胞过度增殖，最终导致肿瘤的发生、发展[10-12]。

本研究在传统的ELISA法的基础上对肿瘤相关抗原自身抗体检测方法进行改进，通过导入与人类无同源性的山羊抗原作为对照抗原，以重复孔OD值的离散度和质控血的OD值判断结果的稳定性，同时优化结果评价公式，可有效降低非特异性信号的干扰，提高外周血BIRC5、MYC及BIRC5 与MYC混合抗原的自身抗体的检测效率。本研究结果显示宫颈癌患者外周血中BIRC5、MYC自身抗体水平明显高于健康女性，而BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体水平无明显差异，与国外多项研究结果一致[13-15]。利用ROC曲线分析外周血BIRC5、MYC及BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体检测在宫颈癌诊断中的应用价值，结果显示宫颈癌BIRC5、 MYC及BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体检测的AUC分别为0.680、0.662、0.752，且BIRC5、BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体检测的特异性、敏感性、阳性预测值、阴性预测值尚可，与自身抗体检测一般水平相匹配，故BIRC5、BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体检测均具备一定的宫颈癌诊断价值，而MYC自身抗体检测的阳性预测值、阴性预测值均较低，故其在宫颈癌诊断中有待进一步改善和提高。此外，本研究结果表明，BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体检测宫颈癌的敏感性和特异性均明显优于单一抗原自身抗体检测，提示联合检测BIRC5、MYC自身抗体可提高诊断效率，利于宫颈癌早期诊断。

综上所述，BIRC5、MYC自身抗体均与宫颈癌具有一定的相关性，BIRC5与MYC混合抗原自身抗体检测宫颈癌的敏感性和特异性明显优于单一抗原自身抗体检测，联合检测可提高检测效率。由于血浆成分复杂，未能完全避免非特异性交叉结合，仍存在非特异性干扰，且本研究样本量较少，导致肿瘤相关抗原自身抗体的检测效率较低，故在临床工作中仍需总结经验，进一步优化ELISA法，以改善并提高特异性结合的信号强度，同时增加样本数量，提高检测效率。

参考文献

[1] Hanna T P，Shafiq J，Delaney G P，et al.The population benefit of radiotherapy for cervical cancer：local control and survival estimates for optimallyutilized radiotherapy and chemoradiation[J]. Radiother Oncol，2015，114（3）：389-394.

[2]季恩，刘文丽，陈怡.血清鳞状上皮细胞癌抗原、癌抗原125、癌抗原19-9在宫颈癌及癌前病变的表达及意义[J].中国医学创新，2012，9（36）：24-25.

[3] Heo C K，Bahk Y Y，Cho E W.Tumor associated autoantibodies as diagnostic and prognostic biomarker[J].BMB Rep，2012，45 （12）：677-685.

[4] Zaenker P，Ziman M R.Serologic autoantibodies as diagnostic cancer biomarkers-a review[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2013，22（12）：2161-2181.

[5] Liu W，De La Torre I G，Gutiérrez-Rivera M C，et al.Detection of autoantibodies to multiple tumor-associated antigens（TAAs）in theimmunodiagnosis of breast cancer[J].Tumour Biol，2015，36（2）：1307-1312.

[6]Fernández M F，Maroun M C.Autoantibodies in breast cancer[J]. Adv Clin Chem，2014，64（1）：221-240.

[7]梁红玲，黄健清，李洪胜.BIRC5在非小细胞肺癌中的表达及与Tp53的关系[J].现代肿瘤医学，2013，21（7）：1496-1499.

[8]杨锐，王岩，李一夫.BIRC5基因沉默对人膀胱癌细胞系T24增殖抑制的研究[J].哈尔滨医科大学学报，2012，46（2）：115-117.

[9]贺荣芳，谢黎明，赵强，等.B细胞淋巴瘤中E2F1、BIRC5、PLK1蛋白表达及其临床意义[J].临床与实验病理学杂志，2012，28（3）：298-301.

[10] Kuglik P，Kasikova K，Smetana J，et al.Molecular cytogenetic analyses of hTERC （3q26） and MYC （8q24） genes amplifications in correlation with oncogenic human papillomavirus infection in Czech patients with cervicalintraepithelial neoplasia and cervical carcinomas[J].Neoplasma，2015，62（1）：130-139.

[11]刘桂玲.原癌基因c-myc与宫颈癌的研究进展[J].中国老年学杂志，2013，33（9）：2217-2218.

[12] Albihn A，Johnsen J I，Henriksson M A.MYC in oncogenesis and as a target for cancer therapies[J].Adv Cancer Res，2010，107（4）：163-224.

[13]王戊辰，周永宁.肿瘤相关抗原及抗体在肝癌诊断中的研究进展[J].临床肝胆病杂志，2014，30（6）：573-575.

[14] Xu Y W，Peng Y H，Chen B，et al.Autoantibodies as potential biomarkers for the early detection of esophageal squamous cell carcinoma[J].Am J Gastroenterol，2014，109（1）：36-45.

[15] Xu Y，Jin Y，Liu L，et al.Study of circulating IgG antibodies to peptide antigens derived from BIRC5 and MYC in cervical cancer[J].FEBS Open Bio，2015，5（1）：198-201.

*基金项目：佛山市医学类科技攻关项目（201208229）

通信作者：麦丽萍

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.10.003宫颈癌是女性较为常见的恶性肿瘤之一，具有发病率高、复发率高和预后不佳等特点，近年来其发病率呈逐年上升趋势，已成为严重威胁女性身心健康的重要疾病。早期宫颈癌经有效治疗后可完全治愈，而随着疾病进展，其治愈率逐渐降低，故宫颈癌早期诊断并予以有效治疗对提高宫颈癌治愈率具有十分重要的临床意义[1]。近年来，甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）等多种肿瘤相关抗原已逐渐应用于恶性肿瘤早期诊断与预测中，但临床实践中发现上述抗原在恶性肿瘤早期诊断和预测中缺乏特异性和敏感性[2]。有研究表明，肿瘤相关抗原自身抗体的检测具有特异性强、灵敏度高、检测速度快、操作简便等特点[3]。故本研究采用ELISA法检测宫颈癌患者和健康女性外周血中BIRC5、MYC 及BIRC5与MYC混合抗原的自身抗体水平，分析三者在早期宫颈癌诊断中的检测效果，以期寻找早期诊断宫颈癌的新型肿瘤标志物，现报道如下。

收稿日期：（2015-11-27） （本文编辑：王利）

Value Analysis of Combined Detection of BIRC5，MYC Autoantibody Levels in the Diagnosis of Cervical Cancer/MAI Li-ping，MAI Zhi-zhou.//Medical Innovation of China，2016，13（10）：008-011

【Abstract】Objective：To discuss the combined detection of BIRC5，MYC autoantibody levels in the diagnosis of cervical cancer in order to find a new type of tumor markers for early diagnosis of cervical cancer. Method：91 cases of patients with cervical cancer in our hospital from February 2014 to July 2015 were selected as cervical cancer group，and 86 cases of healthy women who took physical examination in our hospital at the same period were selected as control group.The plasma levels of BIRC5，MYC and BIRC5 mixed MYC（mixed antigen）autoantibody were detected and compared between the two groups.Result：Compared with the control group，the plasma levels of BIRC5，MYC autoantibody of the cervical cancer group were higher，the differences were statistically significant（P<0.05），and there was no statistically significant difference in the autoantibody level of mixed antigen between the two groups（P>0.05）.ROC analysis showed that the AUC，specificity，sensitivity，positive predictive value，negative predictive value of BIRC5 autoantibody were 0.680，91.28%，21.05%，66.48%，52.49%，MYC autoantibody were 0.662，89.64%，8.14%，44.65%，49.52% and mixed antigen were 0.752，92.34%，28.43%，73.58%，55.50%.Conclusion：BIRC5，MYC autoantibody are correlated with cervical cancer.Combined detection of BIRC5，MYC autoantibody in the diagnosis of cervical cancer has better specificity and sensitivity than a single antigen，it can improve detection efficiency.

【Key words】Cervical cancer； BIRC5； MYC； Mixed antigen； Diagnosis