黄芪注射液对Ⅲ期胃癌的疗效及对机体免疫功能的影响

赵为民　刘　林　方　法　杨新辉　王海江

(新疆医科大学附属肿瘤医院胃肠外科,乌鲁木齐,830011)



黄芪注射液对Ⅲ期胃癌的疗效及对机体免疫功能的影响

赵为民刘林方法杨新辉王海江

(新疆医科大学附属肿瘤医院胃肠外科,乌鲁木齐,830011)

摘要目的:观察黄芪注射液对Ⅲ期胃癌的疗效,并探讨其对机体免疫功能的影响。方法:将我院2008年1月至2010年11月60例Ⅲ期胃癌患者随机分为对照组和观察组,并将同期30例健康体检者设为健康对照组。2组Ⅲ期胃癌均接受胃癌根治术,并在术后常规给予化疗,以30 d为1个疗程,观察组在常规治疗基础上加用黄芪注射液30 mL加入0.9%氯化钠溶液250 mL中静脉滴注,1次/d,连续治疗30 d。治疗结束后2组胃癌患者的生活质量(Karnofsky评分)及累积生存率。检测3组患者外周血Th1、Th2细胞百分比变化。结果:1)黄芪注射液可以明显提高Ⅲ期胃癌患者的生活质量,同时提高患者的累积生存率。2)胃癌患者Th1/Th2比值明显低于健康对照组,经过治疗后2组患者Th1/Th2比值均有所下降,其中观察组下降的趋势更明显(P<0.05)。结论:Ⅲ期胃癌患者体内出现CD4+T细胞平衡失调,黄芪注射液可以通过纠正CD4+T细胞的水平达到提高患者生活质量的目的。

关键词Ⅲ期胃肿瘤;黄芪注射液;Th1/Th2

胃癌具有极高的临床发病率,其死亡率亦是高居癌症死因第2位,是人类生命健康的主要杀手。多数癌症患者确诊时已处于中晚期,早期胃癌患者术后5年生存率接近90%[1],而中晚期胃癌患者目前尚未达到根治目标,因此如何提高中晚期胃癌患者术后生存率一直是胃癌临床研究的热点话题。近年来中医以其抗癌效应较强、安全性良好的优势被医学界所重视。黄芪具有补益气血的功效,是诸多医家治疗癌症术后的良药。黄芪注射液是由黄芪中提取的有效成分精制而成,我们在临床实践研究中发现黄芪注射液可以提高癌症患者的生活质量,为了进一步探讨其作用机制,本团队进行了一系列研究,具体情况报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料将2008年1月至2010年11月60例Ⅲ期胃癌(根据第7版TNM分期)且接受胃大部分切除术者纳入研究,所有患者均为本院初次就诊并经组织病理学确诊。60例患者随机分为对照组和观察组,每组各30例,2组患者的病理类型、组织分级、年龄、病程等一般情况比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。同时选择同期健康体检者30例设为健康对照组。本研究方案经过医院伦理学委员会审查批准,所有受试对象均知情同意。

1.2纳入、排除及剔除标准纳入标准:1)年龄<75岁且为初治患者;2)Karnofsky评分≥70;3)组织病理学确诊的胃癌,并参照FIGO分期标准处于IIIa期至IIIc期者;4)无心、脑、肾等重大脏器疾病者,且无转移;5)签署知情同意书者。

排除及剔除标准:1)不符合上述标准者;2)具有免疫缺陷性疾病者;3)出现严重并发症者;4)治疗过程不予合作者。

1.3治疗方法所有患者均接受胃大部分切除术后接受常规化疗,亚叶酸钙200 mg/m2,氟脲苷15 mg/kg,奥沙利铂130 mg/m2,以30 d为1个疗程。与此同时,观察组患者加用黄芪注射液30 mL配0.9%氯化钠溶液250 mL静脉滴注,1次/d,连续治疗30例。

1.4观察指标治疗结束后2组胃癌患者的生活质量(Karnofsky评分)及累积生存率。检测3组患者外周血Th1、Th2细胞百分比变化。

1.5流式细胞检测

1.5.1主要试剂与仪器RPMI 1640培养基(美国Thermo公司)、胎牛血清(美国Thermo公司);人淋巴细胞分离液(天津市灏洋生物制品科技有限责任公司);佛波酯(PMA)、离子霉素(Ion美国Sigma公司)、布雷杆氏菌素A(BFA美国eBiosclence公司)、破膜剂,酶标仪,流式染色缓冲液CD4-FITC、IFN-γ-PE流式抗体(均购自美国eBiosclence公司)、Transwell小室(0.1 μm北京乐博生物技术有限公司、流式细胞仪(Partec GmbH德国产品型号:YZB/GEM 946-40)。

1.5.2标本采集及细胞分离分别抽取健康对照组、对照组组及观察组患者治疗前后前臂外周抗凝血10 mL,用人淋巴细胞分离液提取外周血单核细胞(PBMC,1×106/mL)400 μL,均分为2份,置于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中,用于Th1及Th2流式检测。

1.5.3Th1、Th2细胞流式检测方法加入刺激剂佛波醇乙酯(PMA)及离子霉素工作液,使其终浓度分别为50 ng/mL、1 μg/mL,置于37 ℃,5% CO2培养箱中培养4～6 h,再加入终浓度为2 μg/mL BFA,再次置于37 ℃,5% CO2培养箱中培养4 h,将培养皿中细胞收集至EP管,用预冷的磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗离心收集细胞,在4 ℃,500×g条件下离心3 min,摒弃上清液。再使用100 μL流式染色缓冲液重悬细胞30 min后加入CD4-FITC流式抗体各5 μL,避光4 ℃环境中孵育30 min,再加入流式染色缓冲液1 mL洗涤1次,在4 ℃,500×g条件下离心3 min,摒弃上清液,再加入600 μL破膜剂,避光4 ℃环境中孵育30 min后预冷PBS冲洗1次,再用100 μL破膜剂重悬细胞后加入2 μL藻红蛋白标记的各T淋巴细胞亚群相对应的标记物(IFN-γ-PE、IL-4-APC),避光4 ℃环境中孵育30 min,再用1 mL破膜剂冲洗1次后使用预冷PBS 200 μL重悬细胞,操作按试剂盒说明书进行,采用流式细胞仪检测各细胞。

2结果

2.1Karnofsky评分及生存率比较完成治疗后2组胃癌患者Karnofsky评分均较治疗前有所提高,其中观察组提高的趋势更为明显(P<0.05)。对照组中位生存期40.23,观察组为59.12,2组差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1及图1。

图1　2组生存曲线比较

组别Karnofsky治疗前治疗后对照组63.87±2.5272.44±1.93观察组62.91±3.6782.55±3.28t4.333.82P0.410.03

2.2黄芪注射液能显著上调Ⅲ期胃癌患者外周血中Th1/Th2比值对不同治疗组患者外周血进行流式细胞术检测CD4+IFN-γ+及CD4+IL-4+结果显示:2组Ⅲ期胃癌CD4+IFN-γ+均较健康对照组降低(|t|=4.19,P=0.002<0.05),且彼此间无统计学意义(|t|=3.92,P=0.228>0.05)。经过治疗后2组Ⅲ期胃癌患者CD4+IFN-γ+细胞百分率均有所提升,但仍低于健康对照组(|t|=2.71,P=0.03<0.05),其中观察组治疗后CD4+IFN-γ+细胞百分率提高的幅度明显高于对照组(|t|=5.18,P=0.016<0.05)。2组Ⅲ期胃癌患者治疗前后CD4+IL-4-γ+细胞百分率均与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。经过治疗干预后Th1/Th2比值有所升高,其中观察组升高的趋势更明显,具体见图2、图3。

图2　3组CD4+IFN-γ+细胞百分率变化

图3　3组CD4+IL-4+细胞百分率变化

3讨论

化疗是目前治疗Ⅲ期胃癌术后的主要治疗方式,但是化疗药物均具有明显的不良反应,如骨髓抑制、外周神经毒性等,甚至可导致心脑血管事件发生,故部分患者因无法耐受不良反应而放弃化疗甚至加速死亡[2-4],因此我们认为寻求可行的胃癌术后辅助治疗方案具有重要的现实意义。

中医学认为,化疗药物容易伤津耗气,对机体的气血、津液及五脏六腑均具有影响。黄芪属于中药经典的“补药”,属于“补药之长”,具有补气升阳、益卫固表、托毒生肌、利水消肿等功效,其有效成分黄芪总苷在体内动物模型[5]实验中具有逆转免疫抑制作用,因此被视为生物反应调节剂。根据目前临床研究得知,免疫失调是肿瘤的主要病理特征之一,病原体持续刺激下CD4+T细胞分化成调节性T细胞和效应T细胞两类,介导机体的免疫,同时还调控炎性反应的过程。正常机体Th1/Th2处于动态平衡的状态,两类Th细胞通过刺激分泌不同的细胞因子,形成一个庞大的细胞网络,彼此交叉应答又相互制约。Th1及其相关细胞因子可对细胞产生毒性而发挥杀伤作用,同时介导细胞免疫应答,当Th1表达上调时细胞免疫应答处于明显优势,影响了机体的体液免疫应答。Th2及其主要表达的细胞因子通过促进机体抗体的生成而介导体液免疫,当Th2处于优势时体液免疫较细胞免疫强势,从而抑制了Thl细胞应答,导致肿瘤免疫逃逸。因此当表达优势偏重于Th1或Th2时成为Th1/Th2漂移,Th1/Th2漂移的出现可促发肿瘤细胞逃逸机体免疫的监视,从而导致病情发展恶化[6-14]。

本研究通过流式检测手段发现外周血Th1细胞百分率明显较健康对照组下降,而Th2浓度表达并未发生明显改变,Th1/Th2比值明显下调,提示了中晚期宫颈癌患者外周血中有Th1介导的细胞免疫受到明显抑制,Th1表达的偏移可能是宫颈癌患者机体肿瘤细胞逃逸免疫抑制的机制之一。同时有学者发现胃癌组织中Th1表达变化不明显,Th1/Th2比值并未发生改变,这说明肿瘤逃逸现象在外周血表现的更为活跃,外周血发挥的抗肿瘤免疫明显较微弱。有研究显示当肿瘤患者体内Th2细胞逐渐向Th1细胞转化后集体对肿瘤细胞的毒杀作用增强,同时降低了患者出现淋巴结转移的发生率,这就说明了Th1/Th2比值的检测是观察肿瘤发展动向的良好指标。研究中我们对Ⅲ期胃癌术后患者进行治疗干预,发现2种干预手段患者Th1细胞百分率均有所上调,因此Th1/Th2比值均有改善,其中联合使用深度热疗的患者改善更为明显,因此我们认为黄芪注射液的介入可调整Th1/Th2,促使其恢复Th1/Th2的表达平衡。

总之,我们认为在黄芪注射液可明显改善Ⅲ期胃癌术后患者的生活质量,其机制可能与提高机体免疫防御作用有关。

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(2015-12-21收稿责任编辑：王明)

The Effect of Huangqi Injection on Stage III Gastric Carcinoma and its Function on Body's Immunity

Zhao Weimin,Liu Lin,Fang Fa,Yang Xinhui,Wang Haijiang

(GastrointestinalSurgeryDepartmentofTumorHospitalaffiliatedtoXinjinagMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

AbstractObjective:To observe the curative effect of Huangqi injection on stage III gastric cancer and its effects on the body's immune function.Methods:A total of 60 patients in stage III gastric carcinoma admitted in our hospital during January 2009 to January 2014 were randomly divided into the control group and the observation group.Also,30 cases of healthy people were recruited as healthy control group.Both of the two groups had received radical operation and took the conventional EOF scheme chemotherapy after surgery.The observation group was given Huangqi injection 30 mL with 250 mL 0.9% sodium chloride solution by intravenous drip on the basis of conventional treatment,1 time/ day,20 days.After treatment,compared the two groups in the aspects of quality of life (Karnofsky score),peripheral blood mononuclear cells,and the accumulative survival rate.Detected the peripheral blood Th1,Th2,and the cell percentage change of the three groups.Results:1) Huangqi injection could obviously increase the quality of life in the patients in stage III gastric cancer,and simultaneously increase the accumulative survival rate of the patients.2) Th1/Th2 ratio in the patients with gastric cancer was significantly lower than that of the healthy control group.However,Th1/Th2 ratio of the two groups both decreased after treatment,and the descending trend in the observation group was more obvious (P<0.05).Conclusion:For patients in stage III gastric carcinoma,CD4+T cells are abnormal and Huangqi injection can improve the quality of the patients' life by regulating the levels of CD4+T cells.

Key WordsStage III gastric carcinoma; Huangqi injection; Th1/Th2 ratio

基金项目:新疆卫生厅医疗卫生科研计划项目(编号:2010075)

作者简介:赵为民(1973.03—),男,研究生,副主任医师,研究方向:胃肠肿瘤的诊治,E-mail:misa2007@126.com 通信作者:王海江(1963.01—),男,博士,主任医师,博士研究生导师,研究方向:胃肠肿瘤的诊治,E-mail:doctor677@163.com

中图分类号：R273

文献标识码：A

doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.06.011