基于高效液相色谱法的帕瑞昔布钠位置异构体测定

聂忠莉， 郭兆元， 曾　吉， 王晓玲， 叶　丁， 张　勇， 郭　瑞

(1.成都大学 药学与生物工程学院， 四川 成都　610106；2.成都大学 四川抗生素工业研究所， 四川 成都　610106；3.成都克莱蒙医药科技有限公司， 四川 成都　610041)



基于高效液相色谱法的帕瑞昔布钠位置异构体测定

聂忠莉1， 郭兆元2， 曾吉1， 王晓玲3， 叶丁3， 张勇3， 郭瑞3

(1.成都大学 药学与生物工程学院， 四川 成都610106；2.成都大学 四川抗生素工业研究所， 四川 成都610106；3.成都克莱蒙医药科技有限公司， 四川 成都610041)

摘要：建立以高效液相色谱法(HPLC)测定帕瑞昔布钠位置异构体的方法.以硅烷键合硅胶为填充剂(Agela Technologies silica 4.6×250 mm，5 μm)；以正己烷—异丙醇(85∶15)为流动相，流速，1.0 mL/min，柱温，30 ℃，检测波长，215 nm.实验表明，帕瑞昔布钠与位置异构体分离度为1.86，理论塔板数分别为8 041和8 929；在0.04 μg/mL～0.64 μg/mL范围内，帕瑞昔布钠异构体线性关系良好(A=70.647c-1.401，r=0.9998)；重复性良好(RSD为0.12%)；平均回收率为94.47%(RSD为3.03%，n=9).采用HPLC法测定帕瑞昔布钠中的位置异构体，操作简单，准确度高且灵敏度好，可为控制帕瑞昔布钠质量提供依据.

关键词：高效液相色谱法；杂质检测；帕瑞昔布钠；位置异构体

0引言

帕瑞昔布钠的化学名为N-[[4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯基]磺酰基]丙酰胺钠，分子式为C19H17N2O4SNa，分子量为392.41，其化学结构式如图1所示.

图1帕瑞昔布钠化学结构式

帕瑞昔布钠是一种人工合成药物[1]，其对骨科、外科、妇科等临床各科患者术后镇痛有良好的效果，副作用较小[2-6].帕瑞昔布钠中位置异构体是帕瑞昔布钠的构造异构(位置异构)体，是本品合成第一步磺化过程中在苯环上产生的间位异构，主要是苯环间位结构化合物N-[3-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯基]磺酰胺，其化学结构式如图2所示.由于官

图2帕瑞昔布钠位置异构体化学结构式

能团位置的不同，其生物活性也可能不同，本研究参考《中国药典》2010年版二部附录[7]，利用HPLC分析能将帕瑞昔布钠与其位置异构体进行有效分离的检测条件，并初步确定测定帕瑞昔布钠位置异构体的方法，通过对其他批次样品中的位置异构体含量的测定，进而对该方法进行方法学验证.本方法操作简单，准确度高且灵敏度好，可为控制帕瑞昔布钠质量提供依据.

1仪器与试药

1.1仪器

实验所用仪器包括：奥泰SSI-1500型高效液相色谱仪(美国，AIITECH)；UV-759CRT型紫外—可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；BP-210D型电子分析天平(德国，Sartorius)；KH-5200E型超声波清洗器(频率40 kHz，超声时长15 min，上海沪粤明科学仪器有限公司).

1.2试药

帕瑞昔布钠位置异构体对照品，成都克莱蒙医药科技有限公司自制(批号，ZI130701)；帕瑞昔布钠(研究用批号，130801，含量测定批号，130903、130904、130905、131101、131102、131103)；正己烷、异丙醇(Merk)，色谱纯.

2方法与结果

2.1色谱条件

实验的色谱条件为：色谱柱，硅烷键合硅胶为填充剂(Agela Technologies silica 4.6×250 mm，5 μm)；流动相，正己烷—异丙醇(85∶15)；流速，1.0 mL/min；柱温，30 ℃；检测波长，215 nm；进样量，10 μL.

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液.

取帕瑞昔布钠位置异构体对照品适量，加正己烷—异丙醇(50∶50)溶解并稀释，制成每1 mL约含帕瑞昔布钠位置异构体0.8 μg的溶液，制得对照品溶液.

2.2.2供试品溶液.

取帕瑞昔布钠适量，加正己烷—异丙醇(50∶50)溶解并稀释制成每1 mL约含帕瑞昔布钠0.4 mg的溶液，制得供试品溶液.

2.3系统适应性实验与专属性实验

取帕瑞昔布钠和帕瑞昔布钠位置异构体对照品各适量，加正己烷—异丙醇(50∶50)溶解并稀释，制成每1 mL约含帕瑞昔布钠0.4 mg和帕瑞昔布钠位置异构体0.8 μg的溶液.在“2.1”项条件下测定，记录色谱图，结果见图3.

图3帕瑞昔布钠(B)及其异构体(A)对照品溶液色谱图

色谱图显示，帕瑞昔布钠位置异构体、帕瑞昔布钠依次出峰，分离度为1.86，理论塔板数分别为8 929和8 041，并且空白溶剂无干扰，均符合检测要求.

2.4线性实验

精密量取“2.2.1”项下的帕瑞昔布钠位置异构体对照品溶液0.5、2、4、6、8 mL，分别置于10 mL量瓶中，用正己烷—异丙醇(50∶50)定溶，制成系列对照品溶液，摇匀，分别进样10 μL，以“2.1”项下条件注入液相色谱仪，记录色谱图.以峰面积A为纵坐标，相应浓度c为横坐标，进行线性回归，得回归方程为，A=70.647c-1.401，r=0.9998.表明其在0.04～0.64 μg/mL浓度范围内线性关系良好.

2.5检测限与定量限

取帕瑞昔布钠异构体对照品适量，加正己烷—异丙醇(50∶50)溶解并稀释，制成一定浓度的溶液.在“2.1”项条件下进样，注入高效液相色谱仪，记录色谱图.若该色谱图主峰峰高与空白基线相对应位置的基线噪音比值较大，则逐级稀释供试品溶液，直至比值为10∶1时，注入仪器的量为定量限；当比值为3∶1时，注入仪器的量为检测限.

根据信噪比为3∶1和10∶1时的供试品浓度和进样体积，计算出帕瑞昔布钠异构体的检测限和定量限分别为，0.23 ng和0.52 ng.

2.6重复性实验

取帕瑞昔布钠及帕瑞昔布钠位置异构体对照品适量，共6份，分别加正己烷—异丙醇(50∶50)制成约每毫升含帕瑞昔布钠0.4 mg、帕瑞昔布钠位置异构体0.8 μg的供试品溶液，在“2.1”项条件下，连续进样6次，记录色谱图.计算帕瑞昔布钠峰面积的RSD为1.20%，帕瑞昔布钠位置异构体峰面积的RSD为0.12%.结果表明，本方法进样重复性良好.

2.7溶液稳定性实验

精密量取“2.2”项下对照品溶液10 μL在“2.1”项条件下，于0、2、4、6、8、24、48 h时分别进样，记录色谱图.结果对照品溶液峰面积的RSD为3.29%，表明对照品溶液在室温下48 h内稳定.

精密量取“2.6”项下的1份供试品溶液10 μL在“2.1”项条件下，于0、2、4、6、8、24、48 h时分别进样，记录色谱图.结果供试品溶液中帕瑞昔布钠峰面积的RSD为4.04%，帕瑞昔布钠位置异构体峰面积的RSD为0.68%，表明供试品溶液在室温下48 h内稳定.

2.8加样回收率实验

精密量取“2.2.2”项供试品溶液9份，分别加入不同量对照品储备溶液(4.0 μg/mL)，并用正己烷—异丙醇(50∶50)溶解并稀释成浓度为80%、100%、120%的供试品溶液各3份.在“2.1”项条件下进样，记录色谱图.按外标法计算得平均回收率为94.47%、RSD为3.03%(n=9).

2.9耐用性实验

分别调整流动相比例[(85+5)%正己烷]、流速[(1.0-0.4)mL/min]、波长[(215±5)nm]、柱温[(30±5)℃]和色谱柱(Phenomenex silica 4.6×250 mm，5 μm)，考察本法的耐用性.结果显示，色谱条件在上述范围内的变化不影响测定结果.

2.10样品中位置异构体含量的测定

取6批样品，按“2.2.2”项配制成供试品溶液，分别取10 μL，在“2.1”项条件下进样，记录色谱图，检测样品中帕瑞昔布钠位置异构体，结果均未检出，结果见图3～图5.

图3空白溶液色谱图

图4对照品溶液色谱图

图5供试品溶液色谱图

3讨论

3.1波长的选择

取帕瑞昔布钠与帕瑞昔布钠位置异构体适量，分别用乙腈—水(40∶60)配置成每1 mL含各物质约0.02 mg的溶液，按照紫外—可见分光光度法[9]在200 nm～400 nm范围内扫描，结果表明，帕瑞昔布钠与帕瑞昔布钠位置异构体具有不同的紫外特征峰，最大吸收波长略有差异，但均具有较大的紫外末端吸收，参考相关文献，最终选择波长215 nm作为帕瑞昔布钠中位置异构体含量测定的检测波长.

3.2流动相的选择

由于帕瑞昔布钠位置异构体是帕瑞昔布钠合成第一步磺化过程中在苯环上产生的间位异构，两者极性比较相近，采用有关物质检测条件下的反相液相色谱法不能有效地分离，因此采用正相液相色谱法对本品的异构体进行分离和检查.以正己烷—异丙醇为流动相体系进行流动相的比例筛选.试验考察了正己烷—异丙醇(50∶50)、正己烷—异丙醇(75∶25)、正己烷—异丙醇(85∶15)等流动相对帕瑞昔布钠及位置异构体的分离效果.结果显示，以正己烷—异丙醇(85∶15)为流动相时，帕瑞昔布钠及位置异构体的峰分离完全，且出峰时间适宜，专属性强.3.3样品溶解溶剂的选择

实验比较了以乙腈—水(40∶60)、乙腈—水(47∶53)、正己烷—异丙醇(50∶50)、正己烷—异丙醇(75∶25)、正己烷—异丙醇(85∶15)作为样品溶解溶剂.结果显示，正己烷—异丙醇(50∶50)对帕瑞昔布钠及位置异构体的溶解性较好.

4结论

本研究采用高效液相色谱法，以硅烷键合硅胶为填充剂和正己烷—异丙醇(85∶15)为流动相，对帕瑞昔布钠中的位置异构体进行了含量检测.结果说明，本方法可有效的测定帕瑞昔布钠的间位和对位异构体，为帕瑞昔布钠的实际生产提供了理论依据.

参考文献：

[1]刘超，叶小峥，彭显峰，等.一种帕瑞昔布钠的制备方法：201310259736.6[P].2013-06-26.

[2]徐斌,乔宁.帕瑞昔布钠超前镇痛在骨科下肢手术中的应用[J].南通大学学报(医学版),2011，31(6):457-458，461.

[3]朱美华,曾琼,王宁,等.帕瑞昔布钠对神经外科术后镇痛及躁动的影响[J].临床麻醉学杂志,2011，27(10):976-978.

[4]林江海,徐韶怡,王萍.帕瑞昔布钠用于无痛人工流产术的临床观察[J].海峡药学,2011，23(5):105-107.

[5]宋德玲.帕瑞昔布钠在术后镇痛中的应用进展[J].黑龙江医药，2013，26(3)：481-482.

[6]周敦,董红华,金宁,等.选择性COX-2抑制剂超前镇痛对骨科围手术期镇痛的疗效观察[J].实用骨科杂志,2011，17(11):1044-1046.

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010.

Determination of Positional Isomers in Parecoxib Sodium by NP-HPLC

NIEZhongli1,GUOZhaoyuan2,ZENGJi1,WANGXiaoling3,YEDing3，ZHANGYong3，GUORui3

(1.School of Pharmacy and Bioengineering, Chengdu University, Chengdu 610106, China;2.Sichuan Industrial Institute of Autibiotics, Chengdu University, Chengdu 610106, China;3.Chengdu Climb Pharmaceutical Technology Co., Ltd., Chengdu 610041, China)

Abstract:The paper is going to establish a high performance liquid chromalograph(HPLC) method for the determination of positional isomers in parecoxib sodium.Silane chemically bonded silica is used as bulking agent(Agela Technologies silica 4.6×250 mm，5 μm),with n-hexane-isopropanol(85∶15) as a mobile phase.The detection wavelength is set at 215 nm.The column temperature is 30 ℃ and the flow rate is 1.0 mL/min.The resolution between parecoxib and its positional isomers is 1.86 and the number of theoretical plates are 8 041 and 8 929.The positional isomers in parecoxib sodium shows a good linear relationship at a range of 0.04～0.64 μg/mL(r=0.9998) and also a good repeatability(RSD is 0.12%);the average recovery is 94.47%(RSD is 3.03%,n=9).The method is sensitive,accurate,and simple.Also,it can provide a basis for the quality control of parecoxib sodium.

Key words:HPLC method;impurity testing;parecoxib;positional isomers

文章编号：1004-5422(2016)02-0113-04

收稿日期：2016-05-18.

作者简介：聂忠莉(1966 — )， 女， 副主任药师， 从事药物制剂与分析研究.

中图分类号：R927.2；O657.72

文献标志码：A