三种方法检查判断血尿来源的比较研究

杨麦贵，杨　铮，杨　阳，岳　波，郑善銮，饶国洲，何　娟，樊爱琳，郝晓柯

(第四军医大学：1.西京医院 全军临床检验医学研究所；2.学员旅研究生大队；3.西京医院 全军整形外科研究所及252医院；4.西京医院 耳鼻咽喉头颈外科 陕西 西安710032;西安交通大学 口腔医院口腔医学研究中心，陕西 西安710004)



三种方法检查判断血尿来源的比较研究

杨麦贵1*，杨铮2，杨阳3，岳波4，郑善銮1，饶国洲5，何娟1，樊爱琳1，郝晓柯1*

(第四军医大学：1.西京医院 全军临床检验医学研究所；2.学员旅研究生大队；3.西京医院 全军整形外科研究所及252医院；4.西京医院 耳鼻咽喉头颈外科 陕西 西安710032;西安交通大学 口腔医院口腔医学研究中心，陕西 西安710004)

摘要：目的探讨三种检测方法判断血尿来源的比较研究。方法采用显微镜检查红细胞形态变异率、免疫荧光染色和红细胞电泳，分别对318例经临床及病理确诊的血尿来源患者，进行检测比较。结果确诊的208例肾源性血尿红细胞形态学检查总符合率为69.2%(208/144)；Ig免疫荧光符合率为98.1%(208/204)；红细胞电泳时间符合率为97.6%(208/203)，免疫荧光和电泳法符合率明显高于红细胞形态学有显著性差异(P<0.01),免疫荧光与电泳法无明显差异(P>0.05)。三种方法对110例非肾源性血尿检测阴性符合率分别为97.3%(110/107)；98.2%(110/108)；97.3%(110/107)，红细胞形态学法明显高于免疫荧光和电泳法具有显著性差异(P<0.01)。结论肾源性血尿红细胞被免疫球蛋白(Ig)包裹，表面电荷降低，使Ig免疫荧光和红细胞电泳法对诊断肾源性血尿较特异准确，红细胞形态学虽较差，但易开展适于各级医疗单位，对非肾源性血尿诊断率优于免疫荧光和电泳法。

关键词：血尿-来源；红细胞；形态学；免疫荧光；电泳-时间

(Chin J Lab Diagn,2016,20:0963)

血尿是泌尿系统疾病的主要临床表现之一，鉴别血尿的来源为肾源性血尿还是非肾源性血尿对临床诊断和治疗有着非常重要的价值。检测尿中红细胞形态已成为鉴别肾源性血尿与非肾源性血尿的一种常规诊断方法[1]。但这种方法因尿液红细胞形态可受尿液渗透压、pH值、离子比等而影响效果[2,3]。我们对泌尿系统疾病引起的血尿进行显微镜尿中红细胞形态、免疫荧光染色分析及尿红细胞电泳时间测定，研究探讨在血尿的来源鉴别诊断肾源性血尿与非肾源性血尿的优劣价值。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1标本来自第四军医大学西京医院住院及门诊就诊患者，其主要特征是血尿(肉眼或镜下血尿)，共318例，其中经临床及病理确诊肾源性血尿208例，男性112例，女性96例，年龄58-65(平均61±2)岁。非肾源性血尿患者110例，男性60例，女性50例，年龄56-65(平均60±2)岁。

1.1.2试剂及仪器荧光标记兔抗人IgA、IgG、IgE、IgM抗体，丹麦DAKO公司产，使用前按说明书作1∶10倍稀释。丙酮(分析纯)，西安化学试剂公司产。BX51显微镜影像系统，日本奥林巴斯公司产。WJY-IV型红细胞电泳仪，江苏无锡微机检测仪器有限公司产。TDL-40C型离心机，上海安亭科学仪器公司产。尿沉渣专用塑料管，江苏康捷医疗器械有限公司产。

1.2方法

1.2.1红细胞形态显微镜异常率的分析嘱患者留取新鲜中段晨尿10ml于有刻度的专用塑料管中，置离心机1 500r/min，离心5min，弃上清9.0ml，余底层1.0ml，分别检查红细胞异常率，红细胞免疫荧光及电泳时间。红细胞形态学检查参照文献[4]，按全国统一标准将红细胞分为正常形态和异常形态。正常红细胞为双凹圆盘状的红细胞，异形为影形、皱缩形、棘形和小球形等红细胞，每份标本计数200个细胞，异形红细胞>80%为肾源性血尿，<50%为非肾源性血尿。

1.2.2红细胞免疫荧光检查参照文献[1]取上述尿液200μL生理盐水洗涤离心后取尿沉渣涂片4张，自然晾干丙酮固定10min后染色，先用pH6.0磷酸盐缓冲液洗涤1次，在分别滴加荧光抗体IgA、IgG、IgE、IgM于4张尿沉渣涂片的薄膜上，放入湿盒37℃孵育40min，然后用pH6.0磷酸盐缓冲液洗涤3次滴加甘油缓冲液，荧光显微镜下检测。结果判定，根据红细胞Ig着色的百分率，>90%强阳性，为肾小球性肾炎；60%-80%阳性，为肾性血尿；30%-60%弱阳性，为混合性血尿。只要标本中任何一种抗体显色即为荧光染色阳性。

1.2.3尿红细胞电泳时间检测将尿液红细胞制成4 000-30 000个/ml浓度，然后装入特制的圆形细管中，再把此管放入红细胞电泳槽内，并用琼脂管作架桥与电极相连接，调节工作电压为40伏特，温度为25℃，观察每一标本中的10个红细胞往返165μm距离所需时间[移动时间：秒(S)]每份标本重复两次取平均值。红细胞形态异常率>80%,电泳时间平均值为9.0±0.4S，正常均一性红细胞电泳时间平均值为14.0±0.4S。

2结果

2.1肾源性血尿红细胞形态学、免疫荧光抗体染色及尿红细胞电泳时间检查结果比较

208例肾源性血尿，Ig免疫荧光红细胞染色，显微镜红细胞形态及电泳时间分析。临床及穿刺病例确诊符合率分别为98.1%(208/204)、69.2%(208/144)和红细胞电泳时间97.6%(208/203)(见表1)。

表1　肾源性血尿红细胞形态学、免疫荧光染色及电泳时间结果比较

注：异常红细胞>80%为肾性血尿；<50%为非肾性血尿

2.2非肾源性血尿红细胞形态学、免疫荧光抗体染色及尿红细胞电泳时间检查结果比较

110例非肾源性血尿，Ig免疫荧光红细胞染色，显微镜红细胞形态及电泳时间分析与临床及穿刺病例确诊阴性符合率分别为98.2%(110/108)、97.3%(110/107)和红细胞电泳时间97.3%(110/107)(见表2)。

2.3统计学分析

以上数据经卡方检验，尿红细胞Ig免疫荧光染色、红细胞电泳时间与显微镜红细胞形态分析异形率鉴别肾源性血尿有显著性差异(P<0.01)，红细胞免疫荧光染色与电泳时间差异不明显(P>0.05)。红细胞形态分析鉴别非肾源性血尿优于免疫荧光染色和电泳。

3讨论

血尿是泌尿系统疾病病理改变的临床常见反应的一种重要表现，其病因可分为肾内或肾外因素，引起的病因很多，常见急、慢性肾小球肾炎、IgA肾炎、肾肿瘤、泌尿系统感染、肾结石、膀胱肿瘤、膀胱结石等。目前诊断血尿的来源多用于光学显微镜检查尿沉渣红细胞形态，根据尿中红细胞大小、棘形、皱缩锯齿、影形、半月形、颗粒形红细胞等变形红细胞异常率及类型在两种以上≥80%诊断为肾源性血尿，<50%为非肾源性血尿。方法简单方便，经济省时，易普及适宜各级医疗单位开展，但影响因素较多，主要是尿液pH、渗透压、介质张力、代谢产物的脂肪酸、溶血磷脂酰胆碱、胆酸、细菌及白带污染等的作用影响[4]，所以要求受检者留取清晨中段的新鲜尿液。

表2　非肾源性血尿红细胞形态学、免疫荧光染色及电泳时间结果比较

注：异常红细胞>80%为肾性血尿；<50%为非肾性血尿

免疫复合物是引起肾脏损害的常见原因，尿液红细胞表面包裹Ig分子的机理还尚不清楚。Abrass等[5]报道，肾源性血尿中红细胞表面包有Tamm-Horsfall蛋白，主要于Henle襻升支形成。Ig分子在此附于红细胞表面的可能性较大，因血液在此流动较慢，是Ig有足够时间与红细胞接触黏附于红细胞膜上。用Ig免疫荧光抗体尿红细胞染色，对肾源性血尿定位诊断具有重要价值，不受尿内物质的影响，较特异。

红细胞表面带有负电荷，Feehally[6]发现肾源性血尿红细胞表面的电荷降低，在直流电场中作定向泳动，在固定的距离内以泳动时间的长短表示红细胞表面电荷的多少诊断肾性和非肾性血尿的来源。肾源性血尿红细胞电泳时间缩短，表明其红细胞表面的电荷量减少，可能原因是红细胞通过肾小球基底膜时受挤压及膜表面电荷的影响导致红细胞表面电荷的丢失，其二是由于肾小管内连续性的渗透压改变，在红细胞通过时导致细胞内离子的迁移，红细胞缩小及介质张力等而改变了细胞表面的电荷量[7,8]，非肾源性血尿红细胞没有受到上述因素的作用，均为正常红细胞表面电荷量较多，所以电泳时间就较长。

综上三种检测血尿红细胞来源的方法，与临床及病理诊断确诊的血尿病例符合率显微镜红细胞形态学为69.2%，Ig免疫荧光染色为98.1%，红细胞电泳时间为97.6%，红细胞形态学虽差于免疫荧光和电泳时间法，但此方法简便快速，经济省时，易于开展适用于各级医疗单位，虽然后两种方法较特异、科学准确性较高，但需要特异的免疫抗体试剂，专用仪器设备，尿样要前处理，繁琐耗时，不宜普遍开展，形态学还是目前诊断血尿来源的首选方法，在难以确定血尿来源时可采用免疫荧光或电泳检测诊断，这样较为科学而理想的为临床提供可靠的诊断依据。

参考文献：

[1]丁振若，苏明权，樊爱琳，等.尿液红细胞免疫荧光染色鉴别血尿性质的研究分析[J].国外医学·临床生物化学与检验学分册，2002，23(1):10.

[2]SchramekP,SchusterFX,GeorgopoulosM,etal.Valueofurinaryerythrocytemorphologyinassessmentofsymptomlessmicrohaematuia[J].Lancet,1989,2(8675):1316.

[3]MetzMDSchiphorstPP,GoRI.TheanalysisoferythrocytemorphologicCharacteristicsinurineusingahematologicflowcytometerandmicroscopicmethods[J].AmJClinPath,1991,95(2):257.

[4]刘成玉，罗春丽.临床检验基础[M].北京：人民卫生出版社，第5版，2012，165.

[5]AbrassCK,LairdCW.Tamm-HorsfallProteinCoatlngoffreecellsinurine[J].AmJKidneyDis,1987,9(1):44.

[6]FeehallyJ.MeasureelectricchargeofRBCinurine[J].Lancet,1986，2 (8507):635.

[7]菖光午.尿红细胞分类的临床应用及机理探讨[J].中华医学检验杂志，1987，10(2):85.

[8]林拨.电镜法观察尿红细胞[J].中华肾脏病杂志，1986，2(3):246.

*通讯作者；并列第一作者：杨铮

文章编号：1007-4287(2016)06-0963-03

中图分类号：R446.12

文献标识码：A

作者简介：杨麦贵(1954-),男，主任技师，主要从事检验医学研究。

(收稿日期：2015-03-04)

Acomparativestudyofthreemethodsofexaminationtodeterminethesourceofhematuria

YANG Mai-gui1，YANG Zheng2,YANG Yang3，et al.

(Fourth Military Medical University: 1.Clinical Laboratory,Xijing Hospital,Institute of Medicine;2.Participants Brigade Graduate Brigade;3.Institute of Plastic Surgery of PLA Xijing Hospital And 252 Hospital;4.Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery,Xijing Hospital ,Shanxi Xi'an 710032;5.Research Center of Stomatological Hospital of xi’an Jiaotong University,xi’an 710004,China)

Abstract:ObjectiveDiscussion comparative study to determine the source of the three detection methods hematuria.MethodsMicroscopic examination of the use of red blood cell morphology mutation rate,immunofluorescence staining and erythrocyte electrophoresis,respectively,318 cases diagnosed by clinical and pathological origin of hematuria patients were detected compare.ResultsConfirmed 208 cases of renal hematuria RBC morphology total coincidence rate 69.2% (208/144);Ig immunofluorescence coincidence was 98.1%(208/204);erythrocyte electrophoresis time the rate was 97.6% (208/203),immunofluorescence and electrophoresis was significantly higher red blood cell morphology consistent with a significant difference(P<0.01),no significant difference immunofluorescence and electrophoresis(P>0.05).Three methods of 110 cases of non-compliance with renal hematuria negative detection rates were 97.3% (110/107);98.2%(110/108);97.3%(110/107),significantly higher red blood cell morphology law immunofluorescence and electrophoresis was a significant difference(P<0.01).ConclusionRBC renal hematuria is an immunoglobulin (Ig) parcels,the surface charge reduced,so Ig immunofluorescence and erythrocyte electrophoresis method for the diagnosis of renal hematuria more specific and accurate,though less red blood cell morphology,but easy to carry suitable for all levels medical units,for non-renal hematuria diagnostic yield than immunofluorescence and electrophoresis.

Key words:Hematuria-Source;Red blood cell;Morphology;Immunofluorescence;Electrophoresis-Time