Xpert MTB/RIF技术在基层定点医院肺结核病诊断中的应用价值

刘建侠

(天津市西青医院 检验科，天津300380)



Xpert MTB/RIF技术在基层定点医院肺结核病诊断中的应用价值

刘建侠

(天津市西青医院 检验科，天津300380)

摘要：目的探讨Xpert MTB/RIF技术在基层定点医院肺结核病诊断中的应用价值。方法选取本院感染科门诊2014年7月至2015年9月疑似肺结核患者的痰标本185份，分别进行固体培养法、Xpert MTB/RIF检测技术和药敏试验，比较Xpert MTB/RIF检测和传统检测痰液标本中结核分枝杆菌培养及利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值。结果痰结核分枝杆菌培养阳性96份，阳性率为51.9%；以固体培养法作为金标准，Xpert MTB/RIF检测的敏感度94.8%，特异度为87.6%，阳性预测值为89.2%，阴性预测值为94.0%，Kappa值为0.826；以比例法药敏试验作为金标准，Xpert MTB/RIF检测的敏感度为86.7%，特异度为94.9%，阳性预测值为76.5%，阴性预测值为97.4%，Kappa值为0.774。结论Xpert MTB/RIF检测快速，操作简便，硬件设施要求低，能够有效检测结核分枝杆菌及利福平耐药性，可在基层结核实验室大力推广。

关键词：Xpert MTB/RIF技术；结核分枝杆菌；利福平；耐药性；敏感度；特异度

(ChinJLabDiagn,2016,20:0928)

肺结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，严重威胁着人类的身体健康。肺结核是一种传染性很强的空气传播疾病，在我国近几年法定报告的乙类传染病中占第二位，因此，早期诊断对结核病的治疗、预后和预防有着重要的临床意义。目前固体培养法和液体培养法检测周期较长，因而急需寻求一种简便、快速、敏感度高的检测方法[1]。同时，耐多药结核病(MDR-TB)对结核病的治疗构成新的挑战，我国是27 个MDR-TB严重流行国家之一[2]，及时、准确地获得药敏试验尤为重要。随着新型分子诊断技术的不断发展，结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(xpert mycobacterium tuberculosis/rifampin，Xpert MTB/RIF)受到广大医生和患者的关注[3]。GeneXpert平台Xpert MTB/RIF试验的开发在2009年完成，它被认为是与结核斗争中的一个重要突破，2010年WHO正式对Xpert MTB/RIF技术进行推荐，2014年全球基金耐多药结核病项目并为我国捐赠了一批Gene Xpert 仪器，用于结核病和利福平耐药性的检测。为了探讨Xpert MTB/RIF技术在基层定点医院结核病诊断中的应用价值，本文做如下研究。

1资料与方法

1.1一般资料

选取本院感染科门诊2014年7月至2015年9月疑似为肺结核患者的痰标本185份，标本采集前患者均未使用抗结核药物进行治疗。

1.2仪器和设备

中性罗氏培养由天津市CDC提供，分枝杆菌药敏试验培养基购置于珠海贝索生物技术有限公司；Gene Xpert Dx仪器、Gene Xpert MTB/RIF Cartridge检测盒为美国Cepheid公司产品。

1.3检测方法

所有标本同时进行固体培养法、比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测技术。

1.3.1固体培养法和比例法药敏试验

采用简单法培养，具体操作根据《结核病实验室标准化操作与网络建设》[4]进行。采用4%氢氧化钠进行处理，通过无菌操作的方法将标本在改良罗氏培养基斜面上进行接种，在37℃的条件下分别培养3天和7天后进行观察，然后再每1周观察1次，对生长情况进行详细记录，直至培养至阳性结果出现，如果60天后无生长，则判断为阴性。在培养基上出现菌落时，进行生化实验菌种鉴定和药敏试验，培养阳性标本根据《结核病细菌学检验规程》[5]进行。

1.3.2Xpert MTB/RIF检测

严格按照Gene Xpert MTB/RIF Cartridge检测盒的检测程序进行操作。选取1 ml标本加入处理管中，根据标本的形状加入2倍标本体积的样品试剂标本处理液，采用漩涡振荡15-30 s，然后静置15 min。将检测盒打开，吸取2 ml处理后的样品缓慢加入到检测盒中，再将检测盒放置在检测系统的检测模块中，将仪器打开，进行全自动检测，约2 h后反应结束后，在检测系统窗口下可直接读取测试结果。

1.4统计学方法

采用SPSS19.0统计学软件进行处理，敏感度、特异度、利福平耐药率等计数资料用百分率表示，采用χ2检验，P<0.05说明差异显著有统计学意义。Xpert MTB/RIF检测和金标准检测进行一致性检验(Kappa检验)。

2结果

2.1Xpert MTB/RIF对痰标本结核分枝杆菌的检测结果

185份标本中痰结核分枝杆菌培养阳性96份，阳性率为51.9%；以固体培养法作为金标准，Xpert MTB检测的敏感度为94.8%，特异度为87.6%，阳性预测值为89.2%，阴性预测值为94.0%，Kappa值为0.826，提示两者具有极好的一致性。见表1。

表1　　　　Xpert MTB/RIF对痰标本结核分枝杆菌的检测

2.2Xpert MTB/RIF对利福平的耐药性分析

通过固体培养法共得到96株阳性菌株，通过菌种鉴定，2株为非结核分枝杆菌，其余94株均为结核分枝杆菌。94株菌株中，Xpert MTB/RIF技术和药敏试验分别有17株和15株耐利福平，耐药率分别为18.1%(17/94)和16.0%(15/94)，两者比较无明显差异(χ2=0.151，P>0.05)。以药敏试验作为金标准，Xpert MTB/RIF检测的敏感度为86.7%，特异度为94.9%，阳性预测值为76.5%，阴性预测值为97.4%，Kappa值为0.774，提示两者具有较高的一致性。结果见表2。

表2　　　　Xpert MTB/RIF对利福平的耐药性分析

3讨论

结核病传统的诊断方法有分枝杆菌培养和涂片镜检等，培养法是检测分枝杆菌的金标准，灵敏度和阳性检出率高于涂片法但是耗时较长，需3周-8周才能出结果，具有一定的局限性；涂片镜检快速简单，但是对于含菌量较低的肺外标本较难检测出，而且容易漏诊[6]。大量研究表明，痰液行抗酸染色阳性率较低，这使得结核病痰液样本结核菌数需要达到5 000条/ml以上才能够检测出阳性结果，确诊为结核病[7,8]。并且涂片法无法区分非结核分枝杆菌和结核分枝杆菌。目前药敏试验主要采用比例法或者绝对浓度法，但是检测时间也比较长，需要1个月，一般情况下会影响到患者的用药时间。Xpert MTB/RIF技术是一种全新的体外诊断技术，将样品准备、定量PCR 扩增和荧光扩增检测集于一身的核酸扩增检测分析系统[9]。而且该技术具有一次性试剂盒，能够自动完成检测，比传统的PCR方法更加简便快捷、生物安全性更高、检测过程更不容易受到干扰、检测时间仅需2个小时等优点。正是基于上述优点，WHO将Xpert MTB/RIF技术纳入工作规划中，推荐可以将此方法作为低中收入国家对结核病、耐药性结核病感染检测的主要检测方法。

研究证实，Xpert MTB/RIF技术试剂盒能够对结核杆菌和利福平耐药相关的基因，能够对耐多药患者进行初筛，敏感性和特异度较高，检验周期也比较短，因而临床上可作为首选检测方法[10]。本研究结果显示，以固体培养法作为金标准，Xpert MTB/RIF检测的敏感度为94.8%，特异度为87.6%，阳性预测值为89.2%，阴性预测值为94.0%，Kappa值为0.826，这与大部分研究结果[11]基本一致，提示Xpert MTB/RIF检测和固体培养法具有极好的一致性，而且Xpert MTB/RIF检测不但能够提高敏感度，而且能够缩短检测时间。

以比例法药敏试验作为金标准，其Xpert MTB/RIF检测的敏感度为86.7%，特异度为94.9%，阳性预测值为76.5%，阴性预测值为97.4%，Kappa值为0.774，提示Xpert MTB/RIF检测和药敏试验具有较高的一致性。由于耐利福平分枝杆菌耐药基因主要集中在81bp的核心突变区，Gene Xpert主要是通过对rpoB基因片段核心突变区的检测对耐利福平结核病进行诊断，因而Xpert MTB/RIF检测在结核分枝杆菌对利福平的耐药性的检测上也具有明显优势。利福平耐药性很少单独发生，通常表明对许多其他抗结核病药物均有耐药性,因此利福平耐药作为耐多药的参考指标。

参考文献：

[1]夏辉,赵雁林.Xpert MTB/RIF在我国的应用前景[J].实用医学杂志,2013,29(23):3799.

[2]WHO.The stop TB stratey,case reports,treatment outcomes and estimagtes of TB burden [R].Geneva,2009.

[3]Mark P，Nicol Andrew Whitelaw,Wendy Stevens.Using Xpert MTB/RIF[R].curent Respiratory Medicine Reviews,2013,9,187-192．

[4]赵雁林，刘志敏.结核病实验室标准化操作与网络建设[M].北京：人民卫生出版社，2013：227-280.

[5]中国防痨协会基础专业委员会.结核病诊断实验室检验规程[M].北京：中国教育文化出版，2006：17-18.

[6]贾文韫.Xpert MTB/RIF在骨关节结核患者快速诊断中的应用[J].中国脊柱脊髓杂志，2015，25(3)：208.

[7]徐大叶．某结核病定点医院痰涂片阳性率低的调查及应对措施[J].医学动物防制杂志,2014,30(10):1177.

[8]Boehme CC，Nabeta P，Hillemann D，et al.Rapid moledular detection of tuberculosis and rifampin resistance[J].N Engl Med，2010，263(9)：1005.

[9]邹远妩,刘尚武,朱蕾，等.Xpert MTB/RIF 检测结核分枝杆菌及其耐药性在结核病辅助诊断中的临床价值[J].临床肺科杂志，2015，20(3):568.

[10]Tortoli E，Russo C，Piersimoni C，et al.Clinical validation of Xpert MTB/RIF for the diagnosisof extrapulmonary tuberculosis[J].Eur Respir J，2012，40(2)：442.

[11]李妍，张天华，鲜小萍，等.Xpert Mtb/RIF检测技术诊断结核病和肺外结核的价值J].中国防痨杂志，2013，37(6)：386.

文章编号：1007-4287(2016)06-0928-03

中图分类号：R521

文献标识码：A

作者简介：刘建侠(1970-)，女，副主任技师，从事微生物检验。

(收稿日期：2015-11-24)

Application value of Xpert MTB/RIF technology in the diagnosis of pulmonary tuberculosis in the primary pointed hospital

LIUJian-xia.

(DepartmentofClinicalLaboratory,XiqingHospitalofTianjin,Tianjin300380,China)

Abstract:ObjectiveTo study the application value of Xpert MTB/RIF technology in the diagnosis of pulmonary tuberculosis in the primary pointed hospital.MethodsDuring July 2014 to September 2015,185 cases of sputum samples from patients with suspected pulmonary tuberculosis in the infectious disease department were selected,they were given solid culture,MTB/RIF Xpert detection and drug sensitivity test.The sensitivity,specificity,positive predictive value,negative predictive value and Kappa value of Rifampin resistance and the culture situation of the Mycobacterium tuberculosis that detected from sputum samples by Xpert MTB/RIF technology and traditional technology were compared.Results96 sputum specimens were culture-positive,the positive rate was 51.9%;With solid culture as gold standard,the sensitivity of MTB/RIF Xpert detection was 94.8%,the specificity was 87.6%,the positive predictive value was 89.2%,the negative predictive value was 94.0%,the Kappa value was 0.826;With proportional drug sensitivity test as gold standard,the sensitivity of MTB/RIF Xpert detection was 86.7%,the specificity was 45.9%,the positive predictive value was 76.5%,the negative predictive value was 97.4%,the Kappa value was 0.774.ConclusionThe Xpert MTB / RIF technology is fast and easy to operate,and has a low demand for hardware,it can effectively detect Mycobacterium bacilli and rifampin resistance,and it can be popularized in the primary tuberculosis laboratory.

Key words:Xpert MTB/RIF technology;Mycobacterium tuberculosis;Rifampicin;Drug resistance;Sensitivity ;specificity