幽门螺杆菌感染对特发性血小板减少性紫癜患者外周血CD4+CD25+T调节细胞的影响*

汪宇婴，冯春颜

(广东省深圳市龙华新区人民医院检验科　518109)

·临床研究·

幽门螺杆菌感染对特发性血小板减少性紫癜患者外周血CD4+CD25+T调节细胞的影响*

汪宇婴，冯春颜

(广东省深圳市龙华新区人民医院检验科518109)

目的探讨幽门螺杆菌(HP)感染对特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者CD4+CD25+T调节细胞的影响，进一步揭示ITP的发病机制，为临床诊断、治疗与预防提供重要的理论依据。方法2013年1月至2014年12月门诊及住院收治的ITP患者33例纳入ITP组，HP阴性13例，HP阳性30例。另选取健康体检者40例作为对照组，其中HP阴性23例，HP阳性17例；均测定血清CD4+CD25+T调节细胞的浓度。结果ITP组HP阳性率明显高于对照组，差异有统计学意义。对照组HP阴性者与对照组HP阳性者CD4+CD25+T调节细胞的浓度比较，差异有统计学意义(P<0.05)。对照组HP阴性者、阳性者分别与ITP 组HP阴性者、阳性者比较，差异有统计学意义(P<0.05)。ITP组HP阴性者与HP阳性者比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论HP感染与ITP的发病有一定关系，健康人群HP感染可增加CD4+CD25+T调节细胞的浓度；与健康人相比，ITP患者CD4+CD25+T调节细胞的浓度降低；而HP感染ITP对CD4+CD25+T调节细胞没有影响。

幽门螺杆菌；特发性血小板减少性紫癜；CD4+CD25+T调节细胞

特发性血小板减少性紫癜(ITP)是一种获得性特异性自身免疫性疾病，以骨髓巨核细胞发育成熟障碍，血小板生存时间缩短，数量减少，产生血小板膜糖蛋白特异性自身抗体，并伴有广泛皮肤黏膜及内脏出血为特征。是临床最常见的一种血小板减少性疾病。近年来有学者从基因方面对ITP病例和健康人群进行研究，例如Rs17101655位点T→G多态性的基因型和等位基因频率分布[1],CD86基因启动子-3479 A/C位点单核苷酸多态性与ITP遗传易感性[2]，但都暂时未发现两者有差异。ITP的发病机制迄今尚未完全阐明，但已有研究表明自身免疫性疾病的易感性与CD4+CD25+T调节细胞及幽门螺杆菌(HP)感染有关。有研究表明ITP患者行HP根除治疗后，患者血小板计数升高，提示HP感染可能与ITP的发生有一定的关系[3]。另外，ITP患者外周血CD4+CD25+T调节细胞的数量明显降低[4-5]。HP的感染可以干扰免疫系统，使CD4+CD25+T调节细胞数量增加。HP感染的ITP患者CD4+CD25+T调节细胞的情况如何尚不清楚。能不能用CD4+CD25+T调节细胞的浓度变化来判断ITP患者病情的变化和转归，让患者免受取骨髓的痛苦？本研究旨在讨论HP感染对ITP患者CD4+CD25+T调节细胞的影响，进一步揭示ITP的发病机制，为临床预防、诊断和治疗提供重要的理论依据。

1资料与方法

1.1一般资料深圳市龙华新区人民医院血液科2013年1月至2014年12月门诊及住院收治的ITP患者33例纳入ITP组，诊断均符合《血液病诊断及治疗标准》[6]，其中男14例，女19例；年龄19～69岁，平均(39.0±6.5)岁；所有患者均为初次入院患者，既往未使用激素类药物，排除其他自身免疫性疾病。另选取健康体检者40例作为对照组，其中男17例，女23例；年龄20～65岁，平均(41.1±5.9)岁；无糖尿病、肿瘤及其他免疫性疾病病史，近2个月内未服用过激素及免疫抑制剂，2周内未患感染性疾病。

1.2仪器与试剂异硫氰酸荧光素(FITC)标记的鼠抗人CD4单克隆抗体(CD4-FITC),藻红蛋白(PE)标记的鼠抗人CD25单克隆抗体(CD-25PE)；相应同型对照抗体为FITC标记的小鼠IgG1、PE标记的小鼠IgG1,试剂为美国Beckman coulter公司产品，美国BD公司FACSC calibur流式细胞仪。

1.3检测方法(1)HP阳性的确定：采用14C-尿素呼气试验(UBT)确定，14C-UBT≥100 dpm/mmol即诊断为阳性。CD4+CD25+T调节细胞浓度的测定。(2)CD4+CD25+T调节细胞的浓度测定：抽取2 mL静脉血，采用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝。取流式专用试管2支分别标记对照管和测定管。对照管中加入CD4+-FITC和IgG-PE各20 μL。测定管中加入CD4+-FITC和CD25+-PE各20 μL。再分别加入标本100 μL，混匀，室温避光20 min。两管分别加溶血素50 μL，混匀，室温避光10 min，加蒸馏水500 μL，混匀，室温避光10 min。加磷酸缓冲盐溶液(PBS)3 mL。1 500 r/min离心5 min,弃上清，留沉淀，混悬。采用Cellquest软件进行上样，并用该软件自动统计结果。

2结果

2.1两组HP阳性率比较ITP组HP阳性率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1　两组HP阳性率比较

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.2两组CD4+CD25+T调节细胞的浓度比较对照组HP阴性者与对照组HP阳性者CD4+CD25+T调节细胞的浓度比较，差异有统计学意义(P<0.05)。对照组HP阴性者、阳性者分别与ITP组HP阴性者、阳性者比较，差异有统计学意义(P<0.05)。ITP组HP阴性者与HP阳性者比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

表2　两组CD4+CD25+T调节细胞的浓度比较

注：与ITP组HP阳性者比较,*P<0.05；与ITP组HP阳性者比较,#P<0.05；与ITP组阴性者比较，△P<0.05。

3讨论

ITP发病较隐匿，国内外一直缺乏较为准确的临床流行病学资料。随着对ITP发病机制不断深入研究，目前一般认为免疫因素介导占主要原因。自1998年Gsabarrini等首先提出了HP感染与ITP的发病有关，目前国内外已有许多研究，提示HP感染与ITP的发生有一定的关系[7]。CD4+CD25+T调节细胞是维持机体免疫耐受的重要调控者，在自身免疫性疾病中起重要作用。CD4+CD25+T调节细胞是一种表达白细胞介素-2(IL-2)受体α链(CD25)的CD4+T细胞。CD4+CD25+T调节细胞具有低反应性和免疫抑制的特点。低反应性是指体外很难繁殖和扩增；免疫抑制主要指其具有抑制CD4+和CD8+细胞活化与增殖的能力。Zahran等[8]与Aboul等[9]研究发现，无论是急性还是慢性ITP患者外周血CD4+CD25+T调节细胞数量都是减少的。CD4+CD25+T调节细胞活化后分泌大量的IL-10、肿瘤坏死因子(TGF)-β等抑制性细胞因子，其功能通过这些抑制性细胞因子来实现。因此，推测可能由于ITP患者外周血中CD4+CD25+T辅助细胞数量减少，有效的免疫抑制作用降低，导致自身反应性T细胞激活增多、凋亡减少，促进了血小板的破坏。

CD4+CD25+T调节细胞在HP逃避宿主免疫清除中也起一定作用，Lundgren等[10]发现HP感染者胃和十二指肠黏膜CD4+CD25+T调节细胞高于未感染者，并且它抑制胃黏膜对HP的免疫反应，使HP的感染持续存在。而国内王雪梅等[11]的研究表明HP感染可增加CD4+CD25+T调节细胞的浓度。ITP患者外周血CD4+CD25+T调节细胞的浓度是下降的；HP感染者CD4+CD25+T调节细胞的浓度是升高的；HP感染与ITP的发生有一定的关系。但本研究分析显示HP感染对ITP患者CD4+CD25+T调节细胞浓度无影响，这有可能是统计例数太少所致。希望有更多的学者进一步研究HP感染对ITP患者CD4+CD25+T调节细胞的影响。未来将加大研究例数，观察能否用CD4+CD25+T调节细胞的浓度变化来判断ITP患者病情的变化和转归。为ITP的发病机制、临床诊断、治疗与预防提供重要的理论依据。

[1]李丽华，徐颜美，李静，等．江西汉族人群NRG3基因rs17101655 T→G单核苷酸多态性与ITP的关联性研究[J]．实验与检验医学，2014(3)：237-239．

[2]吴品，王智，陆时运，等．CD86基因启动子-3479 A/C位点单核苷酸多态性与ITP遗传易感性的关系[J]．山东医药，2014(45)：19-22．

[3]莫伟明，叶君，陆甜甜．免疫性血小板减少性紫癜伴幽门螺杆菌感染相关性调查[J]．临床血液学杂志，2014，27(5)：787-789．

[4]王欣，杨敬慈，张广杰，等．CD4+CD25+调节性T细胞表达在ITP和AIHA中的意义[J]．河北医药，2011，33(16)：2462-2463．

[5]宋丽，金呈强，刘仿，等．急性ITP患儿外周血Tr细胞及其与IL-2的相关性研究[J]．中国免疫学杂志，2010，26(5)：462-463．

[6]张之南，沈悌．血液病诊断及疗效标准[M]．3版．北京：科学出版社，2007：172-176．

[7]金瑞放，黄智铭．调节性T细胞与幽门螺杆菌持续感染的研究进展[J]．国际消化病杂志，2010，30(5)：259-260,286．

[8]Zahran AM,Elsayh KI.CD4+CD25+high Foxp3+ regulatory T cells,B lymphocytes,and T lymphocytes in patients with acute ITP in assiut children hospital[J].Clin Appl Thromb Hemost,2014,20(1):61-67.

[9]Aboul LM,Abdel MM,El-Deen MA,et al.Role of CD4+CD25+T cells in children with idiopathic thrombocytopenic purpura[J].J Pediatr Hematol Oncol,2011,33(2):81-85.

[10]Lundgren A，Stromberg E，Sjoling A，et al．Mucosal FOXP3-expressing CD4 CD25 high regulatory T cells in Helicobacterpylori infected patients[J].Infect Immun，2005，73(1)：523-531．

[11]王雪梅，杨清峰，方强，等．幽门螺杆菌感染者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及其相关性分析[J]．中国微生态学杂志，2011，23(12)：1094-1096．

2016-01-12修回日期：2016-03-22)

深圳市龙华新区科技局资助项目(2013027)。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.032

A

1673-4130(2016)12-1678-03