板栗花粉生活力及贮藏适宜温度的研究

邹仁双

(辽宁省林业种苗管理总站，辽宁 沈阳 110036)

板栗花粉生活力及贮藏适宜温度的研究

邹仁双

(辽宁省林业种苗管理总站，辽宁 沈阳 110036)

摘要以辽栗10号花粉为试材，采用培养基法和碘-碘化钾染色法对其进行生活力测定比较，并比较室温(20～25 ℃)、4 ℃、-20 ℃3 种不同贮藏温度下花粉生活力的表现。结果表明：培养基法较碘-碘化钾染色法更适用于板栗花粉测定，-20 ℃温度贮藏板栗花粉的效果较好。

关键词板栗；花粉活力；培养基法；碘-碘化钾染色法

板栗(Castaneamollissima)属于山毛榉科栗属植物[1]，是我国山区一种重要木本粮油作物[1]。在板栗生产过程中，授粉是花期非常重要的自然活动，花粉生活力会受到自身条件和环境的影响而降低，这将直接影响板栗的坐果甚至产量[2,3]。同时，在杂交育种工作中，花粉携带着父本的遗传信息，是其在进行遗传信息交换的基本载体，在进行杂交授粉前，需要对花粉进行采集和保存，用来实现跨区域杂交或者解决花期不遇的问题。所以，无论是板栗的生产栽培还是杂交育种实践，了解其花粉的活力特性和贮藏特性都是非常重要的。为此，笔者以辽栗10号的花粉为试料，对该品种花粉测定和贮藏温度分别进行了比较试验，以期为板栗的花粉活力测定及其花粉资源的临时保存提供参考，为授粉实践提供理论依据。

1材料与方法

1.1试验材料

试材为嫁接5年生栗树，品种为辽栗10号。在栗树散粉前，于2014 年6月中下旬采集该品种带雄花序的枝条于实验室进行水培2 d。采集雄花序，去除花瓣和花丝后收集足量的花粉，并将其分装至2 mL离心管内，分别贮藏在室温(20～25 ℃)、4 ℃、-20 ℃3种温度下进行保存。

1.2试验方法

1.2.1固体培养基法测定板栗花粉生活力测定的花粉为新鲜花粉，参照胡适宜的方法[4]，并略作修改。依次称取硼酸和硝酸钾各0.1 g、硝酸钙和硫酸镁各0.2 g，用蒸馏水溶解并定容至100 mL后混匀作为培养基母液。使用时，将培养基母液中加0.7%琼脂，加热完全溶解后倒入9 cm培养皿内。完全冷却后，取少量花粉轻弹至培养基的中部，盖上培养皿盖，32 ℃培养24 h。花粉萌发后，利用光学显微镜对花粉的萌发情况进行观察。每次观察的视野数为5～10，合计观察花粉粒的个数为200～300。花粉生活力用萌发率表示，即萌发的花粉数量与观察的花粉数量百分比。重复3 次。

1.2.2碘-碘化钾法测定板栗花粉生活力测定的花粉为新鲜花粉，参照王钦丽的方法[5]，并略作修改。依次称取碘化钾1 g和碘0.5 g后用20 mL蒸馏水将其完全溶解，用蒸馏水定容至50 mL。滴2滴于粘有花粉的载物片上。32 ℃下静置5 min后利用光学显微镜观察其着色情况：变为红色的认定为该花粉具有活力，不变为红色的认定为无活力。每次观察的视野数为5～10，合计观察花粉粒的个数为200～300。花粉生活力用萌发率表示，即着色的花粉数量与观察的花粉数量的百分比。重复3 次。

1.2.3不同贮藏处理比较将花粉分别在室温(20～25 ℃)、4 ℃、-20 ℃3种不同环境进行贮藏后，定期测定花粉的生活力。测定方法为固体培养基法(测定操作参见见1.2.1)。每个处理3次重复。

2结果与分析

2．1板栗花粉活力测定方法的确定

从表1 可以看出，使用2种方法检测新鲜板栗花粉生活力均较高，这说明辽栗10号的花粉散粉初期有较强的授粉能力，但相比之下，固体培养基法较碘-碘化钾染色法测定的板栗花粉平均活力高18.9 %，固体培养基法较碘-碘化钾染色法在测定板栗花粉生活力上效果好。可见，把固体培养基法用于花粉生活力测定使花粉生活力表现得更为充分，其结果更为可靠。

表1　板栗花粉生活力不同测定方法比较

2．2板栗花粉贮藏方法比较

如图1所示：无论使用何种贮藏方法，随着时间的延长，花粉的生活力均在不断降低；贮藏温度越低，下降越慢。室温(20～25 ℃)下，辽栗10号的花粉生活力下降的最为明显，10 d后其花粉萌发率已降低至30%以下，大部分花粉已丧失活力，但短时间放置5 d，该品种的花粉的活力仍可超出50%，依然可以用于授粉。在4 ℃贮藏条件下，该品种的花粉的生活力下降速度明显低于室温放置；该条件下，花粉贮藏25 d后的萌发率仍可达到50%，可以作为雌花和雄花花期不遇时花粉临时储藏的方法。以-20 ℃作为贮藏条件，55 d后花粉的萌发率依然可以保持在50%以上，贮藏效果明显好于前2种方法，是花粉贮藏的理想温度。

3结论和讨论

在生产和育种实践中，花粉生活力往往会受到其内在遗传因子及外部环境因素的影响。其中环境因素中合适的温度、相对湿度是花粉萌发的必要条件[2]。不同检测方法测定花粉的萌发率尽管不能够完全等同于其生活力，但在合适的条件下测定结果仍可以表征其生活力[6]。本试验结果表明固体培养基法在32 ℃测定板栗花粉生活力时，花粉萌发良好，能更准确地反映花粉的活力，可作为室内花粉生活力测定的常规方法，这为板栗不同种质资源花粉的评价提供了良好的实验基础。

花粉在贮藏过程中，贮藏温度是影响花粉保存质量的必不可少的关键要素，大量的研究结果表明：贮藏温度越低，花粉保存的时间就会越长，花粉的利用率越高[7]。本试验结果表明，-20 ℃保存较4 ℃保存更为持久，花粉活力保存效果更好。

参考文献：

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第十二卷)[M].北京：科学出版社，1998

[2] 王钦丽，卢龙斗，吴小琴，等.花粉的保存及其生活力测定[J].植物学通报，2002，19(3)：365-373

[3] 蓝上宗.板栗栽培技术问答[ M].北京:中国农业出版社,1998.22-23

[4] 胡适宜.花粉生活力的测定[J].植物学通报，1993，70(2)：60-62

[5]王钦丽，卢龙斗，吴小琴，等． 花粉的保存及其生活力测定[J]．植物学通报，2002，19( 3) : 365- 373

[6] 朱军.遗传学[M].北京：中国农业出版社，2002：112-113

[7] 王改萍，徐涛，彭方仁.木本植物花粉的保存研究进展[J].林业科技开发，2007，21(6)：9-11

Viability of Pollen forCastaneamollissimaand its Optimal Temperature for Storage

Zou Renshuang

(Liaoning Provincial Forestry Seed Administration Station,Shenyang 110036，China)

AbstractTaking pollen of Castanea mollissima No. 10 as materials,its viability were determined by adopting iodine-potassium iodide staining. Viability of pollen under three different temperatures (20-25 ℃,4℃ & -20 ℃)was compared.Result shows that using media method is more applicable to determine the pollen of Castanea mollissima,the temperature of -20 ℃ can store optimally the pollen of Castanea mollissima.

Key wordsCastanea mollissima;viability of pollen;media method;iodine-potassium iodide staining

文章编号：1005-5215(2016)06-0039-02

收稿日期：2016-04-29

作者简介：邹仁双(1978-)，男，辽宁凤城人，大学，工程师，主要从事林业种苗管理工作.

中图分类号：S603.2

文献标识码：A

doi:10.13601/j.issn.1005-5215.2016.06.013