免疫胶体金渗透技术检测抗卵巢抗体的试验研究*

李　凯，李相新，文海军，韦僖雯，谭汝宏，江润昌

(广东省佛山市妇幼保健院检验科　528000)

·临床研究·

免疫胶体金渗透技术检测抗卵巢抗体的试验研究*

李凯，李相新，文海军，韦僖雯，谭汝宏，江润昌

(广东省佛山市妇幼保健院检验科528000)

摘要:目的建立免疫胶体金渗透技术检测抗卵巢抗体(AOAb)的新方法。方法采用人源卵巢抗原，以胶体金颗粒结合的羊抗人 IgG为标记抗体，根据免疫胶体金技术原理，建立免疫胶体金渗透技术法检测人血清抗卵巢抗体。分别检测72份抗卵巢抗体阳性血清和88份健康体检女性血清，并与酶联吸附试验的结果进行对比分析。结果与酶联免疫吸附试验的结果对比，其符合率为 88.75%，特异性为 90.91%，敏感度为86.11%。交叉试验与重复试验结果显示，免疫胶体金渗透技术测定抗卵巢抗体具有稳定性和特异性。结论免疫胶体金渗透技术可以快速准确地测定血清抗卵巢抗体，便于推广普及。

关键词:免疫胶体金渗透技术；抗卵巢抗体；免疫性不孕；酶联免疫吸附试验

抗卵巢抗体是由感染、手术、药物、自身免疫疾病等原因引起的一种靶抗原在卵巢颗粒细胞、卵母细胞、黄体细胞和间质细胞内的自身多靶位多克隆抗体，能够引起卵巢的病理损伤、功能衰竭，进而导致不孕发生[1-2]。调查研究显示，免疫性因素导致的不孕不育已成为困扰适龄生育人群的重要问题，其中10%～30%的不孕患者是由于抗卵巢抗体导致的[3]。因此，采用免疫胶体金渗透技术建立特异、敏感、快速的抗卵巢抗体检测具有重要的意义。

1资料与方法

1.1一般资料收集2013年1～12月来佛山市妇女儿童医院就诊的门诊和住院抗卵巢抗体阳性的患者72份血清作为试验组，同时选取健康体检女性88份血清作为对照组，共计160份，平均年龄(28.7±4.5)岁。

1.2材料

1.2.1卵巢抗原制备用生理盐水将人卵巢组织清洗干净，在pH7.4的0.04 mol/L的Tris-HCL缓冲液中匀浆，过滤，5 000 r/min离心15 min，弃去上清，将沉淀置于0.1 g/L的蔗糖溶液中，加入Trition X-100裂解，离心收集上清，通过抗人全血清的琼脂糖交换树脂sepharose 4B柱，收集清洗液即为人卵巢抗原[4]。

1.2.2试剂抗人卵巢IgG抗体酶联免疫吸附试验试剂盒购自深圳华康生物医学工程有限公司。

1.2.3免疫胶体金渗透技术方法的建立取1 μg/μL人卵巢抗原液喷点在硝酸纤维素膜中央作为检测线,其下方喷点健康人血清 IgG作为质控线，4 ℃放置2 h,37 ℃恒温箱内烘干，冷藏备用。

1.3标本采集与检测所有研究对象抽取空腹静脉血2 mL，3 000 r/min，离心10 min，分离血清，保存于-80 ℃冰箱内待检。检测:在加样孔上滴加封闭液 100 μL待渗入，滴加未稀释血清标本50 μL，15 min内观察结果。质控线与检测线都显色者为阳性；质控线显色，检测线不显色者为阴性。

1.4统计学处理采用SPSS19.0软件进行数据统计分析，计数资料以率表示，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1吸收试验将纯化的人卵巢抗原与酶联免疫吸附试验检出的抗卵巢抗体阳性血清20份等体积混合后用胶体金试纸条检测抗卵巢抗体，结果均为阴性。

2.2干扰试验血清标本中三酰甘油小于或等于25 mmol/L，总胆红素小于或等于1 000 mmol/L，血红蛋白小于或等于10 g/L时对检测结果无影响

2.3对比试验见表1。采用免疫胶体金渗透技术与酶联免疫吸附试验分别检测72份抗卵巢抗体阳性血清和88份健康体检血清，结果对比其符合率为 88.75%，特异性为 90.91%，敏感度为86.11%，两种方法存在正向一致性(P<0.05)，一致性程度较好(Kappa>0.75)。

表1　　免疫胶体金渗透技术与酶联免疫吸附试验结果

2.4重复试验及稳定性检测随机取出不同批次和批间的试纸条进行重复性检测，结果显示，保存6个月之内试纸条效果良好，无特异性产生。

3讨论

近年来，随着生殖免疫医学的研究和发展，大量的研究数据证明，免疫因素是导致不孕和习惯性流产的重要原因，其中抗卵巢抗体是导致女性不孕较为常见的免疫因素[5]。抗卵巢抗体是自身免疫系统将卵巢组织作为抗原而引起的自身免疫反应而产生的抗体，其与卵巢组织抗原相互结合时，单核巨噬细胞、淋巴细胞和浆细胞的浸润可以对卵巢造成不可逆的病理损伤，如卵母细胞数量减少、颗粒细胞变性坏死等，进而影响卵巢的正常功能，阻碍卵母细胞成熟、雌孕激素的产生减少等，导致卵巢功能衰退，甚至不孕[6]。因此，抗卵巢抗体的检测已作为不孕不育患者的重要检测项目，对免疫性不孕的诊断具有重要意义。

免疫胶体金渗透技术是一种以胶体金为标记物，利用抗原与抗体的特异性反应，对待测物质进行定性判断的标记技术。通过免疫胶体金渗透技术检测抗卵巢抗体具有操作简单，反应快速，结果清晰，易于观察，试剂盒可长期保存，费用较低等优点[7]。避免了酶联免疫吸附试验操作步骤较多、易受反应温度和反应时间、洗板是否彻底等诸多因素的影响。在本研究中，与酶联免疫吸附试验结果相对比，免疫胶体金渗透技术的结果符合率为 88.75%，特异性为 90.91%，敏感度为86.11%，两种方法存在正向一致性，而且一致性程度较好。

因此，免疫胶体金渗透技术检测抗卵巢抗体的方法可满足临床快速检测，特别适合于基层医院不孕不育筛查的要求。

参考文献

[1]林建华,严隽鸿,林其德，等.抗卵巢抗体对卵巢组织及其功能影响的实验研究[J].中华妇产科杂志,1998,33(1):20-22.

[2]陈永珍,朱旻,张苏.抗生殖免疫抗体和女性不孕的关系[J].解剖学杂志,2003，26(6):609-610.

[3]陈桂冰,黄绍坤,赵香生，等.免疫不孕患者自身抗体检测结果分析[J].职业与健康，2008，24(16):1725-1726.

[4]陈金娣,黄邱朝,武建国.血清中三种Ig类抗卵巢自身抗体的测定及其临床意义[J].临床检验杂志,1994，12(S1):12-14.

[5]王逢春.抗卵巢抗体检测在不孕症诊断中的应用[J].医学理论与实践，2011，24(17):2098-2099.

[6]赵成元,王丽,王华，等.免疫性不孕抗体阳性引发不孕症的临床诊治分析[J].中国妇幼保健，2013，28(34):4681-4682.

[7]朱文钏,孔繁德,林祥梅，等.免疫胶体金技术的应用及展望[J].生物技术通报,2010,26(4):81-87.

* 基金项目：广东省佛山市医学类科技攻关资助项目(201208013)。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.11.031

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)11-1528-02

(收稿日期：2016-01-17修回日期：2016-03-27)