抑癌基因PTEN在食管鳞癌组织中的表达

马瑞东，曾小飞，郭利明，郝 明(.成都医学院第一附属医院，四川 成都 60500；.成都医学院，四川 成都 60083)

抑癌基因PTEN在食管鳞癌组织中的表达

马瑞东1，曾小飞1，郭利明1，郝 明2
(1.成都医学院第一附属医院，四川 成都 610500；2.成都医学院，四川 成都 610083)

目的 探讨抑癌基因PTEN在食管鳞癌组织中的表达情况。方法 选取2015年1～12月我院胸外科食管癌手术切组织标本及癌组织2 cm以外的食管正常上皮组织各113例，采用免疫组化法检测两种组织中PTEN的表达情况。结果 与癌旁食管正常上皮组织相比，食管鳞癌组织中PTEN蛋白阳性表达率显著降低 (P< 0.01)；PTEN蛋白的阳性表达在不同分化程度、TNM分期以及是否有淋巴结转移之间差异有统计学意义(P< 0.05)；PTEN的阳性表达与肿瘤的恶性程度、淋巴结转移以及TNM分期呈负相关(P< 0.05)。结论 食管鳞癌的发生发展可能与PTEN蛋白的低表达有关。

PTEN基因；免疫组织化学；食管鳞癌

目前食管癌在我国发病率较高，食管鳞状细胞癌是其主要的病理类型，虽然手术以及放化疗取得了一定的疗效，但患者远期效果较差，5年生存率低，为5%～45%[1]。食管癌的发病机制目前仍不清楚，原癌基因激活以及抑癌基因的缺失、失活以及突变可能与肿瘤的发生发展以及肿瘤转移有关。磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)是近年来发现的一种抑癌基因，多个细胞内信号通路的转导与它相关，恶性肿瘤的发生发展与它的异常表达关系密切[2]。本文采用免疫组化检测食管鳞癌组织中PTEN蛋白的表达情况，从而了解PTEN蛋白表达与食管癌发生发展的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象 所有标本均取自2015年1～12月成都医学院第一附属医院胸外科食管癌手术切组织标本。所有标本术后经病理学检查证实为食管鳞癌，且术前未经过放化疗。另外取原发灶组织以及癌组织2 cm以外的食管正常上皮组织(经病理检查证实未见癌细胞)。共搜集标本226例，食管正常组织113例，食管鳞状细胞癌标本113例，男85例，女28例，年龄43岁～72岁，中位年龄57岁；Ⅰ期29例、Ⅱ期57例、Ⅲ期27例；无淋巴结转移37例，有淋巴结转移76例；高分化22例、中分化39例、低分化52例。

1.2 研究方法 福尔马林(10%)固定标本，经脱水和石蜡包埋后进行切片，再HE染色和免疫组化。常规脱蜡、水化、微波恢复抗原，然后进行染色(二甲基羟苯胺显色+苏木素复染)，最后采用SP法检测PTEN基因的表达情况。SP试剂盒以及鼠抗人PTEN抗体分别来自Zymed和Santa Cruz公司。严格按照说明书进行操作，分别设有阳性对照(已知食管鳞癌PTEN阳性标本)和阴性对照(PBS液代替一抗)。

1.3 结果判定 细胞核内棕黄色颗粒为PTEN蛋白阳性表达。以100个细胞/每个视野进行计数，随机观察5个高倍视野(×400)；根据染色强度分别计0～3分:0～3分颜色分别为无着色、淡黄色、棕黄色以及棕褐色；再以阳性细胞所占比例计分，0～3分阳性细胞数分别为<5%、5%～25%、26%～50%、>50%，两项得分相加，≥1分为阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析。计数资料比较采用卡方检验；两变量的相关性行Sperman相关分析。P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PTEN在食管鳞癌以及癌旁正常组织的表达情况 食管鳞癌组织中PTEN阳性表达率显著低于癌旁食管正常组织(P< 0.01)，见表1。

表1 PTEN在食管鳞癌与癌旁食管正常组织的表达情况

2.2 PTEN蛋白表达与食管鳞癌临床及病理特征的关系 在本实验中，在分化程度上，高分化组、中分化组、低分化组PTEN蛋白的阳性表达率分别为77.3%、61.5%、42.3%，高分化组PTEN阳性表达率最高(P< 0.05)；与有淋巴结转移组比较，PTEN蛋白的阳性表达率在无淋巴结转移组中明显升高(P< 0.05)；在TNM分期方面，I期、Ⅱ期、Ⅲ期PTEN的阳性表达率分别为72.4%、57.9%、33.3%，I期PTEN的阳性表达率最高(P< 0.05)，且随着病理分期越晚，PTEN的阳性表达率越低。见表2。

表2 PTEN基因的表达与食管癌患者临床病理特征之间的关系

注:分化程度、TNM分期为单向有序技术资料，采用CMH法进行分析；其他资料采用卡方检验

2.3 PTEN蛋白表达与食管鳞癌临床及病理特征的相关性 PTEN的阳性表达与肿瘤的恶性程度、淋巴结转移以及TNM分期呈负相关(P< 0.05)；PTEN蛋白的阳性表达与其他临床和病理特征无关系(P> 0.05)，见表3。

表3 PTEN蛋白表达与食管鳞癌临床及病理特征的相关性

3 讨论

1997年发现的抑癌基因PTEN不但具有抑癌作用，而且还具有磷酸酶活性[3]；它能抑制肿瘤的增殖，影响肿瘤血管的生成以及加快肿瘤细胞的凋亡，最终抑制肿瘤细胞的发生和发展[4]。PTEN的抑癌机制主要通过以下途径完成:①抑制肿瘤细胞周期和诱导肿瘤细胞凋亡:作为细胞内的第二信使的磷脂酰3，4，5-三磷酸肌醇(PIP3)，它能促进细胞的生长和抑制细胞的凋亡，PTEN能使PIP3去磷酸化，从而影响PI3K/PKB/AKT信号途径，导致细胞周期停滞[5]；②抑制肿瘤细胞的浸润和转移:黏着斑激酶(FAK)调控着细胞凋亡，肿瘤的发生与该基因的激活有密切的联系，抑制该基因的功能可加速细胞的凋亡[6]。PTEN可以通过去磷酸化使FAK失活，也可以通过抑制PI3K /AKT传导通路来调控FAK，使之失活，从而使肿瘤细胞的生长、浸润和转移受到抑制[7]。③影响肿瘤血管的生成:肿瘤血管的生成与HIF1以及促血管生成素/血管紧张素2(Ang/Tie2)体系有着密切关系，HIF1是调控肿瘤血管生成非常重要的转录因子[8]。PTEN可以通过调控PI3K信号通路影响HIF1 信号来调控VEGF 的表达，肿瘤血管的生成受到影响[9]。PTEN也可以通过Ang/Tie-2体系影响血管内皮细胞的周期以及干预肿瘤血管的生成[10]。

PTEN蛋白的表达异常与多种恶性肿瘤相关[11]，李亚楠等[12]报道，PTEN蛋白失活在非小细胞肺癌的发生发展有着重要的作用，并且可以用来评估患者的病情严重程度以及预后。有资料显示[13，14]，PTEN在乳腺癌中表达率较低，并与组织学分级、淋巴结转移以及临床预后相关。有文献报道[5，15]，PTEN蛋白的表达在肝癌组织以及骨肉瘤组织中显著降低。

食管鳞状细胞癌占食管癌的大多数，鳞癌来源于上皮组织，而PTEN蛋白在上皮细胞中广泛表达，基因的突变、缺失以及甲基化是它失活的主要原因[16]。王建正等[17]报道，与癌旁食管正常组织相比，食管鳞癌组织的PTEN表达阳性率显著降低，与本文结果一致，说明食管鳞癌的发生与PTEN蛋白的低表达有密切关系。本文对PTEN的表达与食管鳞癌患者的临床及病理特征的关系进一步研究，结果发现，PTEN的表达与患者的性别、年龄以及肿瘤大小无关；与肿瘤的恶性程度以及肿瘤的病理分期相关，PTEN蛋白随着分化程度的逐渐降低以及病理分期越晚表达越低；与无淋巴结转移者相比，有淋巴结转移者PTEN阳性表达率明显下降；已上说明了食管鳞癌的发展可能与PTEN 蛋白的低表达有关，与相关文献一致[17]。在本研究中，PTEN蛋白在肿瘤是否浸及肌层之间无差异，可能原因是大多数文献浸润深度以是否浸及食管外膜分组，而本文是以是否浸及食管肌层分组；也可能是本研究未浸及肌层病例数较少，造成结果的差异，还需扩大病例数量进一步研究。

食管鳞癌的发生和发展与PTEN蛋白的表达密切相关，它可以用来评估食管鳞癌恶性程度、病理分期以及淋巴结转移情况等。对PTEN 在食管癌中的作用机制进行深入研究，为综合治疗食管癌提供新方法和依据。

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四川省卫生厅科研基金资助项目(编号:090117)

郝 明

R735.1

A

1672-6170(2016)05-0114-03

2016-05-26；

2016-06-30)