家蚕微粒子病治疗药物筛选和应用技术研究

黄旭华，潘志新，韦廷秀，汤庆坤，贾雪峰，黄深惠，王霞，罗梅兰

（广西壮族自治区蚕业技术推广总站，南宁市 530007）

·试验研究·

家蚕微粒子病治疗药物筛选和应用技术研究

黄旭华，潘志新，韦廷秀，汤庆坤，贾雪峰，黄深惠，王霞，罗梅兰

（广西壮族自治区蚕业技术推广总站，南宁市 530007）

家蚕微粒子病是一种可以应用药物进行治疗的蚕病。通过比较多种化学药物对家蚕微粒子病的防治效果，发现阿苯达唑对家蚕微粒子病具有较好的治疗效果，而且对蚕体毒害性低。利用阿苯达唑采取溶液浸泡桑叶或以药粉直接喷洒蚕座上桑叶的方式均可以达到治疗家蚕微粒子病的效果，两种使用方式的实用浓度分别为1 000 mg/L和1.0 g/kg，而且适宜采取每天添食药物1餐的方式利用药物。在蚕种生产中初步应用阿苯达唑组合药物防治家蚕微粒子病，也取得了一定的防治效果。

家蚕微粒子病；治疗药物；阿苯达唑；使用方式

家蚕微粒子病是一种毁灭性蚕病。在蚕业生产中，除了实施母蛾检疫控制家蚕微粒子病胚种传染外，进行蚕业消毒杀灭病原防止食下传染也是防治家蚕微粒子病最基本的措施[1]。但随着养蚕环境复杂化，病原污染严重，虽然严格执行消毒防病制度，有时仍收效甚微，还是无法控制家蚕微粒子病的发生。据此，许多蚕业工作者致力于建立新的家蚕微粒子病防治方法，其中利用化学药剂治疗家蚕微粒子病是研究热点之一。目前已经开发出多种对家蚕微粒子病有一定治疗效果的药物，如防微灵[2]、克微1号[3]、微毒灵[4]、TAAL[5]、原虫净[6]等，其中防微灵应用范围较广，已经在很多蚕区推广应用。这些家蚕微粒子病治疗药物的应用方式主要有两种：一种是将药物溶液喷洒于桑树桑叶上让其内吸，再采摘桑叶养蚕；另外一种是利用离体桑叶浸泡于药物溶液中，晾干后再喂蚕。

虽然国内已经开发出多种家蚕微粒子病治疗药物，但目前在蚕业生产中的应用治疗效果相差甚远，以致于很多药物未能应用于蚕业生产防治家蚕微粒子病，究其原因可能是药物药效不稳定，或者使用方式与生产形势需求存在差距。为了提升化学药物在家蚕微粒子病治疗方面的应用范围，本文筛选新的家蚕微粒子病治疗药物，并探索新的家蚕微粒子病治疗药物使用方式，以期促进药物治疗成为蚕种生产防控家蚕微粒子病的重要方式。

1 材料与方法

1.1 试验用蚕品种

932×芙蓉，7532×湘晖。

1.2 药物

多菌灵（广东省农科集团前沿动物保健有限公司生产），阿苯达唑片（中美天津史克制药有限公司生产），阿苯达唑（原料），芬苯哒唑片（南京金盾动物药业有限公司生产），左旋咪唑（原料）。

1.3 病原

家蚕微孢子虫（Nosema bombycis，简称Nb），由广西蚕业技术推广总站蚕病研究室保存，接种蚕体繁殖后，再进行孢子提取、纯化和精制[7]，4℃保存备用。配置试验浓度为1.0×105个孢子/mL。

1.4 试验方法

1.4.1 攻毒处理 用经过含有效氯浓度为0.5%的漂白粉精溶液浸泡消毒10 min的洁净桑叶（下同）浸泡到家蚕微孢子虫孢子溶液中，取出、晾干，然后给供试蚕添毒12 h。

1.4.2 家蚕微粒子病有效治疗药物筛选 将各种药物配制成浓度500 mg/L的溶液。分别取适量桑叶浸泡到各种药物溶液中，晾干后备用。用含有孢子的桑叶给4龄起蚕连续添食12 h后，马上饲喂含药桑叶1餐，之后每天饲喂含药桑叶1餐，其他时间改用洁净桑叶饲喂，饲养至熟蚕、结茧、化蛾，逐头进行镜检，调查感染率。试验设毒对照和空白对照，每个处理设2个重复，每个重复50头蚕。

1.4.3 家蚕微粒子病治疗药物使用方式比较 通过在1.4.2筛选出药效最佳的药物，分两种方式使用药物：（1）将目的药物配制成浓度1 000 mg/L的溶液，取适量桑叶浸泡到药物溶液中，晾干后再饲喂家蚕；（2）将药物粉剂直接喷洒到蚕座的桑叶上，药物用量为1.0 g/kg，即1 kg桑叶用药1.0 g药物。其他攻毒和用药时间及调查方式同1.4.2。

1.4.4 家蚕微粒子病治疗药物有效使用浓度调查将1.4.2筛选出药效最佳的药物采取溶液浸泡桑叶和药粉直接喷洒桑叶两种方式用药，其中设定溶液浸泡方式有效成分浓度为500 mg/L、1 000mg/L和1 500 mg/L；药粉喷洒方式有效成分浓度为0.5 g/kg、1.0 g/kg和1.5g/kg。其他攻毒和用药时间及调查方式同1.4.2。

1.4.5 家蚕微粒子病治疗药物有效治疗时期调查选择1.4.2筛选出药效最佳的药物。给4龄起蚕连续攻毒12 h后，进行分区，50头/区，然后分别于0 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60取蚕喂药，每个处理设3个重复区（50头蚕/区），添食含药桑叶12 h后，其他时间改用正常桑叶饲喂，饲养至熟蚕、结茧、化蛾，逐条进行镜检，调查感染率。试验设攻毒后连续添食含药桑叶的用药对照、毒对照和空白对照。

1.4.6 家蚕微粒子病治疗药物使用有效间隔时间调查 选择1.4.2筛选出药效最佳的药物。给4龄起蚕连续攻毒12 h后，立即添食含药桑叶1餐，然后进行分区，50头/区，分别按照每餐添食药叶、每天添食药叶1餐和2 d添食药叶1餐的方式进行用药比较，非用药时间改用洁净桑叶饲喂，饲养至熟蚕，给结茧、化蛾后，逐条进行镜检，调查感染率。试验设攻毒后连续添食含药桑叶的用药对照、毒对照和空白对照。

1.4.7 家蚕微粒子病治疗药物药害调查 依据蚕药试验技术指导原则[8]，以实用药物浓度的1倍、3倍和5倍剂量进行生物试验，调查药物对生物体的毒害性。以阿苯哒唑浓度1.0 g/kg为实用药物浓度，采取药粉直接喷洒桑叶方式用药，分区（400头/区），分别以1.0 g/kg、3.0 g/kg和5.0 g/kg阿苯哒唑有效成分重量的药粉喷洒到桑叶上再饲喂家蚕，每个处理设3区，以4龄起蚕开始饲喂含药桑叶1餐（6 h），以后每天饲喂含药桑叶1餐（6 h），其他时间饲喂洁净桑叶，饲养至熟蚕、上蔟、结茧。试验设对照组：利用正常桑叶饲喂家蚕。家蚕上蔟结茧7 d后，调查虫蛹生命率、全茧量、茧层量、茧层率，待蚕蛹羽化出蛾后，使雌雄蛾交配，产卵，调查卵量和蚕卵孵化率。饲养期间每天记录家蚕的生长情况，记录死蚕或病蚕头数、结茧数、化蛾数、死笼数等。

1.4.8 家蚕微粒子病治疗药物蚕种生产应用调查经筛选出的治疗药物在某蚕种场某批原种的6户做应用效果调查，按照药叶1.0 g/kg的用量并采用蚕座喷洒方式用药；4龄起蚕开始用药，每天添食含药桑叶1餐，其他时间改用正常桑叶饲喂，按照常规原种生产方式制种，送检。分别调查各区的斤茧粒数、死笼率、茧层率和毒率。

2 试验结果

2.1 家蚕微粒子病有效治疗药物筛选

以多菌灵、阿苯达唑、芬苯哒唑、左旋咪唑等4种药物有效成分浓度为500 mg/L添食治疗家蚕微粒子病，试验结果如表1。

表1 各种化学药物对家蚕微粒子病的治疗效果

由表1可知，多菌灵和阿苯达唑对家蚕微粒子病的治疗效果分别为60%和94%；而芬苯哒唑和左旋咪唑对家蚕微粒子病基本无治疗效果。所以阿苯达唑是作为治疗家蚕微粒子病的最佳选择药物。

2.2 家蚕微粒子病治疗药物使用方式比较

选择阿苯达唑作为试验对象，采取药物溶液浸泡桑叶和药粉直接喷洒桑叶的两种方式进行治疗家蚕微粒子病，试验结果如表2。

由表2可知，阿苯达唑采取溶液浸泡桑叶和药粉直接喷洒桑叶两种方式用药均对家蚕微粒子病具有很好的治疗效果，治疗效果均超过95%以上。

表2 阿苯达唑两种使用方式对家蚕微粒子病的治疗效果

2.3 家蚕微粒子病治疗药物有效使用浓度调查结果

掌握药物使用浓度是达到有效治疗和控制成本的关键，同时调查了阿苯达唑采取溶液浸泡和药粉喷洒方式的不同使用浓度的治疗效果，试验结果如表3。

表3 阿苯达唑使用浓度治疗家蚕微粒子病效果

由表3可知，采取溶液浸泡桑叶方式使用阿苯达唑治疗家蚕微粒子病，使用浓度为500 mg/L以上即有很好的治疗效果，为了保证治疗效果，最好使用1 000 mg/L以上的药物浓度；当采取药粉直接喷洒桑叶的方式时，以0.5 g/kg用药量使用也可达到67.33%的治疗效果，1.0 g/kg以上效果更佳。

2.4 家蚕微粒子病治疗药物有效治疗时期调查结果

家蚕微孢子虫孢子感染蚕体后，在蚕体内形成“芽体→裂殖体→孢子母细胞→成熟孢子”的发育过程，而阿苯达唑的作用位点是孢子何种发育阶段？在家蚕感染Nb后，分别于0 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h利用阿苯达唑进行添食治疗，试验结果如表3。

由表4可知，家蚕感染Nb后，在12～36 h之间添食阿苯达唑具有较好的治疗效果，该时期正是家蚕微孢子虫孢子裂殖体发育阶段。因此，阿苯达唑的作用位点是孢子的裂殖体；在孢子的芽体（0 h）、孢子母细胞（超过60 h）及成熟孢子阶段利用阿苯达唑治疗没有效果。此结果也证明利用阿苯达唑治疗家蚕微粒子病时只要在36 h内能够利用药物就具有明显的治疗效果。

表4 阿苯达唑治疗家蚕微粒子病有效时期

2.5 家蚕微粒子病治疗药物使用有效间隔时间调查

依据2.4试验结果可知，应用阿苯达唑治疗家蚕微粒子病具有一个治疗有效期（12～48 h），在该范围内应用药物即有治疗效果，因此养蚕实际应用中可以考虑间隔应用药物，开展生物试验调查阿苯达唑使用有效间隔时间结果如表5。

由表5可知，饲养家蚕时应用阿苯达唑治疗家蚕微粒子病，每餐均添食药物、每天添食药物1餐和每2天添食药物 1餐的治疗效果分别为 96.67%、92.67%和72.00%，3种用药方式均对家蚕微粒子病具有一定的治疗效果，尤其是每天添食药物1餐与每餐均添食药物差异不显著。因此，生产应用可以考虑采取每天添食药物1餐的方式应用阿苯达唑治疗家蚕微粒子病。

表5 阿苯达唑治疗家蚕微粒子病有效间隔时间

2.6 家蚕微粒子病治疗药物药害性

依据蚕药技术指导原则，以阿苯哒唑浓度1.0 g/kg为实用药物浓度，分区分别以1.0 g/kg、3.0 g/kg和5.0 g/kg阿苯哒唑药粉喷洒到桑叶上再饲喂家蚕的方法调查阿苯哒唑对家蚕的毒害性，试验结果如表6。

由表6的试验数据可知，利用桑叶含阿苯哒唑浓度为1.0 g/kg、3.0 g/kg和5.0 g/kg给家蚕添食，与对照组比较，家蚕的虫蛹生命率、茧质（全茧量、茧层量和茧层率）和卵质（卵量和孵化率）数据没有显著差异，说明阿苯达唑粉剂对家蚕的毒害性低。

表6 阿苯哒唑药物对家蚕药害性调查

2.7 蚕种生产应用家蚕微粒子病治疗药物效果

在原种生产中应用阿苯达唑药物，调查蚕种毒率控制情况，以及药物应用对家蚕各项性状的影响。试验共分6组，应用于芙蓉、932、7532和湘晖4个桑蚕品种结果，如表7。

由表7可知，在桑蚕原种生产中应用阿苯哒唑防治家蚕微粒子病，各组均有一定的治疗效果，与非用药区比较，用药处理区毒率下降率最高达到73.91%，最低也达到27.69%，平均下降率达到38.64%，说明在蚕种生产中应用阿苯哒唑防治家蚕微粒子病效果显著，而且对家蚕各项性状无影响。

表7 蚕种生产应用阿苯达唑治疗家蚕微粒子病效果调查

续表6

3 讨论

家蚕微粒子病是一种危害性很大的蚕病，据统计全国每年通过检疫超标淘汰蚕种超过100万张。而有关文献报道和本文试验结果也证明家蚕微粒子病是一种可以利用药物进行治疗的蚕病[9]，如“防微灵”已经多年在蚕种生产应用于防治家蚕微粒子病，在一些蚕区还取得了很好的防控效果[10]，还有其他一些家蚕微粒子病治疗药物产品，如克微1号[3]、微毒灵[4]、原虫净[6]等，均有试验证明对家蚕微粒子病具有很好的治疗效果。但目前在蚕种生产中应用这些家蚕微粒子病治疗药物的范围比较小，而且还有逐步萎缩趋势，究其原因可能存在以下几方面问题。其一，有些药物药效低，辅剂与主剂配合性差，造成药效不稳定，如在同等使用浓度下，阿苯哒唑的治疗效果比多菌灵好，而药物的助溶剂也很关键，如吐温—80对阿苯哒唑具有很好的助溶效果，但两者组合，活力就基本消失，因此筛选药效高、配合性好的药物组合非常重要；其二，蚕业生产形势变化，桑蚕业与其他行业的比较效益降低，从事农业生产的劳动力老龄化，普遍追求省力化方式养蚕，而家蚕微粒子病治疗药物主要使用方式是在桑叶上喷洒药物溶液，以桑叶吸收的方式进行应用，据长期在蚕种生产一线工作的同志说“现在让农民背着药箱到桑园喷药的方式已经不可能实施了”，而目前桑蚕业多数分布在山地、丘陵地区，桑园零星分散，不适宜机械化用药，另外采用药物溶液浸泡桑叶的方式应用药物，很多蚕户没有专用场地和设备晾干桑叶，蚕儿食下过量的水分也影响蚕体健康，因此改进家蚕微粒子病治疗药物用药方式迫在眉睫；其三，药物使用浓度和时间上存在局限性，也是导致药物实用上的不稳定[11]，苯丙咪唑类药物对家蚕微粒子病的作用机理基本是抑制孢子裂殖体增殖，在裂殖体阶段能够使用较高的药物浓度作用才能全面抑制孢子增殖，如采用桑园桑叶喷洒药物再饲喂家蚕方式，虽然能够时刻使蚕儿食下药物，但药物在桑树桑叶长期存在会逐渐分解，降低浓度，使很多情况下孢子感染后在裂殖体阶段蚕体内未有适合药物浓度作用，造成治疗效果不稳定；另外，既然药物对孢子作用位点只是裂殖体阶段，药物应该可以间隔时间再使用，这样既可以降低用药成本，也达到治疗效果。因此根据药物作用机理分析，家蚕微粒子病治疗药物可以采取“少餐高浓度应用，间隔时间用药”的方式使用药物。

本文针对上述家蚕微粒子病应用问题，开展了一系列研究。筛选出一种对家蚕微粒子病具有高效治疗的药物——阿苯哒唑，还创新性建立了在蚕座上利用药粉直接喷洒桑叶的有效应用方法。另外，还探索出阿苯哒唑应用于治疗家蚕微粒子病实用浓度，即采取溶液浸泡桑叶方式时使用1 000 mg/L的药物浓度，采取药粉直接喷洒桑叶的方式时使用1.0 g/kg的用药量；以及采取每天添食药物1餐的方式应用阿苯达唑治疗家蚕微粒子病。试验证明本试验建立的家蚕微粒子病治疗方式对对家蚕的毒害性低，在生产上应用也初步取得一定效果。

致谢：本文在试验过程中获得广西蚕业技术推广总站蒋满贵、莫云霞、陆俣伽、李安华、谭福洋、夏青、石美宁、唐亮、卢德、陶积阳、李燕飞、安春梅、胡文娟，河池市蚕种场黄康东、覃龙伟，环江县蚕业站全诚，来宾市蚕种场陈家福、莫优想等同志的帮助，在此表示感谢！

［1］浙江大学.家蚕病理学[M].北京：中国农业出版社，2000：148-173.

［2］刘仕贤，方定坚，廖森泰，等.防微灵治疗家蚕微粒子病[J].广东农业科学，1993，20（4）：40-43.

［3］沈中元，徐莉，张志芳，等.克微1号治疗家蚕微粒子病研究[J].中国蚕业，1997，18（3）：11-13.

［4］沈中元，徐莉，孟春燕.微毒灵对家蚕微粒子病治疗效果试验初报[J].中国蚕业，2000，21（2）：20-22.

［5］贡成良，朱军贞，潘中华，等.复配TAAL对家蚕微粒子病的治疗[J].江苏蚕业，2000，21（3）：9-11.

［6］王裕兴，朱军贞，蒋秀萍，等.“原虫净”对家蚕微拉子病的防治效果[J].中国蚕业，1999，20（1）：9-11.

［7］梅玲玲，金伟.家蚕微孢子虫和桑尺蠖微孢子虫的研究[J].蚕业科学，1989，15（3）:135-138.

［8］沈中元.蚕药试验技术指导原则[C]//中国蚕学会.中国蚕学会商品性小蚕饲养规程和蚕病防控学术研讨会论文集.广州，2010：126-135.

［9］E.S.Didier，M.E.Stovall，L.C.Greenb，etc.Epidemiology of microspori-diosis:sources and modes of transmission [J].Veteri nary Parasitology，2004，126：145-166.

［10］廖森泰，杨琼.家蚕微粒子病防治新技术研究[M].中国农业科学技术出版社，2014：36-56.

［11］鲁兴萌，金伟，吴一舟，等.丙硫苯咪唑等药剂对家蚕微粒子病的治疗作用[J].中国蚕业，2000，21（1）:19-21.

S884.21；

A；

1006-1657-（2016）01-0006-6

2015-12-08；

2016-2-15

广西科学研究与技术开发计划项目（No.桂科重14121002-4-2）；广西壮族自治区蚕业科学研究院青年基金项目（No.桂蚕科201306）。

信息］黄旭华（1979—），男，硕士研究生，高级农艺师，主要从事蚕病防治研究工作。E-mail:hgisoi@163.com