红花黄色素A对脓毒症大鼠血清TNF-α、TF及TFPI的调控和凝血机能的影响

李秋宇， 金醒昉

(昆明市延安医院重症医学科，云南昆明 650051)



红花黄色素A对脓毒症大鼠血清TNF-α、TF及TFPI的调控和凝血机能的影响

李秋宇， 金醒昉

(昆明市延安医院重症医学科，云南昆明 650051)

[摘要]目的：探讨红花黄色素A对盲肠结扎穿孔(cecalligation-perforation，CLP)模型诱导的大鼠早期凝血功能及炎症反应的作用。方法：健康SD大鼠120只分4组：对照组、假手术组、CLP组(模型组)、CLP+红花黄色素A组，观察红花黄色素A对CLP模型诱导的大鼠脓毒症时凝血功能的影响及血清中组织因子(tissue factor，TF)及组织因子途径抑制物(tissue factorpathway inhibitor，TFPI)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a，TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β)的变化。结果：CLP组与对照组、假手术组相比较，凝血酶原时间(prothrombin time，PT)、活化部分凝血激酶时间(activated partial thromboplastin time，APTT)水平均增加(P<0.05)，CLP+红花黄色素A组PT及APTT水平较CLP组降低(P<0.05)。CLP组IL1-β、TNF-α、TF、TFPI水平相较于对照组、假手术组均升高(P<0.05)，CLP+红花黄色素A组IL1-β、TNF-α、TF水平较CLP组增加，TFPI水平较CLP组降低(P<0.05)。结论：红花黄色素A除了可以改善凝血异常也可以降低炎性反应，安全、有效、易获取，可成为脓毒症早期治疗及缓解脓毒症时的临床辅助药物。

[关键词]脓毒症；凝血；红花黄色素A；TF；TFPI；TNF-α；白介素-1β

1材料与方法

1.1材料健康、雌雄不拘SD大鼠120只，体重140～224 g，购自昆明医科大学实验动物中心，平均体重182 g，于实验室饲养(通风向阳，新鲜饲料，自由饮水，温度20～22 ℃，湿度50 %～55 %)。

1.2方法

1.2.1动物模型制备清洁级雄性SD大鼠，适应性饲养1周后，按照Daniel R等[1]报告的方法行盲肠结扎穿孔(cecalligation-perforation，CLP)，复制严重腹腔感染致脓毒症模型。术前禁食12 h，自由饮水。以3 %戊巴比妥腹腔注射(0.12 mL/kg体重)麻醉，麻醉后大鼠，腹正中线切口，暴露盲肠并结扎根部(避免结扎回肠及盲肠系膜血管)，用16号穿刺针贯通穿刺盲肠2次形成肠瘘，并轻轻挤压，让小量大便进入腹腔。将盲肠还纳腹腔，逐层缝合腹壁切口，术毕立即皮下注射10 mL生理盐水抗休克，自由饮水。假手术组仅开腹翻动盲肠后关腹。

1.2.2动物的分组及处理健康SD大鼠120只，雌雄各半，按随机数字法分成4组：对照组、假手术组、CLP组(模型组)、CLP+红花黄色素A(20 mg/kg)组。红花黄色素A于CLP后立即经腹腔注射，对照组给予等量生理盐水。

1.2.3检测指标及方法TF、TFPI、TNF-α、IL-1β用酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒(江莱化学科技(上海)有限公司)测定；凝血功能采用YSMEX凝血分析仪进行分析。

1.3统计学分析采用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差表示，多组比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1红花黄色素A对脓毒症大鼠血清PT、APTT水平的影响CLP组与对照组、假手术组相比较，PT、APTT水平均增加(P<0.05)。CLP+红花黄色素A组PT及APTT水平较CLP组降低(P<0.05)，见表1。

表1　红花黄色素A对脓毒症大鼠血清PT、APTT水平的影响

a为与对照组、假手术组相比较P<0.05；b为与CLP组相比较P<0.05

2.2各组大鼠血清IL-1β、TNF-α、TF、TFPI水平的变化CLP组IL1-β、TNF-α、TF、TFPI水平相较于对照组、假手术组均升高(P<0.05)，CLP+红花黄色素A组IL1-β、TNF-α、TF水平较CLP组增加，TFPI水平较CLP组降低(P<0.05)，见表2。

表2　各组大鼠血清IL-1β、TNF-α、TF、TFPI水平的变化

a为与对照组、假手术组相比较P<0.05；b为与CLP组相比较P<0.05

3讨论

脓毒症病情凶险，病死率高，因此深入研究脓毒症的发病机制，寻求新的治疗手段是重中之重。脓毒症病情恶化、造成脓毒性休克、多器官功能障碍综合征的根本原因是炎症、凝血与纤溶失衡共同构成内环境紊乱。炎症和凝血之间错综复杂的关系在脓毒症发病以及微循环衰竭和多脏器功能障碍形成巾起到重要作用[2]。在脓毒症的治疗中既要控制促炎反应又要控制促凝反应。红花是中医应用最多的抗凝药物之一，红花的主要提取物为红花黄色素A，红花黄色素A为一血小板激活因子(platelet activating factor，PAF)受体拮抗剂[3]，可抑制PAF诱发的家兔血小板黏附、5-羟色胺释放及血小板内游离Ca2+浓度升高，还可抑制ADP诱导的家兔血小板聚集，是红花黄色素抗血栓机理之一。

本实验CLP组与其他各组大鼠PT及APTT时间相比均延长，CLP+红花黄色素A组大鼠PT及APTT时间较CLP组大鼠缩短；CLP+红花黄色素A组血清TF水平下降，TFPI水平升高，因此红花黄色素A的应用改善了脓毒症大鼠的凝血异常，CLP+红花黄色素A组大鼠血清炎症因子TNF-α,IL-1β的含量较CLP组大鼠降低，表明在凝血异常改善的同时促炎因子的水平也有所下调。因此，红花黄色素A的应用可以减缓凝血系统与炎症系统的相互促进，并且减少多器官功能障碍综合征的发生，对脓毒症时的各脏器损伤有保护作用[4]。

目前对于脓毒症的研究，炎症系统与凝血系统的相互作用是最主要的方面，红花黄色素A除了可以改善凝血异常也可以降低炎性反应，安全、有效、易获取，可成为脓毒症早期治疗及缓解脓毒症时的临床辅助药物。

参考文献

[1]Daniel R,L Marco H,Ward P A.The disconnect between animal models of sepsis and human sepsis[J].Journal of Leukocyte Biology,2007,81(1):137-143.

[2]高原，吕长俊.脓毒症与凝血—炎症网络研究进展[J].滨州医学院学报，2010，33(1)：60-62.

[3]梁勇，曹书华，王勇强，等.加味凉隔散对脓毒症患者血小板活化及凝血功能影响的临床研究[J].辽宁中医杂志，2010，37(7)：1289-1291.

[4]潘娅静,徐敏.血必净注射液对脓毒血症患者的脏器保护作用[J].浙江中医杂志,2010,45(4):306-307.

(收稿日期：2014-10-14)