死后细菌学检测在死因鉴定中的作用初探

黄鸿江　张彬云

武宣县公安局，广西　武宣　545900



死后细菌学检测在死因鉴定中的作用初探

黄鸿江张彬云

武宣县公安局，广西武宣545900

摘要：目的：评价死后细菌学检测在死因鉴定中的作用。方法：取健康SD大鼠30只，10只采用颈椎脱臼法处死纳入A组，10只制作缺氧缺血模型20min确认死亡纳入B组，10只注射金黄色葡萄球菌纳入C组，不给于治疗，待死亡，分别在死后3、6、9日，取后肢深部肌肉，采用化学发光法检测ATP水平，另取30只SD大鼠，同法处死，分别在死后第1-10日，采样取后肢深部肌肉、肝脏、脾脏、肾脏组织，进行细菌学培养镜检。结果：以ATP浓度对数值作为横坐标，以相对发光单位的对数值作为横坐标，呈一元线性方程Y=0.815X+9.015，R2=0.998，P<0.01；A组、B组、C组死后第3日、6日、9日ATP组间与组内比较差异具有统计学意义(P<0.05)；普通培养、厌氧培养，A组、B组、C组肌肉、肝脏、脾脏、肾脏细菌培养阳性出现时间、优势菌类型差存在差异。结论：死后细菌学检测可用于死因鉴定中，ATP、细菌培养与鉴定等都可作为死因判断依据，但检测结果受观察时间等因素影响，同时是否适用于野外大型动物死亡尚无明确定论。

关键词：死因；细菌学检查；司法鉴定

死因鉴定是司法鉴定的基础工作，是法医学鉴定需解决的关键问题，重要性仅次于死亡时间。但需注意的是，死亡24h之内，尸体尚未发生腐败，但死亡24h后，尸体便逐年开始腐败，出现各种晚期尸体现象，出现各种细菌滋生、繁殖，尸体组织形态逐渐崩解、内源性化学物质不断降解，难以建立相应的死后细菌学检查体系。目前尚无一个确切、完整、系统的“法医微生物学”概念与理论，但法医学、微生物交叉融合内容已较丰富。

一、材料与方法

(一)实验动物与材料

取健康SD大鼠30只，雌雄不限，体重150-200g，随机分为10组，其中10只采用颈椎脱臼法处死纳入A组，10只制作缺氧缺血模型20min确认死亡纳入B组，10只注射金黄色葡萄球菌纳入C组，不给于治疗，待死亡。分别在死后3、6、9日，取大鼠尸体，按照无菌操作要求，取后肢深部肌肉，准确称量成若干份，每份100mg，编号放入灭菌EP管，-70℃冻存待测。设备采用TD-20/20Luminometer、ATP、APyrase等与相关检测试剂盒。另取30只SD大鼠，同法处死，分别在死后第1-10日，采样取后肢深部肌肉、肝脏、脾脏、肾脏组织。

(二)方法

1.检测组织中微生物ATP

取样本0.10g 2ml无菌均浆器中，加入0.9ml 4℃无菌生理盐水，均浆，收集5ml放入无菌EP管中，1ml无菌生理盐水振洗，3次，混匀3000r/min离心5min。取离心后样品上层清洗50μl检测管内，加入50μ Triton X-100与腺苷三磷酸双磷酸酶混合液，37℃赋予10min，沸水水浴1min，加入100μl BacTier-GloTM检测液，孵育5min，检测发光值，以无菌生理盐水作为空白，计算ATP标准曲线。

2.菌种培养鉴定

获得均浆，接种，以分区划线法接种于培养皿中，每份样品接种2份，分别在37℃有氧条件和37℃无氧条件下培养24h。采用接种环刮培养菌落，涂抹在栽载玻片中央，酒精灯烤制细菌涂片，采用Granm染色法染色，油镜下观察细菌形态。

(三)统计学处理

二、结果

(一)微生物ATP

以ATP浓度对数值作为横坐标，以相对发光单位的对数值作为横坐标，呈一元线性方程Y=0.815X+9.015，R2=0.998，P<0.01。A组：死后第3日、6日、9日，-Log([ATP])分别为(10.63±0.14)%、(7.81±0.11)%、(8.17±0.12)%，B组则为(7.82±0.15)%、(6.17±0.12)%、(7.52±0.20)%，C组则为(12.7±1.27)%、(10.6±6.42)%、(11.8±6.20)%，差异具有统计学意义(P<0.05)。

(二)菌种培养鉴定

普通培养，A组与B组1-3日，肌肉、肝脏、脾脏、肾脏均无细菌生长，C组脾脏、肾脏细菌培养阳性。均厌氧培养后，A组3-10日组织均有细菌长出，主要为G-小杆菌，死后7-10日出现G+大杆菌，B组3-5日组织有细菌长出，6-10日见G-小杆菌，C组组织见金黄色葡萄糖球菌，3-5日出现杆菌。

三、讨论

从本次研究结果来看，不同死因大鼠在不同时间段得到的不同后肢深部组织微生物ATP含量存在显著差异，不同死因大鼠在不同时间段得到的不同组织细菌培养阳性出现时间、优势菌结果存在一定差异，反映死因、死亡时间对微生物的繁殖存在显著影响，不仅影响微生物含量还影响微生物含量。但需注意的是，受死亡环境、尸体所在环境、尸体大小等因素影响，不同类型尸体腐败速度、细菌类型定然存在差异，该法是否可作为野外死亡人的死因鉴定尚存在异议，但在发现较早、医院死亡及时冷冻的尸体死因鉴定中有一定价值。

[参考文献]

[1]赵子琴.法医病理学[M].北京：人民卫生出版社，2009.

中图分类号：D919.4

文献标识码：A

文章编号：2095-4379-(2016)16-0150-01

作者简介：黄鸿江(1978-)，男，壮族，广西武宣人，本科，武宣县公安局，法医师(初级)，研究方向：法医学。