红千层组织培养快繁技术研究

朱尾银

摘 要：该研究以优选红千层新萌发的嫩芽茎段为外植体进行组培快繁。结果表明：红千层的启动培养基以MS+6-BA1.0mg/L + NAA0.2～0.3mg/L最为合适；增殖培养基以改良MS+6-BA0.6mg/L +KT0.2mg/L +NAA0.2mg/L较好；生根培养基以改良1/3MS+NAA0.2mg/L+IBA0.25mg/L+Ac0.15g/L为最佳，生根率可达95%以上。

关键词：红千层；离体培养；茎段

中图分类号 S79 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）10-0094-03

Tissue Culture and Rapid Propagation of Callistemon rigidus

Zhu Weiyin

（The Experiment Center of Forestry Science and Technique of Fujian Province，Nanjing 363600，China）

Abstract：Using the stem-segment with single bud as the explant，we studied the rapid propagation of Callistemon rigidus. The results indicated that the suitable culture medium at different culture stages was：initial medium MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2～0.3mg/L，the subculture medium should be MS+6-BA0.6mg/L +KT0.2mg/L +NAA0.2mg/L and the best rooting medium was 1/3 MS+NAA0.2mg/L +IBA0.25mg/L +Ac0.15g/L，the rooting rate was above 95%

Key words：Callistemon rigidus；In vitro culuture；Stem section

红千层Callistemon rigidus R.Br，属桃金娘科红千层属常绿树种，小乔木，原产澳大利亚，树皮坚硬，灰褐色；嫩枝有棱，叶片坚革质，线形，先端尖锐，叶柄极短；穗状花序生于枝顶，萼管略被毛，萼齿半圆形，近膜质；花瓣绿色，卵形，长6mm，宽4.5mm，有油腺点；雄蕊长2.5cm，鲜红色，花药暗紫色，椭圆形；花柱比雄蕊稍长，先端绿色，其余红色；属阳性树种，喜温暖、湿润气候，能耐烈日酷暑和严寒，抗性好，病虫害少，耐贫瘠，具生长快、萌芽力强、耐修剪等优点。红千层是一种优良的园林及盆栽观赏植物，其树冠茂密，树形美丽，花密集聚生，雄蕊伸出，红艳夺目，十分美丽奇特，适宜作为庭院美化观花树、行道树、园林树、风景树等，还可修剪成高贵盆景，极具观赏价值，近几年来其园林观赏价值受到人们的重视，在园林工程中得到了广泛应用。为了大量繁殖苗木，尽快满足社会对红千层优质苗木的旺盛需求，国内对红千层的组织培养已进行了不少的探索，并取得了一定的成效[1-2]。本研究开展了不同基础培养基与激素类型组合的对比试验，通过诱导系数、增殖系数、生根率的比较，进行诱导培养基、增殖培养基、生根培养基的筛选，以实现红千层组培快繁技术优化，提高组培效果。

1 材料与方法

1.1 试验材料 以红千层春季萌发的嫩芽为外植体，消毒后接种于诱导培养基，参加诱导培养基对比试验；以诱导培养基上生长健壮的芽为增殖培养基对比试验接种材料；以增殖培养基上增殖生长健壮的芽，为生根培养基对比试验接种材料。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体消毒 先用洗衣粉清洗表层，然后用自来水冲洗干净再进行消毒，用75%酒精消毒30～60s，无菌水漂洗2次，1%次氯酸钠处理10～15min，无菌水漂洗5次以上。

1.2.2 培养条件 接种后材料放在（27±2）℃培养室中的培养，每天光照时间10～12h，光照强度为1 500～2 000lx。

1.2.3 试验设计 诱导培养对比试验、增殖培养对比试验包含6个处理（见表1、表2），生根培养对比试验包含3个处理（见表3）。各种培养基中，糖30g/L（生根培养基糖25g/L），卡拉胶5.4g/L，pH值5.8～5.9。各试验均设置3次重复。

1.3 数据采集与数据分析 诱导培养基对比试验：接种后每隔5d观察1次出芽情况，并在25d时调查诱导芽数，计算诱导系数；增殖培养基对比试验：接种后每隔5d观察1次芽的生长情况，并在30d时调查增殖芽数，计算增殖系数；生根培养基对比试验：接种后每隔5d观察1次生根情况，并在15d时调查生根率。对试验诱导系数、增殖系数、生根率等数据进行单因素方差分析和多重比较，多重比较采用新复极差法。

2 结果与分析

2.1 不同诱导培养基对诱导效果的影响 从表1可以看出，诱导系数变化幅度为1.38～2.87，不同诱导培养基的诱导效果差异很大。方差分析结果表明，F=8.34>F0.01（5，17）=2.81，不同诱导培养基的诱导系数间存在极显著差异。多重比较结果表明，A3、A4间无显著差异，诱导系数最高，与A1、A2、A5、A6间差异均达到显著或极显著水平，A1、A2间无显著差异，A5、A6间也无显著差异。由此可见，本试验设计中，NAA浓度不同，对诱导系数的影响不明显，差异主要由基础培养基引起。MS培养基对红千层诱导的培养，诱导出的芽大部分是单芽，且萌芽的时间较长；改良MS培养基中不但诱导出的芽为丛生芽且萌芽时间短，在3/4MS培养基中诱导出的芽部分出现丛生芽，但大部分是单芽，萌芽时间相对于改良MS偏长。诱导出丛生芽，是提高诱导系数的关键，因此，诱导培养基适宜采用改良MS+6BA1.0mg/L+NAA0.2～0.3mg/L。

2.2 不同增殖培养基对增殖效果的影响 从表2可知，不同增殖培养基的增殖系数差异较大，变化幅度为1.95～3.73。方差分析结果表明，F=10.13>F0.01（5，17）=2.81，不同增殖培养基的增殖系数间存在极显著差异。多重比较结果（表2）表明，B4增殖效果最好，增殖系数达到3.73，与其他增殖培养基间均存在显著或极显著差异；B3次之，与其它增殖培养基间也均存在显著或极显著差异。B1、B2间无显著差异，B5、B6间无显著差异，B1、B2与B5、B6间存在显著或极显著差异，说明增殖系数的大小，受基础培养基的影响较大。在改良MS培养基中继代周转周期为26d，芽生长比较壮，在MS和3/4MS培养基中周转周期偏长一点，需要30d，芽生长偏细。B3、B4间差异显著，说明在改良MS中，KT激素的添加对提高增殖系数有益。本试验中，改良MS+6BA0.6mg/L+KT0.2mg/L+NAA0.2mg/L是最佳增殖培养基。

2.3 不同生根培养基对生根效果的影响 把生长一致的红千层小苗接种到生根培养基上培养，发现3种培养基均能诱导出根，生根率变化范围为63.6%～95.8%，生根效果存在较大差异。方差分析结果表明，F=23.58>F0.01（2，8）=8.65，不同生根培养基的生根率间差异达统计学上的极显著水平。多重比较结果（表3）表明，C1、C2、C3间均存在显著或极显著差异。C2生根率达95.8%，出根时间短只需10d，且根系粗壮，平均4根以上；而另外2种培养基虽能生根，但时间较长，生根率低，平均根数少，不利于移栽。因此，生根培养基以C2为最佳。

3 结论与讨论

3.1 结论 试验结果表明，6种诱导培养基中，A3、A4的诱导效果最好；6种增殖培养基中，以B4为最佳，增殖系数达到3.73，与其它增殖培养基间均存在显著或极显著差异；3种生根培养基中，以C2的生根率最高，达到95.8%，与C1、C3的生根率间差异显著或极显著。因此，本试验中，红千层组培的最佳诱导培养基为改良MS+6BA1.0mg/L+NAA0.2～0.3mg/L，最佳增殖培养基为改良MS+6BA0.6mg/L+KT0.2mg/L+NAA0.2mg/L，最佳生根培养基为改良1/3MS+NAA0.2mg/L+IBA0.25mg/L+Ac0.15g/L。

3.2 讨论 红千层组织培养是解决红千层种苗来源的一个重要途径，是实现红千层种苗产业化生产的基础。虽然目前已有少量有关红千层组织培养获得成功的文献报道，但不同学者间的观点还存在一定的分歧[2-3]。例如，红洪如（2005）报道了红千层的离体培养及组培快繁技术，认为继代和增殖培养基以MS+6BA1mg/L+NAA0.25mg/L为最佳。本试验中发现，基础培养基是影响增殖效果的最主要因素，改良MS的增殖效果显著高于MS，而所添加的激素组合的作用，在参试的几个组合中，表现不明显，这有待于进一步验证。在生根试验中，相同的激素添加下，不同的基础培养基间的生根率差异达到极显著差异水平，改良1/3MS分别是1/2MS、1/3MS的1.34倍和1.51倍，说明基础培养基对红千层的生根影响极大，这方面也有待于进一步研究。

参考文献

[1]郑耀恩.浅谈红千层的栽培与大苗移植[J].中国园林，1993，9（3）：35，60.

[2]江洪如，余发新，刘腾云.红千层的离体培养及快速繁殖[J].园艺学报，2005，32（3）：541-543.

[3]龚伟，宫渊波，胡庭兴，等.红千层离体培养和植株再生[J].植物生理学通讯，2004，1（40）：66.

（责编：张宏民）