高效液相色谱法同时测定利胆宽肠颗粒中栀子苷和芍药苷含量

赵　剑，李　静，蒲清荣，黄　锐，任桂林，罗　群

（泸州医学院附属中医医院，四川泸州　646000）



高效液相色谱法同时测定利胆宽肠颗粒中栀子苷和芍药苷含量

赵剑，李静，蒲清荣，黄锐，任桂林，罗群

（泸州医学院附属中医医院，四川泸州646000）

摘要：目的建立同时测定利胆宽肠颗粒中栀子苷和芍药苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为Inertsil ODS-SP C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液（15∶85），等度洗脱，流速1 mL/min，检测波长230 nm，柱温40℃。结果芍药苷和栀子苷进样量分别在0.494～3.950 μg和0.684～5.470 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 7），平均加样回收率分别为97.67%和98.83%，RSD分别为0.73%和1.16%（n=6）。结论该法准确可靠、专属性强、重复性好，可作为测定利胆宽肠颗粒中栀子苷和芍药苷含量的可靠方法。

关键词：利胆宽肠颗粒；高效液相色谱法；芍药苷；栀子苷中图分类号：R284.1；R286.0

文献标识码：A

文章编号：1006-4931（2016）05-0054-03

利胆宽肠颗粒是泸州医学院附属中医医院院内制剂，主要由白芍、栀子、黄芩、厚朴、大黄、青皮等多味中药组方，具有清热利胆、宽肠理气的功效，用于清除肠道积滞以及胆道手术前准备，经临床应用多年，疗效显著。为了更好地控制其质量，根据处方中药材所含化学成分及其理化性质，结合中医药理论，按照《医疗机构制剂注册管理办法》的要求，采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定方中主药白芍中芍药苷和栀子中栀子苷的含量［1-2］，为建立完善的质量标准提供参考依据。

1　仪器与试药

SPD-20A型高效液相色谱仪（美国科学系统公司）；JPGT0328型超声提取器（武汉嘉鹏电子有限公司）；NRB17S3W型电冰箱（日本松下公司），ZK072型电热真空干燥箱（上海实验仪器厂）；JA203H型电子天平（常州幸运电子设备有限公司）。

芍药苷对照品（批号为110736-201337），栀子苷对照品（批号为110749-201115），均购于中国食品药品检定研究院；白芍、栀子、黄芩、厚朴、大黄、青皮等购于泸州市宝光中药饮片公司，经泸州市药检所中药室袁常珍主任鉴定，均符合2010年版《中国药典（一部）》项下规定；利胆宽肠颗粒（泸州医学院附属中医医院，批号为20140617，20140618，20140619）；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为娃哈哈纯净水。

2　含量测定

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Inertsil ODS-SP C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸水（15∶85），等度洗脱；流速：1 mL/min；检测波长：230 nm；柱温：40℃。理论板数按芍药苷峰计算应不低于4 000［3-5］。在此色谱条件下，色谱图见图1。

2.2溶液制备

称取芍药苷、栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL含芍药苷0.208 mg、栀子苷0.274 mg的混合对照品溶液。取本品2 g，精密称定，加稀乙醇25 mL，超声处理30 min，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得供试品溶液。按处方量并以相同的工艺制备不含白芍和栀子的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法处理，得阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

线性关系考察：分别精密吸取上述对照品溶液2.5，5，10，15，20 μL，注入高效液相色谱仪，按拟订色谱条件测定，将峰面积（A）与进样量（C）进行线性回归，得芍药苷和栀子苷的回归方程为A=1×106C-48 034，r=0.999 7（n=5）；A=1×106C-110 560，r=0.999 7 （n=5）。结果表明，芍药苷和栀子苷对照品进样量在0.494～3.950 μg和0.684～5.470 μg范围内与峰面积线性关系良好。

图1　高效液相色谱图

专属性试验：精密吸取对照品、供试品及阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪进行测定。结果阴性对照品溶液色谱中，在与对照品及供试品溶液色谱对应保留时间处无相应色谱峰，表明其他组分对测定芍药苷、栀子苷无干扰，色谱图见图1。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，连续重复进样5次，每次进样10 μL，测定峰面积。结果芍药苷和栀子苷峰面积的RSD分别为1.20%和1.13%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，于0，2，4，6，8，12 h时分别进样10 μL，测定峰面积。结果芍药苷和栀子苷峰面积的RSD分别为1.06%和1.15%（n=6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品6份，按供试品溶液制备方法制备溶液，以拟订色谱条件测定每份样品中芍药苷和栀子苷的含量。结果芍药苷的平均质量分数为2.425 mg/g，RSD为1.02%（n=6），栀子苷的平均质量分数为4.365 mg/g，RSD为1.16%（n=6），表明该方法重复性良好。

加样回收试验［6］：精密称取已测定含量（芍药苷为2.427 mg/g，栀子苷为4.363 mg/g）的利胆宽肠颗粒6份，每份约0.5 g，分别精密加入一定质量浓度的混合对照溶液，按供试品溶液制备方法制备溶液，按拟订色谱条件分别进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1　芍药苷和栀子苷加样回收试验结果（n=6）

2.4样品含量测定

取利胆宽肠颗粒3批（批号为20130217，20130218，20130219），精密称定，依法制成供试品溶液，利用外标两点法测定，计算芍药苷和栀子苷含量。结果见表2。

表2　3批样品中芍药苷和栀子苷含量测定结果

3　讨论

关于流动相的选择，文献［7-8］采用梯度洗脱方式获得了理想的分离度。本试验中先后用不同比例的乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相，结果表明，以乙腈-0.1%磷酸（15∶85）等度洗脱芍药苷峰已达到基线分离，理论板数按芍药苷峰计算不少于4 000，峰形对称，既节省时间，又得到好的分离效果，故选其为本试验流动相。

本试验中所建立的方法灵敏度高、重复性好、专属性强，可用于控制利胆宽肠颗内在质量。

参考文献：

［1］徐强.HPLC法同时测定茵栀黄分散片、颗粒、胶囊中绿原酸、栀子苷与黄芩苷［J］.中成药，2013，35（5）：967.

［2］李娟，赵迪，周悌强，等.HPLC法同时测定补肺益肾颗粒中淫羊藿苷、橙皮苷、芍药苷［J］.中成药，2012，34（12）：2 335.

［3］吴静，陆红.舒胆通颗粒的质量标准研究［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19（7）：89.

［4］程巧鸳，陈碧莲.明目地黄丸（浓缩丸）质量标准研究［J］.中成药，2012，34（6）：1 090.

［5］李中娥.HPLC法同时测定妇科分清丸中阿魏酸和芍药苷［J］.中成药，2012，34（3）：487.

［6］王迅，周琴妹，吴旭彤，等.止泻合剂的质量标准研究［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19（2）：126.

［7］冯发青，王恩源，伍庆，等.HPLC法同时测定麦味地黄胶囊中马钱苷、芍药苷和丹皮酚［J］.中成药，2012，34（12）：2 239.

［8］陈绍成，石燕红，杨娜，等.重庆后山栀子和国内其他产区栀子主要药效成分含量对比［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（22）：131.

Simultaneous Content Determination of Paeoniflorin and Geniposide in Lidan Kuanchang Granules by HPLC

Zhao Jian，Li Jing，Pu Qingrong，Huang Rui，Ren Guilin，Luo Qun
（Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital of Luzhou Medical College，Luzhou，Sichuan，China 646000）

Abstract：Objective To establish a method for determination of paeoniflorin and geniposide in Lidan Kuanchang Granules.Methods The column was Inertsil ODS-SP C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）；mobile phase of acetonitrile and 0.1%aqueous phosphoric acid（15∶85），isocratic flow rate of 1 mL/min；detection wavelength was 230 nm，column temperature was 40℃.Results The linear range of peoniflorin was 0.494-3.950 μg（r=0.999 8），with the average recovery of 97.67%，RSD=0.73%（n=6）；The linear range of geniposide was 0.684-5.470 μg（r=0.999 8），with the average recovery of 98.83%，RSD=1.16%（n=6）.Consclusion The method is accurate，reliable，specific and reproducible，and can be used for the quality control of Lidan Kuanchang Granules.

Key words：Lidan Kuanchang Granules；HPLC；peoniflorin；geniposide

作者简介：赵剑（1975-），男，汉族，副主任中药师，主要从事中药制剂及质量标准研究，（电话）0830-3162253（电子信箱）562701410@qq.com。

收稿日期：（2015-07-28）