(信阳市动物疫病预防控制中心,河南 信阳 464000)
中药治疗猪弓形虫病效果研究
马超锋*
(信阳市动物疫病预防控制中心,河南 信阳 464000)
弓形虫病(toxoplasmosis)又称弓形体病,是由刚地弓形虫(toxoplasma gondii)在人和动物体内寄生而引起的人兽共患原虫病。猪弓形虫病会导致母猪流产、弱胎、死胎,患病仔猪高热、呼吸困难、消瘦及便秘等;而弓形虫与其他疾病混合感染暴发性流行时会造成育肥猪大量死亡,还会引起不同程度的繁殖障碍性疾病,给养猪业造成巨大经济损失。
弓形虫属于细胞内寄生的血液原虫,畜禽一旦感染,虽然可通过药物治疗消除症状,但是畜禽机体将会一直带虫,在应激或亚健康状况下都会发病。弓形虫病的根本防治手段是研制行之有效、使用方便的疫苗,现阶段还没有较完善的商品化弓形虫疫苗可供使用,主要采取常规措施预防弓形虫病的发生。目前,防治畜禽弓形虫病主要采用磺胺类药物,具有使用方便、吸收迅速、见效快等优点。但是也存在问题,一是其对猪体自身危害方面,长期使用磺胺类药物可能增加毒副作用和耐药性,量大还易形成结晶造成肾脏的急性损伤;二是公共卫生方面,养殖户使用磺胺类未按要求执行休药期,以使药物残留畜禽体内危害人类健康。而利用中草药进行防治研究较多的如黄芪、青蒿类等,通过干扰虫体核酸代谢、破坏虫体膜系统和超微结构、诱导虫体细胞凋亡、影响Ca2+跨膜转运及免疫调节等而发挥作用,但现阶段国内还没有效果良好的防治畜禽弓形虫病的中草药配方。本研究将采用不同中药配方对猪弓形虫病发病猪进行治疗试验,以筛选出效果较好中药防治猪弓形虫病。
1.1 材料
1.1.1 试验猪
信阳市某猪场同一栋舍88头60日龄三元杂交猪,外观健康,猪弓形虫病抗体检测结果阴性。
1.1.2 检测试剂盒及主要仪器设备
1.1.2.1 检测试剂 猪弓形虫IgG抗体检测试剂盒,购自洛阳莱普生信息有限公司;猪弓形虫PCR检测试剂盒,信阳师范学院生命科学学院提供;弓形虫阳性分离株,信阳市动物疫病预防控制中心分离保存。
1.1.2.2 主要仪器 TDZ-WS台式低速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司),10~100μL多道移液器(德国Eppendorf公司),DHP-500避光培养箱(常州市凯航仪器有限公司),Thermo洗板机888型(美国Thermo公司),Thermo全自动定量绘图酶标仪MFC型(美国Thermo公司),PCR仪(德国Biometra)、凝胶成像系统(以色列 DNR MiniBIS Pro)。
1.2 方法
1.2.1 中药治疗方案
对猪群采用3个中药配方防治弓形虫感染:A方,黄花蒿、柴胡;B方,常山、槟榔、柴胡、麻黄、 甘草、桔梗;C方,大黄、丹皮、栀子、连翘、蒲公英、天花粉、金银花、甘草;各个配方均拌料饲喂5 d。
1.2.2 中药防治猪弓形虫病试验方案
1.2.2.1 试验猪分组 将试验猪随机分成11组,每组8头。分组情况及试验方案见表1,试验期间,猪舍温度保持在20~28 ℃。
1.2.2.2 试验猪观察 对猪群连续观察30 d,每天上午8点、下午4点各测量记录体温1次,取8头猪体温平均值为当天各组体温,上午体温在40 ℃以上,下午体温在40.5 ℃以上,视为体温升高;观察体温升高的天数,出现典型弓形虫临床症状的猪只数量和维持时间,临床症状、死亡头数、时间;剖检死亡猪只,采样并观察病理变化;比较增重情况(试验开始前和结束时称重)。
1.2.2.3 试验猪弓形虫病抗体检测和病原学检测 试验开始前(0 d)和开始后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d对各组存活猪进行抗体检测,试验猪只死亡时,采集病料进行病原学检测。
1.2.3 中药治疗猪弓形虫病临床应用试验
采用筛选出的疗效较好的中药配方对猪从保育转育肥时,较易发生猪弓形虫病的猪场在转入育肥舍前后连续使用5 d,评价其应用效果。
表1 试验分组及方案
表2 试验猪只各项指标
2.1 各组猪只体温变化情况
第2、6、7、8组均在攻虫后3~4 d出现体温升高症状,第1、3、4、5组在攻虫后6 d体温开始升高,第9、10、11组在11 d出现体温升高症状;阳性对照组发烧维持时间最长,为16 d,第9、10、11组发烧时间最短,具体情况见表2。
2.2 各组猪只弓形虫病典型症状出现及维持时间
各试验组猪只均出现明显临床症状(发烧、呼吸困难、便秘等)时间,阳性对照组持续时间最长,为8 d,8头均出现症状;第9、10、11组出现典型症状时间最短,为2~3 d,发病率为25%~37.5%;具体情况见表2。
2.3 各组猪只死亡率
阳性对照死亡率最高,为62.5%;其次为空白对照组的37.5%;第3、4、5、9、10、11组无猪只死亡。
2.4 各组猪只弓形虫病抗体和病原学检测结果
在试验第0、7、14、21、28、35 d对各组猪只分别采取血样,应用ELISA方法检测抗体;血清中抗体阳性维持天数见表2,第1、第2组由于未采用中药治疗,抗体持续35 d以上,第3、6、7、8组试验猪血清中抗体均持续21 d以上,第4、5、9、10、11组抗体持续14 d,先用药再攻虫组血清中抗体持续天数显著少于其他组,第10、11组血清中抗体持续天数少于其他组;这说明在猪群发病之前采用B、C方对猪群保健,对弓形虫有较好的防控效果。对病死猪只采取组织样品,用PCR方法检测,结果显示均为弓形虫阳性。
2.5 中药临床应用效果评价
对在转群时较易感染猪弓形虫病猪场应用B、C配方中药制剂拌料饲喂,猪弓形虫病的发病率和病死率分别由50%和40%下降到10%和20%以下,可有效防控猪弓形虫的发生,为养殖户挽回经济损失数百万元。
猪弓形虫病的临床症状与猪瘟、猪蓝耳病、猪链球菌病某些症状相似,并且混合感染,给诊断带来困难,影响猪场防治方案的制定,本项目组建立了敏感、快速、特异的弓形虫病PCR检测方法,可以准确的诊断该病。本试验中,研制的3个中药配方对猪弓形虫病都有较好的防治效果,能减少化学药物使用造成的残留和副作用,在猪群发病之前应用中药全群保健预防,可以显著降低猪群的发病率、死亡率和病程;B方和C方在减少猪群症状和缩短病程方面又优于A方,C方效果最优。本试验研制的中药配方经临床试验表明早期预防效果优于发病后治疗效果,可显著减轻发病症状,对临床上危害养猪业的猪弓形虫病的防治具有重要意义,可以大范围推广应用。
2016-06-27)
2014年信阳市科技攻关项目(140054)-信阳地区猪弓形虫病感染情况调查及综合防控技术研究与应用
马超锋(1981-),男,汉,河南禹州人,高级兽医师,硕士,主要从事动物疫病防治,E-mail:machaofeng5@163.com。