GnRH-A抗原主动免疫母羊对血清LH激素浓度的作用

郭春艳

（招远市毕郭畜牧兽医站，山东烟台 264000）



GnRH-A抗原主动免疫母羊对血清LH激素浓度的作用

郭春艳

（招远市毕郭畜牧兽医站，山东烟台 264000）

［摘 要］目的：探讨促性腺激素释放激素的类物-A（GnRH-A）对动物生殖激素LH调节的效果和作用机理。方法：以EDC.HCL为耦合剂，将GnRH-A与BSA连接为复合物，再加入弗氏不完全佐剂制成抗原乳剂；30只小尾寒羊与山东省招远市本地羊杂交的F1代随机分成6组，每组注射不同剂量的抗原，用ELISA法测定血清LH激素含量。

［关键词］促性腺激素释放类似物-A（GnRH-A） 抗原制备 LH 绵羊

1　实验材料和方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物

5～6月龄母绵羊30只，体重24.21±2.51kg，随机均分为6组（n=5），分别标记为EG-Ⅰ、EG-Ⅱ、EG-Ⅲ、EG-Ⅳ、EG-Ⅴ和CG（对照组）。预饲15d。

1.1.2试剂和药物

（1）促性腺激素的释放类似物GnRH-A

（2）1-乙基-（3-二甲基氨基丙酸）碳二亚胺盐酸盐（3）牛血清白蛋白

（4）弗氏不完全佐剂

（5）培养基：硫乙醇酸培养基、酪胨琼脂培养基、葡萄糖白胨汤培养基

1.2实验方法

1.2.1GnGH-A抗原的制备

以碳二亚胺盐酸盐为耦合剂，将促性腺激素释放激素类似物与牛血清白蛋白连接为复合物，再加入弗氏不完全佐剂制成抗原乳剂。

对照液的制备除不使用促性腺激素释放激素类似物外，其余方法与上述相同。

1.2.2抗原注射见表1

表1　各组实验绵羊抗原注射剂量和时间

1.2.3血样采集

分别在0d、7d、14d、21d、28d、35d、45d、60d和70d颈静脉采血。采血前动物禁食12h，采集的血样立即以2005～3000r/min离心10～15min，分离血清，-20℃保存。

1.2.4检测项目

（1）GnRH抗体效价测定用ELASA法测定。

（2）血清LH浓度测定 用绵羊LH酶联免疫分析法（ELASA法）测定。

（3）用回归方程计算浓度。

（4）数据统计学分析使用Spss18.0统计软件包处理数据，用平均值±标准差（±SD）表示，以 Tukey LSD 进行多重比较。P〈0.05表示差异显著。

2　实验结果

2.1测定值分析 见表1

从表1得出，EG-I、EG-II 、EG-III 、EG-IV、 EG-V，以及对照组在注射抗原起35d处理组之间无差异性，45d时EG-IV与EG-V 血清LH浓度差异显著，EG-IV组LH水平高于EG-V；70d时血清LH浓度抗原组与对照组差异显著，并且在70d抗原组LH浓度显著高于对照组，犹以EG-3最为明显。

2.2血清LH测定值

通过试验可看出各组LH浓度在注射抗原起到35d之间始终保持在一个稳定的波动范围内，从35d起都开始上升，EG-III急剧上升，抗原组变动平稳，但总体水平显著高于对照组。在70dEGIIIEG-IVEG-V对照组都有所下降，但对照组下降更快，抗原各组总体水平显著高于对照组，并且以黄线（EG-III）最显著。

3　结论

自抗原注射起至45d，GnRH-A对绵羊机体无影响，实验的第 45d时GnRH-A加强免疫可以增强绵羊分泌LH激素；第70d时GnRH-A主动免疫绵羊对血清LH激素的作用是增强的。±s（ng/L）

表1　母羊血清LH测定值