HPLC法测定坐珠达西中西红花苷的含量

马宏伟 孙绪丁 田汝芳

【摘要】目的：建立测定坐珠达西中西红花含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Waters C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸铵（40∶5∶55），检测波长为440nm；流速为1ml/min；柱温为30℃。结果：西红花苷Ⅰ的质量浓度在6.208μg/ml～62.08μg/ml范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系（r=0.9997）；精密度、稳定性、重复性的RSD<2%；平均加样回收率为98.31%，RSD=0.86%（n=6）；西红花苷Ⅱ的质量浓度在3.072～30.72μg/ml范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系（r=0.9999）；精密度、稳定性、重复性的RSD<2%；平均加样回收率为97.69%，RSD=0.99%（n=6）。结论：该方法操作简单，结果准确，可用于坐珠达西中西红花苷的含量测定。

【关键词】坐珠达西；西红花苷Ⅰ；西红花苷Ⅱ；高效液相色谱法

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517（2016）07-0015-02

Abstract：Objective To develop a method for the content determination of croci stigma in zuozhudaxi.Methods HPLC method was adopted.The determination was performed on Waters C18 column （250mm×4.6mm， 5μm） with mobile phase consisted of methanol-acetonitrile-0.05mol/L ammonium acetate （40∶5∶55） at the flow rate of 1ml/min. The detection wavelength was set at 440 nm， and column temperature was 30 ℃.Results The linear range of crocin Ⅰ were 6.208～62.08μg/ml（r=0.9997） with an average recovery of 98.31% （RSD=0.86%，n=6）；RSDs of precision， stability and reproducibility tests weve all lower than 2%. The linear range of crocin Ⅱ were 3.072～30.72μg/ml（r=0.9999） with an average recovery of 97.69% （RSD=0.99%，n=6）；RSDs of precision，stability and reproducibility tests weve all lower than 2%.Conclusion The method is simple，accurate，and can be used for the content determination of croci stigma in zuozhudaxi.

Keywords：zuozhudaxi；crocin Ⅰ；crocin Ⅱ；HPLC

坐珠達西由寒水石、丁香、西红花、肉豆蔻等35味药材组成[1]，是藏医治疗慢性胃炎的常用药物[2]。坐珠达西中的西红花又称藏红花，为鸢尾科植物番红花Crocus sativus L.的干燥柱头[3]，为贵重药材，其主要有效成分为西红花酸和西红花苷，药典以西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ的含量来控制西红花的质量。现有测定西红花中西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ的方法较多，但均不适用于成分复杂的藏药制剂坐珠达西[4-9]。为此，建立坐珠达西中西红花苷的含量测定方法，为该产品的质量标准提高提供参考依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪（日立L-7110泵，日立L-7420紫外检测器）；KQ-300B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AUW220D型电子天平（日本）。

1.2 材料 西红花苷Ⅰ（批号：111588-201303）、西红花苷Ⅱ（批号：111589-201304）购自中国食品药品检验研究院；坐珠达西（批号：20140501、20140502、20140503金诃藏药股份有限公司）；甲醇、乙腈均为色谱纯（美国fisher公司），水为纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Waters C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-乙腈-0.05mol/L醋酸铵（40∶5∶55）；检测波长：440nm；流速：1ml/min；柱温：30℃。理论板数按红花苷Ⅰ峰计算应不低于3500。见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取西红花苷Ⅰ对照品约15mg，精密称定为15.52mg，置10ml量瓶中，加60%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得1.552mg/ml的西红花苷Ⅰ对照品溶液；取西红花苷Ⅱ对照品约7.5mg，精密称定为7.68mg，置10ml量瓶中，加60%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得0.768mg/ml的西红花苷Ⅱ对照品溶液；精密量取上述西红花苷Ⅰ对照品溶液和西红花苷Ⅱ对照品溶液各1ml，置同一50ml量瓶中，加60%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得含西红花苷Ⅰ为31.04μg/ml，含的西红花苷Ⅱ为15.36μg/ml的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取坐珠达西样品，研细，过3号筛，取粉末1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25ml，称定重量，冰浴中超声处理20min，放至室温，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 线性关系考察 精密量取“2.2.1”项下西红花苷Ⅰ对照品溶液和西红花苷Ⅱ对照品溶液各2ml，置于50ml量瓶中，加60%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得含西红花苷Ⅰ为62.08μg/ml，含西红花苷Ⅱ为30.72μg/ml的混合对照品溶液，分别精密量取上述混合对照品溶液1、3、5、8，10ml，置10ml量瓶中，用60%甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进样测定，进样量10μl，记录色谱峰峰面积。以西红花苷Ⅰ峰面积（A）对对照品浓度（C）进行线性回归，得回归方程为A=22532.96C-1266.18（r=0.9997）；以西红花苷Ⅱ峰面積（A）对对照品浓度（C）进行线性回归，得回归方程为A=27149.44C+1868.11（r=0.9999）。结果表明，西红花苷Ⅰ在6.208～62.08μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，西红花苷Ⅱ在3.072～30.72μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验 取“2.2.1”项下混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，进样量10μl，记录峰面积。结果，西红花苷Ⅰ峰面积的RSD为0.15%（n=6），结果，西红花苷Ⅱ峰面积的RSD为0.90%（n=6），表明仪器的精密度良好。

2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于放置0、2、4、6、8h进样测定，进样量10μl，记录峰面积。结果，西红花苷Ⅰ峰面积的RSD为0.14%（n=6），结果，西红花苷Ⅱ峰面积的RSD为0.19%（n=6），表明供试品溶液在12h内基本稳定。

2.6 重复性试验 取同一样品，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积。结果，西红花苷Ⅰ峰面积的RSD为0.46%（n=6），西红花苷Ⅱ峰面积的RSD为1.00%（n=6），表明该方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验 取已知含量的样品0.5g，共6份，分别加入一定体积的对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，计算样品含量，并计算加样回收率，结果见表1和表2。

2.8 样品含量测定 取三个批号的样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算样品含量，结果见表3。

3 讨论

坐珠达西收载于卫生部藏药部颁标准中，原标准没有含量测定项。藏药部颁标准并未公布坐珠达西的全部处方，在已知原药材中，西红花是贵重药材，应当建立含量测定方法。但由于该产品由35味药材组成，成分复杂，现有关于西红花中西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量测定方法并不适用，或保留时间长，或分离度差。经过反复试验，建立了本文所述方法，可以同时测定西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ，保留时间适中，分离度好，操作简单，可用于坐珠达西中西红花的含量测定。

参考文献

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（收稿日期：2016.01.29）