贵州和长沙吴茱萸水煎液对未孕大鼠离体子宫平滑肌活动的影响比较*

陈天琪，杨卫平，王　嫣，彭　芳，蔡恒懋，赵云华

(1贵阳中医学院　生理学教研室，贵州　贵阳　550002；2贵阳中医学院　药学系，贵州　贵阳　550002；3贵阳中医学院　功能实验室，贵州　贵阳　550002)



贵州和长沙吴茱萸水煎液对未孕大鼠离体子宫平滑肌活动的影响比较*

陈天琪1，杨卫平2▲，王嫣1，彭芳1，蔡恒懋2，赵云华3

(1贵阳中医学院生理学教研室，贵州贵阳550002；2贵阳中医学院药学系，贵州贵阳550002；3贵阳中医学院功能实验室，贵州贵阳550002)

摘要：运用BL-420S生物信号机能实验系统，记录大鼠离体子宫平滑肌活动的收缩曲线，观察贵州、长沙两产地吴茱萸水煎液对其收缩张力、频率及活动力有无差异，比较贵州和长沙两产地吴茱萸水煎液对未孕大鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响。结果表明：贵州吴茱萸水煎液能够减弱缩宫素引起的大鼠离体子宫平滑肌张力、频率及活动力(p<0.01)，而长沙吴茱萸水煎液也能够减弱缩宫素引起的大鼠离体子宫平滑肌张力及活动力(p<0.05)，但贵州吴茱萸对缩宫素引起的大鼠离体子宫平滑肌活动的抑制率高于长沙吴茱萸。亦说明贵州、长沙两产地吴茱萸均能减弱缩宫素引起的未孕大鼠离体子宫平滑肌收缩活动，但贵州吴茱萸优于长沙吴茱萸。

关键词：吴茱萸；子宫平滑肌；离体；痛经

吴茱萸始载于《神农本草经》，是芸香科落叶或小乔木植物吴茱萸、石虎或疏毛吴茱萸的干燥近成熟果实，主产于贵州、湖南、广西等地，贵州吴茱萸的总产量达到全国30 %以上[1]。吴茱萸味辛、苦，性热，有小毒，属于温里药，主要用于厥阴头痛、寒疝腹痛、脘腹胀痛、经行腹痛、呕吐吞酸、五更泄泻、高血压等症[2]。《伤寒论》中的吴茱萸汤、《金匮要略》中的温经汤等方，均以吴茱萸为主药，用于治疗中医妇科痛经，在临床上有较好的疗效[3]。

有实验研究表明，吴茱萸汤体外给药能显著减弱大鼠子宫平滑肌的收缩作用、收缩频率和收缩幅度[4]。然而，吴茱萸作为单味药，对子宫收缩活动影响及作用机制的研究较少。本课题通过前期动物实验，已证实贵州吴茱萸水煎液能够减弱缩宫素引起的大鼠离体子宫平滑肌收缩活动[5]。为明确不同产地吴茱萸水煎液是否都具有相同效应，本实验在前期实验的基础上，依然采用缩宫素制备未孕大鼠离痛经模型，以离体子宫收缩张力、收缩频率及活动力(子宫收缩频率×子宫收缩强度)[6]为观察指标，观察贵州吴茱萸水煎液对大鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响并与长沙吴茱萸作比较，从而为临床治疗痛经选用不同产地吴茱萸提供参考依据。

1材料

1.1动物

清洁级SD大鼠，雌性、未孕，体重200～250 g，购自第三军医大学医学院实验动物中心，动物合格证号：SCXK(渝)2007-0005。实验期间在同一室内笼养，不限水食，饲料购自第三军医大学医学院实验动物中心。

1.2药物与试剂

实验用吴茱萸分别来自于贵州余庆吴茱萸GAP基地产的贵州吴茱萸和长沙中药材市场购买的长沙吴茱萸。两产地吴茱萸经贵阳中医学院药学院王世清教授鉴定，符合《中国药典》(2010年版)标准，均为正品道地药材。

根据《中国药典》(2010版)吴茱萸正常成人用量2 g～5 g。实验采用成人用药中剂量的6倍作为大鼠实验剂量。吴茱萸制备成含生药0.3 g·mL-1的水煎药液。煎煮方法：吴茱萸15 g，加5倍水量浸泡30 min，煎煮至沸后20 min，过滤，再加入5倍水第二次煎煮，沸后20 min，再次过滤。收集两次过滤的滤液，进行混合后，继续小火加热，最后浓缩至50 mL，经直径为0.45 μm微孔滤膜过滤后，将吴茱萸水煎液置于4 ℃冰箱保存备用。

苯甲酸雌二醇注射液(宁波第二激素厂，规格：2 mL：4 mg，批号110252511)、缩宫素注射液(河南辅仁怀庆堂制药有限公司，规格：1 mL：10 U，批号H19993526)。

1.3仪器

SV-4离体组织器官恒温灌流系统、HW-1000超级恒温水箱、BL-420S生物机能实验系统、FT-100生物张力换能器(均购自成都泰盟科技有限公司)、雷磁PHS-25台示PH计(上海仪电科学仪器股份有限公司生产)。

2方法

2.1动物分组

SD雌性、未孕大鼠18只，随机分为对照组、贵州吴茱萸组、长沙吴茱萸组，每组6只。

2.2大鼠离体子宫平滑肌标本的制备[7]

SD大鼠于实验前48 h和24 h两次皮下注射苯甲酸雌二醇0.1 mg·kg-1，人工造成动情期以增加子宫平滑肌对药物的敏感性[8]。实验时用20 %氨基甲酸乙酯将大鼠进行腹腔麻醉后，打开腹腔，迅速剖取子宫，轻轻分离周围的血管、脂肪及结缔组织，穿线结扎子宫阴道端，向子宫角方向剪取子宫肌约2 cm，于盛有洛氏液(主要成分(g·L-1)：NaCl 9.0，KCl 0.42，CaCl20.24，NaHCO30.2，葡萄糖2.0，PH：7.4。洛氏液每次实验前临时配制，所用NaCl、KCl、CaCl2、NaHCO3、葡萄糖均为国产分析纯试剂)的培养皿中清洗，再用手术丝线结扎离体子宫肌另一端。

2.3离体子宫平滑肌标本的连接

将大鼠离体子宫阴道端固定于预热10 mL洛氏液的恒温浴槽底部T型小钩上，上端连接于张力换能器，张力换能器通过计算机软件BL-420S生物信号机能实验信号采集系统记录平滑肌收缩情况。浴槽内持续通入95 %O2和5 %CO2混合气体，标本给予前负荷1 g，并保持恒温37 ℃进行孵育，待子宫恢复平稳的自发性活动约30 min后，开始描记10 min正常收缩曲线。参数设置扫描速度为：50.00 s/Div。

2.4对照组大鼠离体子宫平滑肌收缩曲线的描记

对照组大鼠离体子宫平滑肌标本给予前负荷1 g，孵育至子宫自发性活动平稳30 min后，先描记给予缩宫素前的正常收缩曲线，描记10 min后，向浴槽内加入缩宫素0.3 mL，再描记10 min子宫收缩曲线。然后向浴槽内加入预热37 ℃的洛氏液0.2 mL，再继续描记10 min子宫收缩曲线。观察对照组缩宫素前10 min、缩宫素后10 min以及洛氏液后10 min收缩曲线，记录其收缩张力、收缩频率以及活动力。

2.5贵州吴茱萸组大鼠离体子宫平滑肌收缩曲线的描记

贵州吴茱萸组与对照组一样，大鼠离体子宫平滑肌标本给予前负荷1 g，孵育至子宫自发性活动平稳30 min后，先描记给予缩宫素前的正常收缩曲线，描记10 min后，向浴槽内加入缩宫素0.3 mL，同样描记10 min子宫收缩曲线结束后，向浴槽内加入预热37 ℃的贵州吴茱萸水煎液0.2 mL，浴槽内吴茱萸终浓度为0.006 g·mL-1，再继续描记10 min子宫收缩曲线。观察贵州吴茱萸组给予缩宫素前10 min、缩宫素后10 min以及给予贵州吴茱萸水煎液后10 min收缩曲线，记录其收缩张力、收缩频率以及活动力。

2.6长沙吴茱萸组大鼠离体子宫平滑肌收缩曲线的描记

长沙吴茱萸组大鼠离体子宫平滑肌标本同样给予前负荷1 g，37 ℃孵育至子宫自发性活动平稳30 min后，先描记给予缩宫素前的正常收缩曲线，描记10 min后，向浴槽内加入缩宫素0.3 mL，同样描记10 min子宫收缩曲线结束后。之后，向浴槽内加入预热37 ℃的长沙吴茱萸水煎液0.2 mL，再继续描记10 min子宫收缩曲线。观察长沙吴茱萸组缩宫素前10 min、缩宫素后10 min以及给予长沙吴茱萸水煎液后10 min收缩曲线，记录其收缩张力、收缩频率以及活动力。

2.7数据学处理

所有统计分析均采用SPSS20.0软件，实验结果以“± s”表示，各组间均数比较采用单因素方差分析。

3结果

3.1缩宫素对大鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响

在给予缩宫素前，对照组大鼠离体子宫平滑肌呈现出频率和幅度相对稳定的自发性收缩。给予缩宫素后，大鼠离体子宫平滑肌出现持续的不完全强直收缩，其收缩张力、收缩频率及活动力明显增强，并持续较长时间。

与给缩宫素前相比，给缩宫素后大鼠离体子宫平滑肌收缩张力明显增加(p<0.05)，收缩频率及活动力也明显增加，有极显著差异(p<0.01)。为与贵州吴茱萸组和长沙吴茱萸组进行对比，对照组在给缩宫素描记10 min后，给予与吴茱萸水煎液同体积的洛氏液0.2 mL，并继续记录子宫平滑肌活动的收缩曲线10 min。对照组给予洛氏液后，大鼠子宫平滑肌收缩频率与给缩宫素后相比具有显著性差异(p<0.05)，大鼠子宫平滑肌张力和活动力稍有下降，但与给予缩宫素后的收缩活动作相比，无显著性差异，分析其原因可能与缩宫素作用持续时间有一定关系。如表1。

表1　对照组大鼠离体子宫平滑肌的

注：△p<0.05，与同组给药前相比具有显著差异；△△p<0.01，与同组给药前相比具有极显著差异；*p<0.05，与同组给缩宫素后相比具有显著差异。

3.2贵州吴茱萸水煎液对大鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响

贵州吴茱萸组在给予缩宫素前，大鼠离体子宫平滑肌活动收缩频率及幅度较有规律。给予缩宫素后，大鼠离体子宫平滑肌出现了高频率大幅度的收缩，其收缩张力、频率和活动力明显增强(p<0.01)。给予贵州吴茱萸水煎液后，大鼠离体子宫平滑肌收缩张力、频率活动力明显下降(p<0.01)。说明贵州吴茱萸水煎液能够减弱缩宫素引起的子宫平滑肌的收缩活动，降低其收缩张力、收缩频率和活动力。如表2。

表2贵州吴茱萸水煎液对大鼠离体子宫平滑肌的影响

Tab.2　The effects of Guizhou cultivation Evodia

分 组平均张力/g频率/次/10min活动力(频率×强度)给药前1.114±0.3635.500±2.5886.717±4.552给缩宫素后3.201±0.986△△12.00±1.414△△38.656±12.798△△给洛氏液后1.681±0.375**10.00±1.673**16.880±4.647**

注：△△ p<0.01，与同组给药前相比具有极显著差异；**p<0.01，与同组给缩宫素后相比具有极显著差异。

3.3长沙吴茱萸水煎液对大鼠离体子宫平滑肌收缩活动的影响

长沙吴茱萸组在给予缩宫素前，大鼠离体子宫平滑肌活动收缩频率及幅度较有规律。给予缩宫素后，大鼠离体子宫平滑肌出现了高频率大幅度的收缩，其收缩张力、频率明显增强(p<0.01)，活动力增加(p<0.01)。给予长沙吴茱萸水煎液后，大鼠离体子宫平滑肌收缩张力、活动力明显下降(p<0.05)，而收缩频率变化不大。说明长沙吴茱萸水煎液能够减弱缩宫素引起的子宫平滑肌的收缩活动，降低其收缩张力、和活动力，而对收缩频率影响不大。如表3。

表3长沙吴茱萸水煎液对大鼠离体子宫平滑肌的影响

Tab.3　The effects of Changsha cultivation Evodia

分 组平均张力/g频率/次/10min活动力(频率×强度)给药前0.585±0.4024.500±1.6432.653±2.345给缩宫素后1.927±1.028△△11.833±0.983△△23.323±13.802△给洛氏液后1.338±0.685*10.500±1.04914.403±8.341*

注：△p<0.05，与同组给药前相比具有显著差异；△△p<0.01，与同组给药前相比具有极显著差异；*p<0.05，与同组给缩宫素后相比具有显著差异。

3.4贵州与长沙吴茱萸水煎液对离体子宫平滑肌作用比较

通过计算药物对大鼠离体子宫平滑肌收缩的抑制率可以反映药物对大鼠离体子宫平滑肌收缩的抑制作用，抑制率(100 %)=(药物处理前效应-药物处理后效应/药物处理前效应)×100 %[9]。

与对照组相比，贵州吴茱萸组、长沙吴茱萸组对大鼠离体子宫平滑肌收缩频率的抑制率没有明显差异，但对平均张力和活动力的抑制率有明显差异。对照组平均张力抑制率为8.6 %，贵州吴茱萸组平均张力抑制率为46.2 %，长沙吴茱萸组平均张力抑制率为30.8 %，贵州吴茱萸、长沙吴茱萸平均张力抑制率明显高于对照组，差异具有显著性(p<0.01)，贵州吴茱萸平均张力抑制率明显高于长沙吴茱萸，差异具有显著性(p<0.01)。对照组活动力抑制率为18.1 %，贵州吴茱萸组活动力抑制率为55.3 %，长沙吴茱萸组活动力抑制率为37.9 %，贵州吴茱萸活动力抑制率明显高于对照组，差异具有显著性(p<0.01)，长沙吴茱萸活动力抑制率明显高于对照组，差异具有显著性(P<0.05)，贵州吴茱萸活动力抑制率明显高于长沙吴茱萸，差异具有显著性(P<0.05)。如表4。

表4　贵州吴茱萸、长沙吴茱萸对大鼠离体子宫平滑肌

注：△△p<0.01，与对照组相比具有极显著差异；▲▲p<0.01，与对照组相比具有极显著差异；▲p<0.05，与对照组相比具有显著差异；**P<0.01，与长沙吴茱萸组相比具有极显著差异。*p<0.05，与长沙吴茱萸组相比具有显著差异。

实验结果表明：贵州与长沙吴茱萸水煎液均明显减弱了缩宫素作用下大鼠离体子宫平滑肌的收缩张力、收缩频率及活动力。贵州吴茱萸水煎液对缩宫素作用下的大鼠离体子宫平滑肌的收缩活动的抑制作用较长沙吴茱萸水煎液作用更强。

4讨论

本研究通过动物实验，以大鼠离体子宫收缩张力、收缩频率、活动力以及抑制率为指标，观察缩宫素致大鼠离体子宫平滑肌收缩状态下，吴茱萸水煎液对大鼠离体平滑肌收缩活动的影响。结果表明，贵州和长沙两产地吴茱萸水煎液均能降低子宫平滑肌的收缩张力、频率及活动力。通过对两产地吴茱萸水煎液对大鼠离体子宫平滑肌收缩活动的抑制率的比较，可以看出贵州吴茱萸水煎液对缩宫素所致的大鼠子宫平滑肌收缩的抑制作用比长沙吴茱萸水煎液更为显著。这为吴茱萸在临床中作为单味药或与其他中药配伍治疗痛经提供了离体实验依据，同时，吴茱萸作为贵州道地药材，其水煎液与长沙吴茱萸水煎液中所含成份及含量有所不同，根据实验结果初步推测贵州吴茱萸水煎液中缓解子宫平滑肌收缩的某种有效成分比长沙吴茱萸水煎液的成分多。

由于吴茱萸的化学成分较为复杂，其活性成分主要有吴茱萸碱、吴茱萸次碱等吲哚类生物碱、柠檬苦素等苦味素、挥发油等成分，本课题组成员今后将对贵州吴茱萸具体的一些可能对子宫平滑肌产生舒张作用的成分及其作用机制作更深入的研究，从而为吴茱萸对痛经的防治开发新的应用提供实验依据。

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Comparison in the cultivation effect of evodia rutaecarpa on dysmenorrhea model of isolated rat uterine smooth muscle in Guizhou and Changsha

CHEN Tianqi1，YANG Weiping2，WANG Yan1，PENG Fang1，CAI Hengmao2，ZHAO Yunhua3

(1DepartmentofPhysiology，GuiyangCollegeoftraditionalChinesemedicine，Guiyang550002，China；2DepartmentofPharmacy，GuiyangCollegeoftraditionalChinesemedicine，Guiyang550002，China；3DepartmentofFunctionalLaboratory，GuiyangCollegeoftraditionalChinesemedicine，Guiyang550002，China)

Abstract：To record rat isolated uterine smooth muscle contraction by BL-420S biological signal system，the effect on rat uterine smooth muscle contraction were compared by investigating the difference of contractile tension，frequency and activity of the rat isolated uterine smooth muscle which were decocted by Evodia Rutaecarpa water from two different habitat - Guizhou and Changsha.The results show that both the cultivation Evodia Rutaecarpa water decoction from Guizhou and Changsha can decrease the contractile tension，frequency and activity of uterine smooth muscle induced by oxytocin (p<0.01) and (p<0.05)，respectively，but the effect of cultivation Evodia Rutaecarpa water from Guizhou is better than that from Changsha.

Keywords：evodia rutaecarpa； uterine smooth muscle； in vitro；dysmenorrhea

通讯作者：▲杨卫平，女，教授，主要从事单味药及复方的药效学研究。

作者简介：陈天琪(1979-)，女，布依族，贵州贵阳人，中西医结合硕士。研究方向：平滑肌收缩生理机制。

*基金项目：贵州省科技计划项目(黔科合ZY[2011]3010号)：吴茱萸优质道地药材评价体系构建，课题负责人：杨卫平。

收稿日期：2015-10-22；修回日期：

中图分类号：R 331

文献标识码：A

文章编号：1003-6563(2016)01-0020-05