一种新的检测CIC的方法与结缔组织病的相关性研究

范念念 井洪 魏丹丹 张弢

摘要：目的 探讨自主开发的一种新的检测循环免疫复合物（circulating immune complex， CIC）的方法在结缔组织病中的应用价值。方法 应用速率透射比浊法，上生化分析仪迅速比较系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus， SLE）、类风湿关节炎（rheumatoid arthritis， RA）及干燥综合征（sjogren syndrome， SS）等结缔组织病患者血清中CIC与健康人血清之间的差异。结果 SLE、RA及SS这三种结缔组织病患者血清中CIC与健康人相比有统计学意义（P<0.01）。SLE、RA及SS女性患者与健康女性对照组比较，t=5.899，5.179，16.571，P<0.01；SLE及RA男性患者与健康男性对照组比较，t=6.573，6.981，P<0.01；SS患者的CIC水平明显高于SLE及RA患者；而SLE及RA患者不同性别之间比较无统计学意义（P>0.05）。结论 SLE、RA及SS患者的血清CIC水平高于健康对照组，因此这种检测CIC的新方法可作为判断疾病的临床指标。而且，这种新方法，即采集标本后可立即应用生化分析仪检测，便于大样本大批量的基础筛查和结果判读，速度快，敏感性、准确性更高，能快速间接反映体内的CIC的含量，更易于作为病情、疗效观察指标。

关键词：循环免疫复合物；系统性红斑狼疮；类风湿关节炎；干燥综合征

结缔组织病，以疏松结缔组织粘液样水肿及纤维蛋白样变性为病理基础的一组疾病。结缔组织病包括红斑狼疮、硬皮病、皮肌炎、类风湿性关节炎、结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿、巨细胞动脉炎及干燥综合征等。在70%RA患者血清中出现各种类型的免疫复合物，尤其是活动期和RF（+）患者[1]。SLE活动期CIC明显增高，甚至缓解期也常有升高，特别是狼疮性肾炎或血管炎，更可作为病情恶化的预兆[2]。85%干燥综合征患者的CIC阳性。因此，CIC的重要意义在于可作为病情、疗效观察指标。而目前检测CIC的方法陈旧、费时，准确性、敏感性差。本研究采用了一种快速检测CIC的方法，便于大批量的基础筛查及结果判读。

1资料与方法

1.1一般资料 采集本院2014年6月～2015年1月已明确诊断为系统性红斑狼疮、类风湿关节炎及干燥综合征的患者血清（40±20）岁，并采集来本院体检的健康人血清（40±20）岁做为对照组。

1.2 CIC的检测 应用2.6%聚乙二醇6000（PEG6000），PBS配制检测试剂，上生化分析仪AU640（OLYMPUS）在450nm的吸光度下检测血清中的CIC，比较标本组与对照组之间的OD值。

1.3统计学方法 应用独立样本t检验分析SLE、RA及SS患者与健康对照组的差异。

2 结果

2.1血清CIC的反应曲线 各分析1例SLE、RA及SS患者的反应曲线，发现在加入单试剂后第3min（point 10）时反应基本上达到饱和，之后反应趋于平衡，如图1所示。因此，本研究选择point 10减去point 0的OD值作为结果。

2.2各样本间血清CIC的OD值分析 比较SLE、RA及SS患者与健康对照者的血清CIC的OD值，发现有统计学意义（P<0.01），如图2所示，从图2也可以看出，SS患者的血清CIC水平明显高于SLE及RA患者。而SLE及RA不同性别间比较无统计学意义，患者的人数分布如表1所示。

3 讨论

本研究采用一种新的检测CIC的方法，能区分SLE、RA及SS患者与健康对照者的血清。而一项WHO的研究分析了18种检测CIC的方法，仅发现六种方法能区分RA患者与健康对照者的血清[3]。在这六种方法中，评价最高的检测方法是C1qBA（C1q binding assay）方法，但是另一研究表明此种方法检测到的CIC是在体外形成的结果[4]。另外两种方法是单克隆类风湿因子结合抑制放射免疫分析法及人Burkitt's淋巴瘤细胞（Raji细胞）测试法，前者受游离RF的影响而不适于RA患者，而后者受抗核抗体的影响，抗核抗体能与Raji细胞结合，导致假阳性。另外三种方法也是建立在细胞相互作用的基础上，抗核抗体的存在会导致假阳性。因此，此种新方法能替代以上六种方法，进而可以商品化应用于快速检测血清CIC。目前，本研究采集的血清标本还比较少，因此，还需采集大量的标本来分析CIC与结缔组织病的相关性。

同时，本研究比较了CIC与免疫球蛋白的关系，发现CIC与免疫球蛋白呈正相关，而检测免疫球蛋白的方法无法区分结合和游离的免疫球蛋白，因此还需应用其他方法区分是否是与抗原结合的免疫球蛋白。

CIC含有许多不同的抗原，可反应疾病的状态。Kaname Ohyama[5]等发现CIC相关的抗原成分凝血酶敏感蛋白-1可做为诊断早期RA的指标。因此，研究CIC的抗原成分可有助于疾病的早期诊断，活动度及预后判断，本研究接下来拟应用该文章中的纳米液相质谱方法分析CIC中的抗原成分与结缔组织病的关系。

参考文献：

[1]叶任高，陆再英，等.内科学[M].第5版.人民卫生出版社，2004.

[2]许德清，曾凡钦，等. 红斑狼疮[M]. 中国医药科技出版社，2003.

[3]Lambert PH，Dixon FJ，Zubler RH，et al. A WHO collaborative study for the evaluation of eighteen methods for detecting immune complexes in serum[J].J Clin Lab Immun，1978，1：1-15.

[4]Peter Faaber，Truus P.M.Rijke Schilder，Peter J.A.Capel，et al.Circulating immune complexes and Rheumatoid Arthritis[J].J Rheumatol，1985，12：849-853.

[5]Kaname Ohyama， Yukitaka Ueki， Atsushi Kawakami， et al.Immune Complexome Analysis of Serum and Its Application in Screening for Immune Complex Antigens[J].Rheumatoid Arthritis，2011，57：905-909.

编辑/金昊天