EV71型重症手足口病患儿血浆可溶性髓系细胞触发受体—1及炎症介质水平的变化

江明荣 周曙明 黄循斌 谢晓彬 陈柏良

[摘要] 目的 探讨EV71型重症手足口病血浆可溶性髓系细胞触发受体-1及炎症介质水平的变化情况。 方法 选取2013年12月～2015年6月在深圳市龙岗中心医院临床诊断感染EV71的90例手足口病患儿（感染组）和50例同期体检健康儿童（对照组）作为研究对象，根据临床分型将感染组分为普通组（32例）和重症组（58例）。比较各组及感染组急性期和恢复期血浆sTREM-1及TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平。 结果 与对照组比较，感染组血浆sTREM-1及TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平明显升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）；感染组急性期血浆sTREM-1及TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平明显高于恢复期，差异均有统计学意义（P < 0.05）；与对照组比较，普通组、重症组急性期及恢复期血浆sTREM-1及TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平均明显升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）；重症组急性期及恢复期血浆sTREM-1及TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平均明显高于普通组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 sTREM-1在EV71型重症手足口病发病过程中可能起促炎作用，该病与抗炎与促炎介质失衡有关。

[关键词] 肠道病毒71型；重症手足口病；可溶性髓系细胞触发受体-1；炎症介质

[中图分类号] R512.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）03（b）-0084-04

[Abstract] Objective To investigate the changes of plasma soluble triggering receptor-1 and inflammatory mediators in children with severe hand foot and mouth disease of EV71. Methods The 90 children with hand foot mouth disease of EV71 diagnosed clinically in Longgang Central Hospital of Shenzhen from December 2013 to June 2015 （infection group） and 50 cases of healthy children （control group） during the same period were selected as research subjects， the infection group were divided into common group （32 cases） and severe group （58 cases） according to the clinical classification. Levels of plasma sTREM-1， TNF-α， IL-1β， IL-8， IL-4 and IL-10 in each group and children with different stages of the infection group were compared. Results Compared with the control group， the levels of plasma sTREM-1， TNF-α， IL-1β， IL-8， IL-4 and IL-10 in infection group were significantly higher than the control group， the differences were statistically significant （P < 0.05）； the levels of plasma sTREM-1， TNF-α， IL-1β， IL-8， IL-4 and IL-10 in children at acute stage of infection group were significantly higher than the recovery period， the differences were statistically significant （P < 0.05）； compared with the control group， the levels of plasma sTREM-1， TNF-α， IL-1β， IL-8， IL-4 and IL-10 were significantly increased in normal group， children at severe acute stage and recovery stage of the infection group， the differences were statistically significant （P < 0.05）； the levels of plasma sTREM-1， TNF-α， IL-1β， IL-8， IL-4 and IL-10 in children at severe acute stage and recovery stage were significantly higher than the normal group， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion STREM-1 may play a pro-inflammatory role in the pathogenesis of severe hand foot mouth disease in type EV71， which is related to the imbalance of anti-inflammatory and pro-inflammatory mediators.

[Key words] Intestinal virus type 71； Severe hand foot mouth disease； Soluble triggering receptor-1； Inflammatory mediators

手足口病（hand-foot-and-mouth disease，HFMD）是一种由肠道病毒引起的传染性疾病，多见于5岁以下的儿童，主要由柯萨奇病毒A16型（CoxA16）和肠道病毒71型（EV71）引起[1]。其临床表现包括口腔、手、臀部及足等部位出现疱疹、斑丘疹，部分患儿同时伴有发热症状。据报道，近年来由EV71感染引起的手足口病患儿每年有超过100万例，且呈逐年升高趋势[2]。EV71型重症手足口病预后差，常合并循环系统、呼吸系统、神经系统等严重并发症，甚至导致死亡。因此，EV71型重症手足口病现已成为严重威胁我国婴儿健康的最大难题。髓系细胞触发受体-1（triggering receptor expressed on myeloid cell-1，TREM-1）属于一种免疫球蛋白超家族活化受体，在髓样细胞表面表达[3]，其活化可促进白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎症介质释放。可溶性髓系细胞触发受体-1（soluble triggering receptor expressed on myeloid cell-1，sTREM-1）是TREM-1的分泌亚型，在机体遭受感染情况下可释放进入血液。本研究探讨EV71型重症手足口病患儿血浆sTREM-1及炎症介质水平变化情况，旨在为EV71型重症手足口病的发病机制和临床诊治提供参考，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年12月～2015年6月在我院临床诊断感染EV71的90例手足口病患儿作为感染组研究对象，均符合原卫生部制订的《手足口病诊疗指南（2010年版）》[4]中的诊断标准，且经病原学检查确诊为EV71感染，其中男53例，女37例，年龄3个月～4岁，平均（1.8±0.7）岁。根据临床分型分为普通组（32例）和重症组（58例），其中普通组男20例，女12例，年龄2个月～4岁，平均（1.5±0.9）岁；重症组中重型30例，危重型28例，男33例，女25例，年龄2个月～3岁，平均（1.2±0.8）岁。另选取50例我院同期体检健康儿童作为对照组，男29例，女21例，年龄5个月～4岁，平均（1.9±0.6）岁。三组在性别、年龄等一般资料方面比较差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会同意，所有研究对象知情并签署同意书。

1.2 HFMD临床分型

参照《手足口病预防控制指南》（2010年版）分为普通型和重症型，具体内容如下：手、足、口、臀部皮疹，部分出现发热为普通型；重症型分为重型和危重型，出现神经系统受累表现为重型，如无力或急性弛缓性麻痹；肢体抖动，肌阵挛、眼球震颤、共济失调、眼球运动障碍；头痛、呕吐；精神差、嗜睡、易惊、谵妄。体征可见脑膜刺激征，腱反射消失或减弱。出现以下情况之一者为危重型：①休克等循环功能不全表现；②肺部啰音、呼吸困难、血性泡沫痰、紫绀等；③脑疝、昏迷、频繁抽搐。

1.3 HFMD临床分期

根据患儿病情进展情况分为急性期和恢复期，急性期为病程的第1～4 d，可见口腔溃疡、皮疹，伴或不伴发热，重症者伴循环系统、呼吸系统及神经系统损伤症状；恢复期为病程的7～14 d，皮疹及口腔溃疡等症状基本消失，无发热症状，重症者神经系统受累症状大部分改善，逐渐恢复心肺功能。

1.4 观察指标及检测方法

抽取所有研究对象外周肘静脉血3 mL，置于肝素抗凝管中，3000 r/min离心15 min，分装后置于-80℃冰箱中保存待测。观察指标包括血浆sTREM-1、促炎因子及抗炎因子，其中促炎因子包括TNF-α、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-8，抗炎因子包括白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）。均采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法进行测定，试剂盒由美国R&D公司提供，严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 感染组不同分期与对照组血浆sTREM-1及相关炎症因子水平比较

与对照组比较，感染组急性期及恢复期血浆sTREM-1及TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平明显升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）；感染组急性期血浆sTREM-1及TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平明显高于恢复期，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 感染组急性期与对照组血浆sTREM-1及相关炎症因子水平比较

与对照组比较，普通组和重症组急性期血浆sTREM-1及TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平明显升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）；重症组急性期血浆sTREM-1及TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平明显高于普通组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

2.3 感染组恢复期与对照组血浆sTREM-1及相关炎症因子水平比较

与对照组比较，普通组和重症组恢复期血浆sTREM-1及TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平明显升高，差异有统计学意义（P < 0.05）；重症组恢复期血浆sTREM-1及TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平明显高于普通组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表3。

3 讨论

手足口病属于一种近年来流行的急性发热出疹性传染疾病，主要症状为手、足、口腔等部位疱疹或皮疹和发热，少数患儿可合并心肌炎、肺水肿、急性迟缓性麻痹、脑炎及无菌性脑膜炎等[5]。目前，其发病机制尚未阐明，可能与病毒直接侵犯组织细胞有关，大量病毒在体内复制可破坏细胞[6-7]。

临床研究表明，手足口病的主要病原体为EV71和CoxA16，其中以EV71型重症手足口病最为常见[8]。EV71型重症手足口病病情进展迅速，病死率高，临床上可见神经源性肺水肿、脑脊髓炎及脑炎等。有研究表明，年龄<3岁的EV71型重症手足口病患儿进展为重症病例的可能性很大，其原因为婴幼儿免疫功能尚未发育成熟[9]，提示该病的发生与免疫功能密切相关。

正常情况下，机体内的细胞因子处于互相制约状态，共同维护免疫平衡。当病毒侵入机体时，免疫细胞被激活而不断分泌细胞因子，细胞因子在参与机体免疫病理损伤的同时保护机体免疫。细胞因子中抗炎介质与促炎介质间保持平衡有助于维持机体内环境稳态，该平衡一旦被打破，则会出现诸多不良后果。促炎介质占主导地位会使炎性反应进一步加重，抗炎介质占主导地位则会使抗炎/促炎趋于平衡，机体炎性反应随之减轻。TNF-α主要由活化单核巨噬细胞、激活的中性粒细胞产生，是机体感染后最早产生的多功能细胞因子之一，可直接损伤血管内皮细胞，同时通过自分泌方式作用于单核巨噬细胞而加重炎性反应[10]。IL-1β是一种能激活多种免疫和炎症细胞的促炎症细胞因子，具有广泛的免疫调节作用，同时具有介导炎症和致热作用[11]。IL-8是一种强而有力的中性粒细胞趋化和活化因子。目前认为，TNF-α、IL-1β导致的炎性反应在很大程度上是通过诱导以IL-8为代表的趋化因子产生的，且与炎性反应严重程度呈正相关[12]。IL-10由巨噬细胞核T淋巴细胞产生，可发挥抑制机体免疫功能和拮抗促炎介质的双重作用[13]。其主要生物活性是免疫抑制作用，可抑制单核细胞、中性粒细胞等产生促炎症因子和趋化因子，减少TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8等的释放。IL-4是重要的抑炎症因子之一，可增加正常休止期T细胞活性、调节造血功能，抑制炎性反应进一步加重[14]。

本研究结果发现，恢复期各炎症因子水平高于对照组，可能与体液免疫有关，刘亚敏等[15]研究指出，EV71手足口病型患儿患病7 d后血清特异性抗体IgM明显增加，与本研究结果相一致。重症组急性期及恢复期血浆TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平均明显高于普通组，提示EV71型重症手足口病患儿机体处于更为复杂的兔疫紊乱和动态失衡状态。可能原因为EV71型重症手足口病早期EV71诱导TNF-α前炎症细胞因子大量产生，导致全身炎性反应综合征，炎性反应的进一步加重可造成IL-10等抗炎细胞因子持续大量产生以拮抗过度产生的前炎症细胞因子[16]。急性期TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10水平均明显高于恢复期和对照组，提示感染EV71后早期会出现免疫保护作用，急性期上述细胞因子水平升高则有助于机体早期启动非特异性和特异性免疫，进而最大限度调动抗炎因子与促炎因子参与对EV71的免疫，加速手足口病自限恢复。

髓系细胞触发受体（triggering receptor expressed on myeloid cells，TREM）是新近发现的一个受体家族，TREM-1是其中一个与炎症相关的成员[17]。TREM-1属于免疫球蛋白家族，专一表达于中性粒细胞、CD14+单核/巨噬细胞表面的跨膜糖蛋白，在调节中性白细胞和单核细胞的激活过程及炎性反应中具有重要作用。sTREM-1是TREM-1的一种分泌亚型，感染初期即可大量释放进入血液[18-19]。近年来，sTREM-1与感染性疾病的关系成为研究的热点。研究指出，脓毒症患儿血浆sTREM-1水平较正常者明显升高，sTREM-1水平变化可在一定程度上反映感染严重情况[20]。sTREM-1水平变化趋势与促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-8一致，提示sTREM-1可能属于一种促炎介质，其变化趋势可反映病情转归情况，水平升高提示炎性反应加重，降低则说明病情好转。

研究表明，EV71引起的炎性反应极易损伤中枢神经系统小血管内皮，造成血管炎性变及细胞融合等改变，进而导致神经系统疾病发生[21]。有效改善机体免疫状态，积极进行抗炎治疗有助于EV71型重症手足口病的预防[22]。综上所述，密切监测EV71型重症手足口病患儿血浆sTREM-1及炎症因子水平变化具有重要的临床意义，可在临床上推广应用。

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（收稿日期：2015-12-07 本文编辑：任 念）