趋化因子与复发性流产相关性的临床研究

杨素娟　赵志明　王玮　崔娜　郝桂敏

050000　石家庄市，河北医科大学第二医院生殖医学科



·论著·

趋化因子与复发性流产相关性的临床研究

杨素娟赵志明王玮崔娜郝桂敏

050000石家庄市，河北医科大学第二医院生殖医学科

【摘要】目的研究血清中趋化因子与复发性流产的相关性,探讨主动免疫治疗原因不明复发性流产(URSA)患者疗效的可能机制。方法选择就诊的URSA患者60例，以正常非孕、正常妊娠组各20例为对照。免疫治疗前后抽取肘静脉血3 ml，采用酶联免疫吸附法检测血清中正常T细胞活化后表达和分泌的调节蛋白(RANTES)、白介素-8(IL-8)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平。结果URSA患者血清中3种趋化因子水平明显低于正常非孕组、正常妊娠组(P<0.05或<0.01),而正常非孕组与正常妊娠组间差异无统计学意义(P>0.05)；URSA患者治疗后，3种趋化因子水平明显上升(P<0.01)；持续妊娠组在治疗前后3种趋化因子水平发生明显持续性改变(P<0.05)，以RANTES最为明显(P<0.01)，而非持续妊娠组变化不明显(P>0.05)。结论趋化因子水平变化可以做为免疫治疗URSA患者疗效评价的指标，尤其是RANTES水平，为早期诊断URSA患者及免疫治疗提供理论依据。

【关键词】流产,复发性；趋化因子；免疫治疗

复发性流产(recurrent spotaneous abortion，RSA)是指连续2次或2次以上的自然流产,其发生率约为5%[1，2]。发病原因复杂,少数患者找到的原因可能有遗传因素、解剖异常、生殖道感染等。但多数患者流产原因不明，称为原因不明复发性流产(unexplained recurrent spotaneous abortion,URSA),占总发生率的40%～60%[2-6]。URSA可能与同种免疫有关，而血清中趋化因子水平变化又与同种免疫相关，尤其在应用主动免疫治疗后，趋化因子水平变化明显。说明趋化因子水平变化与URSA有关。为探讨其可能机制，本研究对60例接受主动免疫治疗的URSA患者进行研究，测定主动免疫治疗前后患者血清中正常T细胞活化后表达和分泌的调节蛋白(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)和白介素-8(interleukin-8,IL-8)水平的变化，试图为URSA的发病及治疗探讨新途径。

1资料与方法

1.1一般资料URSA组：2012年4月至2013年12月在我院门诊就诊的URSA患者60例，年龄22～26岁，平均年龄(26.0±2.2)岁。入组标准：自然流产均≥2次；排除遗产性疾病，染色体检查正常；生殖系统与解剖结构正常；妇科内分泌检查均无异常；排除自身免疫性疾病；男方精液正常。60例均接受主动免疫治疗[1,7]。依据妊娠结局分为持续妊娠组(45例)和非持续妊娠组(15例)。正常非孕组20例选自同期门诊要求放置宫内节育器的女性，年龄24～37岁，平均年龄(27.0±3.0)岁，既往有妊娠史但无自然流产、死胎或死产史，无上述疾病史。正常妊娠组：20例选自同期门诊孕40～49 d要求行人工流产女性，年龄22～34岁，平均年龄(27.0±4.2)岁，既往无不良孕育史及上述疾病史。

1.2检测方法抽取患者肘静脉血3 ml，置无菌试管，室温下待其自然凝固，2 000 r/min离心10 min，分离血清后置-70℃冰箱待测。采用酶联免疫吸附法测定血清中RANTES、IL-8、MCP-1水平。检测过程中严格按试剂盒(RB美国)说明书操作且为1次检测，以减少批间误差和操作误差。

2结果

2.1URSA组主动免疫治疗前与正常非孕组、正常妊娠组血清中RANTES、IL-8、MCP-1水平比较URSA组主动免疫治疗前血清中3种趋化因子水平明显低于正常非孕组、正常妊娠组，差异有统计学意义(P<0.05或<0.01)，而正常非孕组与正常妊娠组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　免疫治疗前3组血清中3种趋化因子水平比较　±s

注：与URSA组比较，*P<0.05，#P<0.01

2.2URSA患者主动免疫治疗前后血清中RANTES、IL-8、MCP-1水平比较URSA患者主动免疫治疗后血清中3种趋化因子水平均明显升高，与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表2　URSA患者免疫治疗前后血清中3种趋化因子水平比较　±s

2.3持续妊娠组治疗前后血清中3种趋化因子水平比较持续妊娠组免疫治疗后血清中3种趋化因子水平均有明显上升,以RANTES为著,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05或<0.01)。见表3。

表3　持续妊娠组免疫治疗前后血清中3种趋化因子水平比较　±s

2.4非持续妊娠组治疗前后血清中3种趋化因子水平比较非持续性妊娠组治疗后血清中3种趋化因子有上升趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4　非持续妊娠组免疫治疗前后血清中3种趋化因子水平比较　±s

3讨论

对于生殖免疫来说，妊娠成功是一种半同种移植。妊娠失败、流产除常见的原因除解剖学改变、染色体异常、妇科内分泌异常外，还与免疫排斥相关，是一种同种免疫现象，称同种免疫型复发性流产。流行病学调查发现，1次流产后再次流产的发生率为17%，2次流产后再次流产的发生率为24%，3次流产后再次流产的发生率为40%～50%[8]。对于胚胎染色体检查正常而找不到明确原因导致流产的患者来说,随着流产次数的增加,其发生的比例也增加。

3.1趋化因子与正常妊娠的关系正常妊娠时母体免疫可能倾向辅助T淋巴细胞Th2型免疫应答而偏离Th1型细胞免疫,即向着Th2型方向倾斜以体液免疫为主。妊娠各期胎盘的细胞滋养层细胞都能分泌Th1型细胞因子IL-8、IL-10。IL-8通过与相应受体结合参与胚胎植入的调控，促进宫颈成熟，促使羊水中粒细胞进入绒毛膜和胎盘，提示参与炎性反应。

RANTES与相应受体结合后主要能特异性趋化T细胞、单核细胞、嗜酸性细胞，且能杀伤T细胞活性，还能参与宫颈成熟和分娩发动。有研究发现，RANTES水平低下时母体免疫系统将胎儿视为异物进而排斥导致流产，提示RANTES具有封闭抗体的效应，对成功妊娠起重要作用[9]。

MCP-1与其受体相结合，在母体激素分泌调控下，对胚胎植入子宫内膜的全过程中起着重要作用[9]。妊娠早期滋养叶细胞产生少量MCP-1，妊娠中晚期则产生较多MCP-1，参与宫颈成熟与分娩发动机制。

本研究在免疫治疗前检测URSA组、正常非孕组、正常妊娠组血清中RANTES、IL-8、MCP-1水平，结果表明，URSA组中3种趋化因子水平明显低于其他2组(P<0.05或<0.01)，而正常非孕组与正常妊娠组间差异无统计学意义(P>0.05)，说明3种趋化因子对胚胎植入的调控起着重要作用。

3.2趋化因子与URSA的关系鉴于上述3种趋化因子在正常妊娠全过程中起着关键作用，倘若趋化因子水平发生改变，将对胚胎植入产生不利影响而致流产。有研究表明，与对照组比较，URSA组Th1型细胞因子水平升高，而Th2型细胞因子水平降低；URSA患者血清中IL-10水平明显降低，打破了Th1型与Th2型细胞因子的平衡关系，不能抑制Th1型细胞因子的产生，从而向Th1型细胞因子方向倾斜，最终导致流产[10,11]。有报道认为RANTES发挥其封闭抗体效应是通过抑制母体与配体间的混合淋巴细胞反应(mixed Leukocytes reaction,MLR)，若患者对MLR反应过强[10]，说明母体对同种异基因的胎儿抗原产生强排斥反应，提示RANTES水平低下，则封闭抗体缺失或不足易导致流产。

MCP-1对单核细胞具较强的趋化能力，虽然其对自然杀伤细胞(natural Keller,NK)不具有趋化能力，但当不需要穿过内皮细胞时它对NK细胞也表现出趋化能力，激化NK细胞的杀伤功能。

3.3趋化因子与免疫治疗的关系URSA与免疫因素密切相关，母体血清中缺乏抑制MLR封闭因子则会对携带父系抗原的胎儿产生排斥反应，导致流产。3种趋化因子中主要是RANTES能够介导母体耐受。研究表明，URSA组与正常组比较,血清中MLR偏低,且其反应水平随妊娠次数增加而升高[12]。体外MLR实验显示，RANTES能抑制母体对父系抗原的排斥反应,说明RANTES是通过免疫抑制来实现对胎儿的保护作用[12]。增加孕酮的水平可使子宫内膜中T细胞表达RANTES水平也增高,说明T细胞产生RANTES能力的下降,可能与URSA的发生有关。

研究证实，血清中RANTES水平明显低下的URSA患者在接受配偶的淋巴细胞主动免疫治疗后，MLR反应的强度较前显著下降而RANTES较前显著升高，且有80%再次妊娠成功率([6])。

本研究结果显示，主动免疫治疗后血清中3种趋化因子水平均上升，尤其是持续妊娠组显著上升，表明主动免疫治疗方法对URSA患者的持续妊娠的维持是可行的。非持续性妊娠组3种趋化因子水平仅有上升趋向，其机制尚需探讨。

参考文献

1杨素娟，江静，郝桂敏，等.主动免疫治疗后原因不明习惯性流产的临床研究.实用妇产科杂志，2007,23：300-302.

2孙莉,梁磊,杨波.主动联合被动免疫疗法治疗封闭抗体阴性孕妇复发性流产临床观察.山东医药,2015,55:44-45.

3李维宏,牟晓玲.黄体酮保胎治疗对不明原因复发性流产患者外周血辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞免疫失衡的影响研究.中国全科医学,2015,18:4444-4449.

4赵冬梅,吴振兰,赵建强,等.IL-18启动子基因多态性与原因不明复发性流产关系.青岛大学医学院学报,2015,42:671-673.

5张珺,杨菁.Th17/Treg免疫失衡与原因不明复发性流产关系的研究进展.生殖医学杂志,2015,24:960-964.

6黄志强,邱俊杰,张海波,等.转化生长因子TGF-β1-509(C/T)基因多态性与不明原因复发性自然流产的易感性研究.现代医院,2015,15:32-34.

7杨素娟，尹桂然，刘慈，等.原因不明复发性流产的免疫治疗.河北医药，2010,32：3486-3487.

8王文娟，邱丽华，林其德,等.连续2次原因不明自然流产免疫治疗必要性的探讨.中国实用妇科与产科杂志，2010,26：122-124.

9杨素娟，赵志明，郝桂敏，等.趋化因子与反复流产的关系研究进展.河北医药，2013,35：1707-1710.

10司马玲，蔡霞.反复流产免疫因素的研究进展.中国优生与遗传杂志，2011,19：7-10,24.

11朱红荣,朱亮.复发性流产生殖免疫学研究进展.中国优生与遗传杂志,2015,11:129-130.

12刘秀芝，李伟毅.趋化因子与生殖免疫.生殖与避孕，2009,29：172-175.

(收稿日期：2015-12-10)

【中图分类号】R 714.21

【文献标识码】A

【文章编号】1002-7386(2016)09-1403-03

通讯作者：郝桂敏，050000石家庄市，河北医科大学第二医院生殖医学科；

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.09.041

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