鼻咽癌组织血管生成拟态观察及其意义

叶浩昕，范绍翀，潘永，钟晓声，李江，戴智梅，严睿成

(广州市增城区人民医院，广州511300)

鼻咽癌组织血管生成拟态观察及其意义

叶浩昕，范绍翀，潘永，钟晓声，李江，戴智梅，严睿成

(广州市增城区人民医院，广州511300)

目的 观察鼻咽癌组织中血管生成拟态(VM)情况，并探讨其与患者临床病理参数的关系。方法 选择鼻咽癌组织(鼻咽癌组)82例份和鼻咽慢性炎症组织(炎症组)30例份，采用CD31和PAS双重染色检测VM情况，并分析其与鼻咽癌患者临床病理参数的关系。结果 鼻咽癌组23例份(28.05%)存在VM，炎症组不存在VM，两组VM阳性率比较有统计学差异(P<0.01)。VM与鼻咽癌患者年龄、性别、组织类型均无关(P均>0.05)，而与淋巴结转移有关(P<0.01)。Pearson相关分析显示，VM阳性率与鼻咽癌患者淋巴结转移呈正相关(r=0.502，P<0.01)。结论 鼻咽癌组织中存在VM，且与患者的淋巴结转移有关。

鼻咽癌；血管生成拟态；淋巴结转移；预后

恶性肿瘤需要获得足够血供，才能满足其快速生长的需求[1]。经典观点认为，只有内皮细胞才能形成血管，但是当内皮细胞依赖性血管不能满足快速生长的肿瘤组织时，非内皮细胞的血管性结构会出现在恶性肿瘤组织中，以满足其生长需要，这一现象被称为血管生成拟态(VM)[2]。研究发现，在宫颈癌[3]、黑色素瘤[4]、卵巢癌[5]、前列腺癌[6]、恶性胶质瘤[7]、骨肉瘤[8]、肺癌[9]组织中均存在VM，但目前关于鼻咽癌组织是否存在VM及其与患者临床病理参数关系的报道较少，为此我们进行了如下研究。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2012年1月～2015年4月在我院病理科存档的鼻咽癌组织82例份(鼻咽癌组)，均经组织病理检查确诊。患者男58例、女24例，年龄29～78岁、平均46.2岁；伴颈部淋巴结转移32例，不伴转移50例；组织类型分化型非角化性57例，未分化型非角化性25例。另选同期鼻咽部慢性炎症组织20例份(炎症组)，患者男15例、女5例，年龄25～71岁、平均44.1岁。两组性别、年龄具有可比性。本研究均获得患者的知情同意，并经过医院伦理委员会批准。

1.2 VM观察 两组组织均由4%中性缓冲甲醛固定，常规石蜡包埋后进行VM观察。①HE染色：石蜡组织3 μm厚度切片，常规脱蜡至水。苏木素染色2 min，自来水洗2～3 min，1%盐酸乙醇分化6 s，自来水返蓝20 min，伊红染色5 min。常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，干片后中性树胶封片，光学显微镜400倍下由高年资病理医师进行观察。②免疫组化CD31联合PAS双重染色：石蜡组织3 μm厚度切片，常规脱蜡至水，加入柠檬酸盐抗原修复液，高压锅加热修复3 min。自然冷却后PBS洗5 min×3次，3%H2O2室温孵育10 min，PBS洗3 min×3次。加入CD31即用型抗体37 ℃孵育1 h，PBS洗3 min×3次；加入快捷型酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物20 min，PBS洗3 min×3次。DAB显色试剂盒显色，显微镜下控色，蒸馏水终止染色，0.5%高碘酸氧化10 min；蒸馏水稍洗，Schiff氏液避光染色20 min，0.5%偏重亚硫酸钠滴洗2 min×2次；蒸馏水稍洗，苏木素复染细胞核，常规中性树胶封片，400倍光学显微镜下由高年资病理医师进行观察。VM判断标准:VM为CD31阴性的鼻咽癌细胞围成的管腔样结构，一些管腔内可见红细胞，其外层被PAS阳性物质(紫红色)围绕[10]。如管壁有CD31阳性的血管内皮细胞，且PAS染色阳性，则判定为内皮依赖性血管；PAS阳性而CD31阴性则判定为非内皮依赖性血管，即VM。

1.3 鼻咽癌组织VM阳性与患者临床病理参数的关系 收集观察组的临床资料(性别、年龄、组织类型、淋巴结转移)，并分析其与VM阳性的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。率的比较采用χ2检验。相关性分析采用Pearson相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组VM情况 ①HE染色：部分鼻咽癌组织中存在有癌细胞围绕的呈管腔样、网格样结构，内无血管内皮细胞被覆(见插页Ⅲ图5A)。②CD31和PAS双重染色：鼻咽癌组织中血管表现为CD31及PAS阳性；管腔样、网格样结构PAS阳性、CD31阴性，符合VM的染色表现，且存在VM的肿瘤区域很少出现坏死；一些CD31和PAS均阴性的网格样及管道样结构既不是血管也不属于VM表现(见插页Ⅲ图5B)。观察组中23例份(28.05%)存在VM，对照组中不存在VM，两组VM阳性率比较有统计学差异(P<0.01)。

2.2 VM与鼻咽癌患者临床病理参数的关系 VM与鼻咽癌患者的年龄、性别、组织类型均无关(P均>0.05)，而与淋巴结转移有关(P<0.01)，见表1。Pearson相关分析显示，VM阳性率与鼻咽癌患者淋巴结转移呈正相关(r=0.502，P<0.01)。

表1 VM与鼻咽癌患者临床病理参数的关系

3 讨论

鼻咽癌早期不具有特异性临床表现，因此确诊时患者往往处于中晚期。临床上70%以上的鼻咽癌患者以颈部肿大结节就诊，其特点是容易发生浸润和转移，局部复发和远处转移是其治疗失败的主要原因[10]。研究表明，VM在肿瘤的生长及转移过程中具有重要作用，肿瘤患者存在VM者生存期更短，并且比无VM者更容易发生转移；VM还能降低抗肿瘤血管生成药物的治疗效果[11]。因此，VM在肿瘤的生物学行为中可能具有重要的作用和意义。

本研究发现，鼻咽癌组织中有23例伤符合VM表现的管腔样、网格样结构，证实鼻咽癌组织中存在VM，且存在VM的肿瘤区域很少出现坏死，间接证实了VM是一种功能性循环结构。研究表明，VM不仅是肿瘤获得血供的一种方式，而且与肿瘤的临床分期、分级和肿瘤的转移、预后等均有一定相关性[5,7,9]。颈部淋巴结转移是鼻咽癌患者就诊的主要原因，淋巴结转移与鼻咽癌患者的临床分期及预后有直接关系[12]。本研究结果显示，VM与鼻咽癌患者的淋巴结转移呈正相关，而与患者的年龄、性别、组织类型均无关(本研究未探讨VM与鼻咽癌临床分期的关系，原因为Ⅲ期以上患者例数过少)。既往研究表明，鼻咽癌临床分期为Ⅰ期和Ⅱ期的患者VM阳性率比较无明显差异，且患者预后基本相同[12]。因此推测， VM现象的存在可能提示更高的鼻咽癌临床分期以及更差的预后，但尚待长期的随访及更大样本资料的支持。

综上所述，鼻咽癌组织中存在VM，且与淋巴结转移有关。本研究样本量较少，尚不足以形成足够的证据证明VM与患者的预后有关，但多项研究表明，VM主要存在于高度恶性和高转移能力的恶性肿瘤中[4～9]。因此，我们推测鼻咽癌组织中存在VM者更易发生淋巴结转移，且预后更差。

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范绍翀(E-mail: fansc32@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.20.036

R766.3

B

1002-266X(2016)20-0091-02

2015-08-03)