非洲淋巴细胞瘤病毒感染儿童体液免疫相关指标变化及意义

王宏立，倪金凤

(1毕节市第一人民医院，四川毕节551700；2唐山市妇幼保健院)

非洲淋巴细胞瘤病毒感染儿童体液免疫相关指标变化及意义

王宏立1，倪金凤2

(1毕节市第一人民医院，四川毕节551700；2唐山市妇幼保健院)

目的 探讨非洲淋巴细胞瘤病毒(EBV)感染儿童体液免疫相关指标变化及意义。方法 选取EBV感染儿童428例(观察组)，其中0～2岁92例、3～5岁281例、6～14岁55例；正常健康儿童428例(对照组)，其中0～2岁90例、3～5岁280例、6～14岁58例。两组均留取外周血，检测淋巴细胞总数、B淋巴细胞及其亚群百分比，B淋巴细胞活化因子(BAFF)及其受体(BR3)阳性表达细胞百分比，血清IgG、IgA、IgE及补体C3、C4水平。结果 观察组各年龄段患儿外周血CD19+总B细胞、CD19+CD38+抗体分泌细胞百分比，BAFF、BR3阳性表达细胞百分比，血清IgG、IgA及补体C3水平均明显低于对照组同年龄段者(P均<0.01)；其他指标组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 EBV感染患儿外周血B细胞、抗体分泌细胞、B淋巴细胞表面BAFF和BR3表达及血清IgG、IgA、补体C3水平均下降；体液免疫功能受损可能参与了EBV感染的发生。

非洲淋巴细胞瘤病毒；儿童；体液免疫；B淋巴细胞

非洲淋巴细胞瘤病毒(EBV)是一种疱疹病毒科γ亚科的DNA病毒。EBV感染可累及全身多个系统[1]，感染症状多样，且多不典型，早期诊断困难。儿童对EBV的易感性高[2]，感染后可表现为传染性单核细胞增多症(IM)、X-连锁淋巴组织增生性疾病(XLP)、慢性活动性EBV感染(CAEBV)、EBV感染相关噬血细胞淋巴组织细胞增多症(EBV-HLH)等， IM是其典型表现[3,4]。EBV感染的发病机制复杂，目前认为主要与细胞免疫有关。本研究探讨EBV感染儿童体液免疫相关指标变化及意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2011年3月～2014年6月毕节市第一人民医院儿科收治的EBV感染患儿428例(观察组)，均符合EBV诊断标准[5]；男221例，女207例；年龄8个月～14岁，其中0～2岁92例、3～5岁281例、6～14岁55例；临床表现：IM 183例，XLP 135例，CAEBV 23例，EBV-HLH 87例。选取同期在本院体检健康儿童428例作为对照组，男220例，女208例；年龄8个月～14岁，其中0～2岁90例、3～5岁280例、6～14岁58例。两组性别、年龄具有可比性。

1.2 相关指标观察 两组均于清晨抽取空腹静脉血10 mL(观察组取血时均未接受肾上腺皮质激素及免疫抑制剂等治疗)，分为两份，一份加入乙二胺四乙酸二钠抗凝，置于4 ℃冰箱保存，用于检测B淋巴细胞；另一份于37 ℃温箱放置1 h，置于4 ℃冰箱过夜，3 000 r/min离心10 min，收集上清置于4 ℃冰箱保存，用于免疫球蛋白及补体检测。

1.2.1 外周血淋巴细胞总数、B淋巴细胞及亚群百分比 取抗凝血标本，采用全自动细胞计数仪计数全血淋巴细胞总数。100 μL抗凝血标本中分别加入CD19单克隆抗体、CD25单克隆抗体、ECD-CD19、PECD20、FITC-CD27、PE-CD38及同型阴性对照IgG-FITC和IgG-PE各20 μL，4 ℃静置30 min，加红细胞裂解液，1 000 r/min离心10 min，PBS重悬，采用流式细胞仪计数B淋巴细胞总数及亚群百分比。淋巴细胞标记物：B淋巴细胞为CD19+，初始B淋巴细胞为CD19+CD20+CD27-，记忆性B淋巴细胞为CD19+CD20+CD27+，抗体分泌细胞为CD19+CD38+。

1.2.2 B淋巴细胞活化因子(BAFF)及其受体(BR3)检测 取抗凝血标本，分别加入B淋巴细胞活化因子FITC-BAFF及其受体PE-BR3、同型阴性对照，采用流式细胞仪计数BAFF、BR3阳性细胞百分比。具体步骤同1.2.1。

1.2.3 免疫球蛋白及补体检测 取血清标本，采用速率散射比浊法检测免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、IgE，采用ELISA法检测补体C3、C4。

2 结果

2.1 外周血淋巴细胞总数、B淋巴细胞及其亚群百分比 观察组各年龄段患儿外周血CD19+总B细胞、CD19+CD38+抗体分泌细胞百分比均较对照组同年龄段者降低(P均<0.01)。见表1。

2.2 外周血BAFF、BR3阳性细胞百分比 观察组各年龄段患儿外周血BAFF、BR3阳性细胞百分比均低于对照组同年龄段者(P均<0.01)。见表2。

表1 两组外周血淋巴细胞总数、B淋巴细胞及其亚群百分比比较±s)

注：与对照组同年龄段者比较，*P<0.01。

2.3 血清IgG、IgA、IgE和补体C3、C4观察组各年龄段患儿血清IgG、IgA、补体C3水平均较同年龄段对照组降低(P均<0.01)。见表3。

3 讨论

EBV是一种人类普遍感染的双链DNA疱疹病毒，人是EBV的惟一宿主，超过90%的人群感染过EBV，感染后可终身携带病毒造成潜伏感染[6]。

表2 两组BAFF、BR3阳性细胞百分比比较±s)

注：与对照组同年龄段比较，*P<0.01。

表3 两组血清IgG、IgA、IgE和补体C3、C4水平比较

注：与对照组同年龄段比较，*P<0.01。

EBV感染主要导致EBV侵袭性疾病和免疫性疾病，可涉及血液、肾脏、肝脏、呼吸道、淋巴结等器官系统[7]。此外，EBV感染还被认为与鼻咽癌、 淋巴瘤、 胃癌等多种肿瘤发生密切相关[8]。儿童对于EBV的易感性更高，流行病学调查显示，我国3～5岁儿童EBV VCA-Ig抗体的阳性检出率达90%以上。IM是儿童EBV感染典型表现，也是造成儿童EBV感染后长期发热的主要因素之一[9]。EBV感染患儿年龄越小临床表现越不典型，免疫力低者病死率较高。

EBV感染的发病机制复杂，目前认为主要与细胞免疫有关。EBV感染激发强烈的T淋巴细胞免疫反应，分泌炎性介质，导致T淋巴细胞分化异常，机体出现异常细胞免疫反应。因此认为，T细胞介导的免疫反应在EBV感染发生、发展过程中具有决定性作用[10]。成熟B细胞在EBV感染免疫中也具有不可忽视的作用。EBV首先感染口咽部的上皮细胞并在其内复制增殖，由于淋巴组织中B细胞具有EBV受体，因此受感染附近的B淋巴细胞是EBV侵袭的靶细胞，被感染的B细胞进入血液循环传递病毒抗原信息至全身其他部位，进而导致相应的全身性感染[11]。此外，EBV可终生潜伏在B细胞中无法被机体免疫系统完全清除，当机体免疫机能缺陷时，潜伏的EBV再次激活并大量复制，呈持续活动性状态，导致EBV感染的症状和体征持续存在或退而复现。

由于新生儿、儿童与成人B淋巴细胞水平有所区别，故本研究将EBV感染患儿及健康儿童按0～2岁、3～5岁和6～14岁年龄段分组。结果表明，三个年龄组EBV感染患儿与相应年龄段健康儿童外周血淋巴细胞总量及初始B细胞、记忆性B细胞比例比较均无统计学差异，而淋巴细胞总量、抗体分泌细胞比例均较相应年龄段健康儿童下降。提示EBV感染患儿的体液免疫功能受损，抗体产生受抑，EBV主要感染B淋巴细胞。

BAFF是表达于多种免疫细胞的Ⅱ型跨膜蛋白，BAFF在B 淋巴细胞的成熟、增殖、活化和发挥免疫功能过程中发挥重要作用。而BR3是BAFF的受体之一，能与BAFF结合从而维持B淋巴细胞的稳态及体液免疫平衡[12]。BAFF及BR3表达增加可在一定程度上增强B细胞的成熟、存活、增殖和分化等，维持B细胞稳态及体液免疫平衡[13]。本研究中0～2岁、3～5岁和6～14岁EBV感染患儿的外周血BAFF、BR3阳性表达细胞百分比均低于同年龄段健康儿童，提示EBV感染患儿B细胞活化功能受损。

作为EBV感染人体后的主要宿主细胞，B淋巴细胞被激活并转化为浆细胞，产生针对EBV特异性抗原分子的一系列抗体。一般情况下EBV感染后3天就可检测到抗体，1周后抗体量快速增加，并在2～3周达到顶峰，持续约7周，其中IgM起峰快但持续时间不如IgG。EBV特异性抗体主要包括抗壳抗原抗体(EBV-CA)、抗早期抗原抗体(EBV-EA)和抗核心抗原抗体(EBV-NA16)[14]。EBV感染首先产生的是EBV-CA IgM抗体及随后的EBV-CA IgG抗体，最后是EBV-EA抗体，而EBV-NA16抗体通常在EBV感染晚期产生。因此，检测EBV感染患者血清抗体类型，根据EBV感染期间产生不同抗体的特点可初步判断感染时期[15]。但机体的免疫反应复杂，相关抗原产生的抗体存在时间差异性，EBV感染存在持续性，故临床仅以某一时期血清抗体类型及水平诊断原发性EBV感染存在一定缺陷。本研究结果显示，观察组各年龄段患儿血清IgG、IgA和补体C3水平均低于对照组同年龄段者，但血清IgM、IgE和补体C4水平组间比较差异均无统计学意义。IgM和IgE主要出现在疾病的早期，而IgG和IgA在疾病发生、发展过程中持续存在，可反映机体体液免疫状况。进一步提示EBV感染患儿体液免疫受损。

综上所述，EBV感染患儿体液免疫功能受损，这可能是其发病的主要原因。

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倪金凤 (E-mail: 464941664@qq.com )

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1002-266X(2016)20-0070-03

2015-11-19)