Th17细胞在过敏性哮喘患者中的临床研究

刘子雯，申卫红

(无锡市第三人民医院检验科，江苏无锡 214041)

·临床研究·

Th17细胞在过敏性哮喘患者中的临床研究

刘子雯，申卫红

(无锡市第三人民医院检验科，江苏无锡 214041)

目的 探讨Th17细胞及其分泌的细胞因子白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)在过敏性哮喘患者外周血中的变化及临床意义。方法 选取过敏性哮喘患者和健康体检者各60例，选用流式细胞术检测外周血Th17细胞的百分率；ELISA法检测外周血培养上清液中IL-17和IL-10的表达；电化学发光法检测血清中IgE的含量。结果 哮喘组外周血Th17细胞比例、血清中IgE的含量及IL-17水平均高于健康对照组；而IL-10水平则低于健康对照组。结论 Th17细胞表达失衡可能在过敏性哮喘的发病机制中起重要作用。

Th17； 过敏性哮喘； 白细胞介素-17； 白细胞介素-10

过敏性哮喘是由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞参与的慢性气道炎症，在易感者中此种炎症可引起反复发作的喘息、气促、胸闷和(或)咳嗽等症状，多在夜间和(或)凌晨发生，气道对多种刺激因子反应性增高,其发病率在呼吸科患者中呈上升趋势。中国哮喘的患病率约为1%，儿童可达3%，据测算全国约有1千万以上哮喘患者。研究表明，Th17 细胞主要分泌细胞因子白细胞介素-17(IL-17)，是近年来发现的一类辅助性CD4+T细胞，在自身免疫性疾病、变态反应性疾病中发挥重要作用[1-3]。国外的许多研究表明，改变外周血中IL-17、白细胞介素-10(IL-10)的表达可以影响过敏性哮喘患者的炎症反应程度，从而参与哮喘的发生[4-5]。本研究主要通过检测过敏性哮喘患者外周血中Th17细胞比率及细胞因子IL-17、IL-10的表达水平，从而探讨其在过敏性哮喘患者发病机制中的意义及其严重程度的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年在无锡市第三人民医院呼吸科住院治疗的过敏性哮喘患者60例，其中男38例，女22例，平均(40.6±13.2)岁。本院健康体检者60例作为对照组，男35例，女25例，平均(29.4±9.7)岁,均为无过敏性疾病和呼吸道感染,近一个月内未使用其他药物等。

1.2 方法

1.2.1 外周血Th17淋巴细胞亚群的检测 分别抽取哮喘组和对照组静脉血各2 mL，分别加PE标记的抗人IL-17抗体各10 μL，室温避光孵育30 min。然后再加入红细胞裂解液，振荡混匀。离心后弃上清液，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后混匀，用流式细胞仪进行计数，获得Th17细胞的百分数。

1.2.2 外周血单个核细胞的分离 以聚蔗糖-泛影葡胺液分离过敏性哮喘患者和对照组外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)，PBS洗涤后以每孔(3～5)×105个细胞接种于24孔培养板，以含10%小牛血清的RPMI-1640培养基，于37 ℃、5%CO2的培养箱中培养，72 h后收集培养上清液，待检。

1.2.3 外周血细胞因子水平检测 细胞因子IL-17、IL-10的检测，采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒进行检测，严格按照试剂盒说明书进行检测。

1.2.4 血清IgE含量检测 所有实验者清晨空腹抽取静脉血4 mL，3 000 r/min离心10 min，分离出血浆待检。血清IgE定量测定采用电化学发光免疫分析法进行检验，操作严格按照仪器设定的程序进行测定。

2 结 果

2.1 外周血Th17淋巴细胞亚群的检测 通过流式细胞仪检测60例哮喘患者和健康者外周血中Th17淋巴细胞亚群的数量，结果表明：哮喘患者外周血中Th17细胞约占CD4+T细胞(5.04±1.02)%，明显高于健康对照组(1.90±0.57)%，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 过敏性哮喘患者外周血中Th17细胞亚群的检测

2.2 细胞因子IL-17、IL-10的表达 通过ELISA法分别检测哮喘组和对照组外周血细胞因子IL-17、IL-10的含量，结果表明：IL-17的含量哮喘组明显高于健康对照组，而IL-10的含量明显低于健康对照组，且差异具有统计学意义(P<0.05),结果见表2。

2.3 血清IgE含量的检测 通过电化学发光免疫分析仪检测哮喘组和对照组血清IgE的含量，结果表明：哮喘组患者空腹IgE的含量的含量(289.88±80.32)ng/mL，明显高于健康对照组(49.44±8.21)ng/mL，且差异具有统计学意义(P<0.05)，结果见表3。

表2 哮喘组外周血IL-17、IL-10表达量的比较(pg/mL)

表3 哮喘组空腹IgE含量的检测

3 讨 论

过敏性哮喘是由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞参与的慢性气道炎症，在易感者中此种炎症可引起反复发作的喘息、气促、胸闷和(或)咳嗽等症状，气道对多种刺激因子反应性增高。Th17细胞主要分泌IL-17，在过敏性哮喘中发挥重要作用[6-7]。国外有研究显示，通过给过敏性哮喘小鼠输入活化的Th17细胞，能够促进气道中性粒细胞性炎症。另有许多研究发现，在中重度过敏性哮喘患者外周血中Th17细胞及其分泌的IL-17的表达均增加[8-9]。因而，Th17细胞在哮喘的发病机制中发挥着重要作用，而其效应的发挥主要通过特征性细胞因子IL-17来完成。本研究结果也显示，在过敏性哮喘患者组中，细胞因子IL-17的表达也增加，这与国外的研究结果相一致。最近调节性T淋巴细胞成为免疫抑制治疗的研究重点，其主要通过分泌细胞因子IL-10来抑制免疫应答，从而发挥免疫耐受的作用。有研究显示，在IL-10表达减少的小鼠中对于过敏原诱导的哮喘炎症反应相应地增加。因此，IL-10表达减少可加重哮喘的发作，提示其在过敏性哮喘中起重要作用[10-12]。

近年来调控免疫反应的CD4+CD25+Treg细胞成为免疫抑制治疗的研究焦点。Treg特征性地表达转录因子FOXP3，可通过细胞间直接接触或分泌细胞因子IL-10等方式来抑制免疫应答，从而使机体产生免疫耐受。有研究显示，儿童过敏性哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg细胞明显减少，表明Th17/FOXP3表达失衡可能在儿童过敏性哮喘的发病机制中起重要作用。

本研究结果表明，过敏性哮喘组IL-17的表达以及血清中IgE的含量均高于健康对照组；而IL-10水平则低于健康对照组，提示Th17细胞和调节性T细胞共同参与过敏性哮喘的发病。在本研究中，过敏性哮喘组存在IL-17的表达增加而IL-10表达水平却减少的情况，提示其细胞水平Th17/CD4+CD25+Treg表达失衡可能在过敏性哮喘的发病机制中起重要作用。因此，本研究发现，Th17细胞以及IL-17、IL-10等细胞因子共同在过敏性哮喘的发病机制中起重要作用。临床上如能动态掌握其变化将有助于临床早期诊断和及时治疗。

[1]van Mierlo GJD,Scherer HU,Hameetman M,et al.Cutting Edge:TNFR-Shedding by CD4+CD25+Regulatory T Cells Inhibits the Induction of Inflammatory Mediators[J].J Immunol,2008,180(26):2747-2751.

[2]Albano GD,Di Sano C,Bonanno A,et al.Th17 immunity in children with allergic asthma and rhinitis:a pharmacological approach[J].PLoS One,2013,8(4):e588-592.

[3]Ramirez-Velazquez C,Castillo EC,Guido-Bayardo L,et al.IL-17-producing peripheral blood CD177+neutrophils increase in allergic asthmatic subjects[J].Allergy Asthma Clin Immunol,2013,9(1):23.

[4]Doe C,Bafadhel M,Siddiqui S,et al.Expression of the T helper 17-associated cytokines IL-17A and IL-17F in asthma and COPD[J].Chest,2010,138(5):1140-1147.

[5]Mays LE,Ammon-Treiber S,Mothes B,et al.Modified Foxp3 mRNA protects against asthma through an IL-10-dependent mechanism[J].J Clin Invest,2013,123(3):1216-1228.

[6]Togbe D,Fauconnier L,Madouri F,et al.Thymic Stromal Lymphopoietin Enhances Th2/Th22 and Reduces IL-17A in Protease-Allergen-Induced Airways Inflammation[J].ISRN Allergy,2013,2013(3):971036.

[7]Tsuji M,Kawamoto T,Koriyama C,et al.IL-22 mRNA expression in blood samples as a useful biomarker for assessing the adverse health effects of PCBs on allergic children[J].Int J Environ Res Public Health,2012,9(12):4321-4332.

[8]Wakashin H,Hirose K,Maezawa Y,et al.IL-23 and Th17 cells enhance Th2-cell-mediated eosinophilic airway inflammation in mice[J].Am J Respir Crit Care Med,2008,178(10):1023-1032.

[9]Bajoriuniene I,Malakauskas K,Lavinskiene S,et al.Response of peripheral blood Th17 cells to inhaled Dermatophagoides pteronyssinus in patients with allergic rhinitis and asthma[J].Lung,2012,190(5):487-495.

[10]Eusebio M,Kraszula L,Kupczyk M,et al.Low frequency of CD8+CD25+FOXP3(BRIGHT)T cells and FOXP3 mRNA expression in the peripheral blood of allergic asthma patients[J].J Biol Regul Homeost Agents,2012,26(2):211-220.

[11]Yalcin AD,Bisgin A,Gorczynski RM.IL-8,IL-10,TGF-β,and GCSF levels were increased in severe persistent allergic asthma patients with the anti-IgE treatment[J].Mediators Inflamm,2012(2012):720976.

[12]Albano GD,Di Sano C,Bonanno A,et al.Th17 immunity in children with allergic asthma and rhinitis:a pharmacological approach[J].PLoS One,2013,8(4):e58892.

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.057 文献标识码：A 文章编号：1673-4130(2016)07-0995-03

2015-10-28)