T2DM患者血清25-(OH)D与HCY、β2微球蛋白关系及临床意义

冯小娟，李海英，蒋 玲，秦继宝，安仲武，薄维波，刘 霞，刘书敏△

(1.连云港市东方医院检验科，江苏连云港 222042；2.连云港市第二人民医院检验科，江苏连云港 222042)

·论 著·

T2DM患者血清25-(OH)D与HCY、β2微球蛋白关系及临床意义

冯小娟1，李海英1，蒋 玲1，秦继宝1，安仲武1，薄维波1，刘 霞2，刘书敏1△

(1.连云港市东方医院检验科，江苏连云港 222042；2.连云港市第二人民医院检验科，江苏连云港 222042)

目的 本研究通过检测2型糖尿病(T2DM)患者血清25-羟维生素D[25-(OH)D] 和同型半胱氨酸(HCY)、β2微球蛋白(β2-MG)水平，探讨T2DM患者血清25-(OH)D和HCY、β2-MG关系及临床意义。方法 选择139例T2DM患者，根据尿清蛋白/肌酐(Alb/Cr)比值(UACR)分为正常Alb尿组(UACR<30 mg/gCr)45例，微量Alb尿组(UACR≥30且<300 mg/gCr)48例，大量Alb尿组(UACR≥300 mg/gCr)46例，选取45例体检健康者作为对照组。采用电化学发光法检测血清25-(OH)D水平，酶法测定血清HCY水平，胶乳增强免疫比浊法测定血清β2-MG水平，同时检测血糖(GLU)、糖化血红蛋白(HbA1C)、血肌酐(Cr)、血清钙(Ca2+)、磷(P5+)等生化指标。结果 DM患者血清25-(OH)D随着尿清蛋白的增加而降低，微量Alb尿组和大量Alb尿组血清25-(OH)D与正常Alb尿组和健康对照组比较明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)。微量Alb尿组和大量Alb尿组血清HCY、β2-MG水平较健康对照组均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 血清25-(OH)D水平随着尿蛋白的增加而降低，血清HCY、β2-MG水平随着尿蛋白的增加而增加，血清25-(OH)D水平与HCY、β2-MG呈负相关。

25.羟维生素D； 同型半胱氨酸； β2-微球蛋白； 2型糖尿病

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病严重的微血管并发症之一，因其高致残率与死亡率已成为继心血管病、肿瘤之后威胁人类健康的第三大非感染性疾病。Mao等[1]研究发现，在2型糖尿病(type 2 diabetic mellitus，T2DM)患者中，血清同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)水平与DN发展风险率和严重性密切相关。β2微球蛋白(β2-microglobulin，β2-MG)是一种微量蛋白，在正常情况下在尿液及血清中微量表达，肾脏病变时其水平会明显增加[2]。维生素D可通过减轻胰岛素抵抗、促进胰岛细胞分泌胰岛素、增加胰岛素敏感性等途径来改善T2DM患者血糖水平，同时作为抑炎因子通过抑制炎性反应来保护肾脏，从而有效地延缓DN的发展。本文通过检测T2DM患者血清[25-(OH)D]和HCY、β2-MG水平变化，探讨T2DM患者血清[25-(OH)D]和HCY、β2-MG关系及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2014年10月至2015年5月连云港市东方医院内分泌科T2DM患者，排除原发性肾病、肝病、非糖尿病其他内分泌病、糖尿病急性并发症、原发性骨质疏松、肿瘤、自身免疫性疾病、感染、服用影响骨代谢药物等患者。以尿清蛋白/肌酐(Alb/Cr)比值(UACR)作为尿Alb排泄异常的指标，将T2DM患者分为3组，UACR<30 mg/g Cr 48例(正常Alb尿组)，男23例，女25例，年龄(58.8±12.0)岁；UACR 30～<300 mg/g Cr 46例(微量Alb尿组)，男24例，女22例，年龄(62.6±12.6)岁；UACR≥300 mg/g Cr 45例(大量Alb尿组)，男23例，女22例，平均年龄(62.0±11.2)岁；选择本院同期体检健康者45例作为健康对照组，男24例，女21例，年龄(58.8±11.4)岁。

1.2 仪器与试剂 血清[25-(OH)D]水平测定采用Roche电化学发光分析仪及配套试剂。血清HCY、β2-MG水平测定仪器采用西门子Dimension RXL Max全自动生化分析仪。酶法测定HCY，采用仪器原装试剂；胶乳增强免疫比浊法测定β2-MG。宁波美康生物科技股份有限公司提供试剂及其配套的定标液和质控品。

1.3 方法 标本采集：采集所有研究对象空腹静脉血5 mL和2 mL分别于分离胶管和EDTA-K2抗凝采血管，分离胶管标本放置室温20 min待血液凝固，3 000 r/min离心10 min分离血清于-20 ℃低温冰箱保存，用于检测25-(OH)D和HCY、β2-MG水平，血糖(GLU)、血肌酐(Cr)等生化指标。EDTA-K2抗凝血标本用于检测糖化血红蛋白(HbA1C)。同时留取晨尿测定尿Alb和Cr，计算UACR(Alb/Cr)。血清标本检测前处理：检测前将所有标本从-20 ℃低温冰箱取出，置37 ℃水浴箱快速复融，将所有标本于离心机3 000 r/min离心10 min后(避免其他蛋白的干扰)，吸取上清液检测血清[25-(OH)D]和HCY、β2-MG水平，检测前所有仪器用定标液进行定标，检测质控品，将仪器调整至最佳状态。

2 结 果

2.1 T2DM患者尿Alb含量随着病程增加而增加，差异有统计学意义(P<0.01)；3组患者GLU、HbA1c与健康对照组比较显著升高(P<0.01)；大量Alb尿组患者血清Cr与健康对照组比较明显升高(P<0.01)；大量Alb尿组患者血清Ca2+与健康对照组比较明显降低(P<0.01)，而血清P5+明显升高(P<0.01)，见表1。

2.2 正常Alb尿组、微量Alb尿组和大量Alb尿组血清25-(OH)D依次降低，差异有统计学意义(P<0.01)，微量Alb尿组和大量Alb尿组血清25-(OH)D与正常Alb尿组和健康对照组比较明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)。微量Alb尿组和大量Alb尿组血清HCY、β2-MG较健康对照组均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表1 T2DM患者与健康对照组的临床资料

#：P<0.01,与正常Alb尿组比较；*：P<0.05，**：P<0.01,与健康对照组比较。

表2 T2DM患者血清[25-(OH)D]、HCY、β2-MG测定结果

*：P<0.05，**：P<0.01，与健康对照组比较；#：P<0.05，与正常Alb尿组比较；△：P<0.01,与大量Alb尿组比较。

3 讨 论

近年研究发现维生素D缺乏是慢性肾脏病患者的突出特征[3]。本文研究显示，T2DM患者正常Alb尿组、微量Alb尿组和大量Alb尿组血清25-(OH)D依次降低，差异有统计学意义(P<0.01)，微量Alb尿组和大量Alb尿组血清25-(OH)D与正常Alb尿组和健康对照组比较明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)。进一步证实维生素D缺乏的现实状况，并且尿蛋白量越大，维生素D缺乏越严重。维生素D缺乏不仅可以加重胰岛素抵抗、使胰岛β细胞功能紊乱，而且可以增加糖尿病血管并发症的发病率。而肾脏损伤病变也使得维生素D的吸收水平较健康者差，排泄增多，更加重了维生素D的缺乏。杨烨等[4]研究发现，活性维生素D3可通过抑制糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)对糖尿病大鼠肾脏损伤有预防保护作用。另外，补充维生素D可减轻胰岛素抵抗，保护胰岛β细胞，控制T2DM患者血糖水平，间接保护肾脏。

HCY是蛋氨酸代谢的中间产物，是动脉粥样硬化重要的潜在致病因素[5]。大量的研究表明高HCY血症可以损伤血管内皮，在DN的发生、发展中可能发挥了一定的作用[6]。本文结果显示，微量Alb尿组和大量Alb尿组血清HCY较健康对照组均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，且大量Alb尿组HCY水平较微量Alb尿组和正常Alb尿组明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)。表明在糖尿病并发肾脏轻微损伤时HCY就已明显升高。Tomislav等[7]研究发现，1型糖尿病患者蛋白尿和eGFR正常时，血浆HCY就与视网膜病变独立相关，进一步证实了HCY的内皮损伤作用。姚立腾等[8]认为高HCY血症可以作为一种内源性致病因素，在DN的发展中发挥了一定的作用，具体的作用机制有待进一步研究。

β2-MG是人白细胞组织相容性抗原(HLA)的轻链，由100个氨基酸残基组成的单链多肽，属于低分子蛋白质，相对分子质量约为12×103[9]。β2-MG能自由通过肾小球滤过膜，由肾小球滤过的β2-MG经肾小管时几乎全部被重吸收，如果β2-MG排出增高，则说明肾小管重吸收功能障碍。因此，β2-MG检测可作为衡量糖尿病患者轻度肾损伤的一项简便而又敏感的方法。但是β2-MG易受炎症、肿瘤、免疫等多种因素影响而升高，特异度较差。微量Alb尿组和大量Alb尿组血清β2-MG较健康对照组均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，大量Alb尿组β2-MG水平较微量Alb尿组和正常Alb尿组明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)，说明微量Alb尿组和大量Alb尿组的肾损伤程度逐渐加重。综合比较，β2-MG水平在DN患者的肾损伤反映程度上，具有一定的参考价值。

25-(OH)D是体内维生素D最主要的存在形式，包括25羟维生素D2和25.羟维生素D3。肾脏病变时可能会影响维生素D的代谢，也有研究提示糖尿病患者的维生素D缺乏与DN独立相关[10]。本文结果显示，正常Alb尿组、微量Alb尿组和大量Alb尿组血清25-(OH)D依次降低，差异有统计学意义(P<0.01)。结果表明，肾脏损伤越严重，25-(OH)D水平越低，具体是肾脏损伤导致25-(OH)D水平降低还是25-(OH)D水平降低导致肾脏损伤，尚需进一步研究。

刘会苗等[11]研究，血清25-(OH)D与β2-MG的水平呈负相关。微量Alb尿组和大量Alb尿组血清HCY、β2-MG较健康对照组均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结果表明，蛋白排泄量越大，肾功能损伤越严重，血清HCY、β2-MG水平越高，血清25-(OH)D水平越低，血清HCY、β2-MG水平对于肾脏损伤的评估起到了一定的作用。维生素D具有改善血糖水平、保护肾脏的功能，如早期给予糖尿病患者维生素D的补充，对减缓DN的发展将有很大的临床意义。

[1]Mao S,Xiang W,Huang SM,et al.Association between homocysteine status and the risk of nephropathy in type 2 diabetes mellitus[J].Clinica Chimica Acta,2014,431(2):206-210.

[2]谢能轩,熊志泉,郑丽梅，等．血清胱抑素C和β2-微球蛋白在糖尿病肾病诊断中的临床意义[J].中国实验诊断学，2012，16(3)：441-443．

[3]ChauYY,Kumar J.Vitamin D in chronic kidney disease[J].Indian J Pediatr,2012,79(8):1062-1068.

[4]杨烨，张园园，田燕燕，等.活性维生素D3对糖尿病肾病大鼠转化生长因子β1及相关因子的调节作用[J].中华内分泌代谢杂志，2015,31(1):66-70.

[5]Arduino A,Richard J.Homocysteine and cardiovascular risk[J].Am Coil Cardiol，2011,58(10):1034-1035.

[6]刘小林.2型糖尿病患者血浆同型半胱氨酸检测的临床意义[J].临床输血与检验，2010，12(1)：41-43.

[7]Tomislav B,Kristina B,Lea D.Plasma homocysteine is associated with retinopathy in type 1 diabetic patients in the absence of nephropathy[J].Seminars in Ophthalmology,Early Online,2014，28(1):1-5.

[8]姚立腾，王锦驹.血清胱抑素C和视黄醇结合蛋白联合检测在糖尿病肾病临床诊断中的价值[J].国际检验医学杂志,2010,31(5):440-441.

[9] 潘盛榕．血清胱抑素C与β2微球蛋白联合检测对糖尿病肾病的诊断意义[J]．广州医药，2012,43(1):49-50.

[10]Diaz VA，Mainous AG 3rd，Carek PJ，et al．The association of vitamin D deficiency and insufficiency with diabetic nephropathy：implications for health disparities[J].Am Board Fam Med，2009，22(5)：521-527．

[11]刘会苗,秦贵军,余勤，等.2型糖尿病肾病患者血清25-羟维生素D3的变化及意义[J]．中华内分泌代谢杂志，2011,27(12):1002-1003.

Relationship between serum 25-hydroxy vitamin D with HCY and β2-microglobulin in patients with T2DM and its clinical significance

FengXiaojuan1,LiHaiying1,JiangLing1,,QinJibao1△，AnZhongwu1,BoWeibo1,LiuXia2,LiuShumin1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,LianyungangMunicipalOrientalHospital,Lianyungang,Jiangsu222042,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,LianyungangMunicipaSecondPeople′sHospital,Lianyungang,Jiangsu222042,China)

Objective To detect the serum levels of 25-hydroxy vitamin D[25-(OH)D]，homocysteine(HCY) and β2-microglobulin(β2-MG) in the patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM) and to investigate the relationship between serum HCY and β2-MG with 25-(OH)D and its clinical significance.Methods A total of 139 cases of T2DM were selected anddivided into 3 groups,the normal albuminuria group for[urinary albumin to creatinine ratio (UACR)<30 mg/gCr,45 cases],microalbuminuria group (UACR ≥ 30 mg/gCr and < 300 mg/gCr,48 cases) and massive proteinuria group (UACR ≥ 300 mg/gCr,46 cases) according to the urinary albumin to creatinine ratio (UACR).Other 45 individuals undergoing the physical examination were selected as the control group.The serum 25-(OH)D level was measured by electrochemiluminescence.Serum HCY level was determined by the enzymatic method.Serum β2-MG level was measured by the latex enhanced immune turbidity method.At the same time,the biochemical indicators of FBG,HbA1C,serum calcium and phosphorus were measured.Results The serum 25-(OH)D level was decreased with the increase of urinary albumin in the DM patients.And the serum 25-(OH)D level in the microalbuminuria group and the massive proteinuria group was significantly decreased compared with the normal albuminuria group and the control group,the difference was statistically significant(P<0.01).The serum HCY and β2-MG levels in the microalbuminuria group and the massive proteinuria group were significantly increased compared with the healthy control group,the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion The serum 25-(OH)D level is decreased with the increase of urinary albumin in the diabetic patients.The serum HCY and β2-MG levels are increased with the increase of urinary albumin and serum 25-(OH)D level is negatively correlated with the HCY and β2-MG levels.

25-hydroxy vitamin D; homocysteine; β2-microglobulin; type 2 diabetes mellitus

冯小娟，女，主管检验技师，主要从事糖尿病肾病的临床生化研究。△通讯作者,E-mail:15261379935@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.017 文献标识码：A 文章编号：1673-4130(2016)07-0912-03

2015-10-28)