孕晚期肌肉注射HBIG与新生儿及产后乳汁HBV-DNA含量相关性分析*

米永华，黎 洋

(重庆医科大学附属永川医院检验科 402160)

·论 著·

孕晚期肌肉注射HBIG与新生儿及产后乳汁HBV-DNA含量相关性分析*

米永华，黎 洋△

(重庆医科大学附属永川医院检验科 402160)

目的 通过对孕产妇各个时期注射高效价乙肝免疫球蛋白(HBIG)后血清及乳汁中HBV DNA含量的分析、比较，为乙肝携带者孕产妇的乙肝病毒的母婴阻断及产后母乳喂养方案提供实验依据。方法 选取2012年6月至2014年6月在该院产科门诊进行产前检查HBsAg(+)的乙肝携带者孕妇140例，根据自愿、保密的原则，分为研究组和对照组，其中研究组75例于孕期 28、 32、 36 周进行肌注高效价 HBIG 200 U，对照组65例中的孕产妇由于各种原因在孕期未进行HBIG注射。分别于注射前、分娩前检测两组血清中HBV DNA含量、分娩后对新生儿血清及3～5 d内乳汁进行HBV DNA含量检测，分析两组的差异及相关性。结果 注射HBIG前研究组HBV DNA含量<500 copies/mL、500-1×106copies/mL、>1×106copies/mL分别为：28例、17例、30例，产前分别为：35例、20例、20例；对照组产前2次检测为：19例、21例、25例及20例、17例、28例；在研究组与对照组中新生儿血清 HBV DNA 阳性分别为：1例(5.3%)及5例(7.7%)；在两组乳汁中HBV DNA阳性分别为：3例(4%)和8例(12.3%)。结论 乙肝携带者孕妇在孕晚期进行HBIG的注射可能影响其乙肝病毒的复制进而减少新生儿宫内感染的概率，同时降低其产后乳汁的HBV DNA的阳性率。

HBV DNA； 母乳喂养； 母婴传播； 乙肝病毒携带者； 乙肝免疫球蛋白

乙肝病毒(HBV)感染是当前较为严重的世界健康问题，我国是一个HBV感染的高发区，在人群中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)携带者，有40%～50%是通过母婴垂直传播被动感染的。因此，如何减少我国乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)携带者数量，切实有效的措施就是减少母体血液、乳汁中HBV的含量，切断母婴传播途径，减少围生期新生儿被感染率。对于乙肝携带者孕晚期注射乙肝免疫球蛋白(HBIG)阻断HBV宫内感染的效果和产后母乳喂养会否传染 HBV仍存在一定的争议[1-5]，本文采用荧光定量 PCR技术检测乙型肝炎病毒携带孕产妇血清、乳汁及新生儿血清中 HBV DNA含量，分析孕产妇在经过HBIG阻断或者未经处理后其不同时期的血清中HBV DNA浓度含量，以及对乳汁和新生儿血清HBV DNA浓度的影响，为乙肝病毒携带者孕晚期的处理和产后母乳喂养提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年6月至2014年6月间在本院产科门诊行孕期产前检查的乙型病毒性肝炎病毒携带产妇140例，其平均年龄27.2岁，最大42岁，最小20岁。根据自愿、保密原则分为研究组和对照组，其中研究组分别在孕期28、32、36周给予高效价HBIG肌肉注射200 U，非用药组不采取治疗措施。两组均按照孕妇产前保健手册按时到医院进行孕期各项检查。

1.2 标本采集方式 血清：所有研究对象于孕期12周、产前分别采集空腹静脉抗凝血标本2 mL，新生儿出生后 24 h 内乙肝被动-主动免疫前股静脉采集标本，所有标本均在 2 h 内分离，待检。乳汁：于产妇分娩后3～5 d内乳房局部清洗消毒后用一次性无菌容器采取乳汁1～2 mL，将乳汁3 000 r/min弃上层脂肪，取中层乳清进行乳汁HBV DNA检测(检测方法同血液标本)。

1.3 HBV DNA荧光定量PCR检测 仪器：上海宏石SLAN6.0，试剂:乙型肝炎病毒核酸定量测定试剂盒(PCR-荧光探针法)

1.3.1 试剂准备 取出试剂，衡温，备用。根据待测样本、阴阳性对照以及定量参考品A-D，按比例取相应量的反应液、酶混合液及内标，充分混合成PCR-mix,瞬时离心后备用。

1.3.2 样本处理 在反应管中加入核酸释放剂5 μL，然后分别加入待测样本、阴阳性对照以及定量参考品A-D各5 μL,混匀。10 min后，加入PCR-mix 40 μL，2 000 r/min离心30 s。

1.3.3 PCR扩增 将PCR反应管放入扩增样品槽，按对应顺序设置阴阳性对照、定量参考品A-D及未知样本，并设置样本名称定量参考浓度，选择荧光检测通道，设定循环参数。

1.3.4 结果分析 反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以及Threshold值，进行分析，得出结果。

1.4 统计学处理 所有实验数据都应用SPSS19.0统计软件包进行统计学处理、分析，计量资料用t检验，计数资料以χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 在表1中可见研究组在孕期28、32、36周给予高效价HBIG肌肉注射200 U后血清中HBV-DNA含量较以前有所下降，但是P>0.05，无统计学意义，对照组中各组的HBV-DNA含量差异无统计意义(P>0.05)。表明对于乙肝携带者孕产妇在孕期给予高效价HBIG肌肉注射对于降低血清中HBV-DNA含量无明显意义。

表1 孕妇产前HBV DNA检测变化情况

2.2 表2可见研究中初乳及新生儿HBV DNA阳性占4%和5.3%，对照组占12.3%和7.7%。两组中对照组较研究组有明显差异(P<0.05)，表明在孕晚期给予高效价HBIG肌肉注射可能对于减少新生儿宫内感染率及产后初乳的HBV DNA阳性率有一定的意义。

表2 产妇初乳及新生儿血清中HBV DNA

*：P<0.05，与研究组比较。

3 讨 论

HBV感染的最主要的传播途径是母婴垂直传播，其中传播的方式主要有：产前宫内感染、 分娩时传播(产道感染)及产后水平传播(产后感染)。马静等[6]研究发现血清中高浓度的HBV DNA含量将直接影响其产前宫内感染率。因此，在此环节需降低孕妇HBV DNA含量从而控制新生儿发生宫内感染，本研究中观察不同浓度血清HBV DNA含量孕妇给予高效价HBIG肌肉注射后其HBV DNA浓度较注射之前有所下降，但差异无统计学意义，对于新生儿HBV-DNA阳性率统计中发现研究组明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。因此，对于有条件的家庭来说，笔者建议在孕期给予高效价HBIG肌肉注射，其可能对于减少其宫内感染有一定的作用。产道感染大部分是由于分娩时胎盘剥离，母血通过脐静脉进入胎儿体内，还有一些是胎儿经过产道时，皮肤擦伤而接触了母血受到感染。对于此种感染方式的预防需要产科医师密切配合。产后感染途径只要是食物传播，对于新生儿来说，就是母乳传播以及密切接触。总所周知，母乳是婴儿成长最理想的营养品,它富含水、 优质蛋白、不饱和脂肪酸、 乳糖、 矿物质及维生素,以及免疫球蛋白,有益于婴儿生长发育,国家大力提倡母乳喂养，但是对 HBsAg阳性产妇可否采用母乳喂养尚无统一意见[7-8],对于检查产妇初乳中HBV DNA含量，是指导新生儿喂养方式的一个较为科学的办法，血液中的 HBV主要来源于肝脏，而乳汁中的 HBV 主要来源于血液。当乳汁中含有高浓度的HBV DNA时，婴儿吸吮母乳时也将吸入含有HBV-DNA的血液。因此，但当新生儿口腔、 咽喉、 食道、 胃肠黏膜等处有破损、 溃疡时，HBV 就可能通过毛细血管进入血液循环而引起其感染。本研究中发现在孕期注射高效价HBIG组中，产后乳汁中HBV DNA阳性率明显下降，这也为新生儿进行母乳喂养提供理论依据。

综上所述，在对于乙肝携带者孕妇在孕晚期进行规律的高效价HBIG肌肉注射，可能降低新生儿宫内感染率及初乳中HBV DNA阳性率，从而降低新生儿感染HBV的概率并为其母乳喂养提供理论依据。

[1]韩忠厚，钟连华，王佳，等．妊娠晚期孕妇注射乙型肝炎免疫球蛋白对其血清HBV DNA及新生儿抗HBs的影响[J]．中华内科杂志，2007，46(5)：376-378．

[2]YuanJ，LinJ，XuA，etal．Antepartumimmun-

opmphilaxis ofthree doses of hepatitis B immuno-globulin not effective：asingle-centre randomized study[J]．J Viral Hepat，2006，13(9)：597-604．

[3]Emilio P．Lamivudine for chronic hepatitis B：a briefreview[J]．Braz J Infect Dis，2008，12(5)：356-367．

[4]中华医学会肝病学会感染病学分会．慢性乙型肝炎防治指南[J]．中华肝脏病杂志，2005，13(12)：881-891．

[5]Hill JB，Sheffield JS，Kim MJ，et al．Risk of hepatitis btransmission in breast-fed infants of chronic hepatitis bcarriers[J]．Obstet Gynecol，2002，99(6)：1049-1054．

[6]马静，隋景玉，白宝敏，等.孕妇血清 HBV DNA 含量在母婴传播中的意义[J].实用全科医学，2007,5(5)：395-396.

[7]黄霞,杨文东,等.HBV-DNA阳性孕妇产后脐带血及乳汁中HBV DNA载量分析[J].河南预防医学杂志,2012,24(4):252-254.

[8]彭其才，许成芳，等.产妇血清中HBV DNA含量对乳汁和血清中HBV-DNA浓度的影响[J].中山大学学报：医学版，2010,31(2)：158-160.

Analysis on correlation between intramuscular HBIG in late pregnancy with neonatal and postnatal milk HBV DNA content*

MiYonghua,LiYang△

(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedYongchuanHospital,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing402160,China)

Objective To analyze and compare the HBV DNA contents in serum and breast milk after injection of hepatitis B immunoglobulin (HBIG) in different periods of pregnant and lying-in women to provide the experimental basis for blocking the maternal-neonatal transmission(PMTCT) and breast feeding scheme.Methods 140 pregnant women carrying hepatitis B virus with HBsAg(+) by antenatal examination in the obstetric outpatient department of our hospital from June 2012 to June 2014 were selected and divided into the research group and the control group according to the voluntary and secretive principle.Among them,75 cases in the research group were intramuscularly injected by high titer HBIG 200 U at 28,32,36 weeks of pregnancy,while 65 cases in the control group were injected by HBIG at the end of pregnancy due to different causes.Serum HBV-DNA content before injection and before delivery was detected in the two groups,and which in neonatal serum and breast milk within 3-5 d also detected.The differences and correlation between the two groups were analyzed.Results The HBV-DNA content <500 copies/mL，500-1×106copies/mL，>1×106copies/mL before HBIG injection in the research group were 28 cases，17 cases，30 cases respectively,which before delivery were 35 cases，20 cases，20 cases respectively; which in antenatal twice detection in the control group were 19 cases，21 cases，25 cases and 20 cases，17 cases，28 cases respectively;neonatal serum HBV-DNA positive in the research group and control group had 1 case(5.3%) and 5 cases (7.7%) respectively；the breast milk HBV-DNA positive in the two groups had 3 cases(4%)/ and 8 cases(12.3%) respectively.Conclusion HBIG injection at late pregnancy in the pregnant women carrying HBV could influence the HBV replication,thus reduces the probability of neonatal intrauterine infection,at the same time reduces the HBV-DNA positive rate of postpartum breast milk.

HBV-DNA； milk breast； maternal-neonatal transmission； hepatitis B virus carriers； hepatitis B immune globulin

永川市科委基金资助项目(2012BE5022)。

米永华,女，主管技师，主要从事肿瘤诊断方法学研究。

△，E-mail：iamliyang@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.005 文献标识码：A 文章编号：1673-4130(2016)07-0878-03

2015-11-18)