玉簪白绢病菌最适培养基的筛选

刘智会，邓小芳，许晓明

(长春市园林植物保护站，长春130022)



玉簪白绢病菌最适培养基的筛选

刘智会，邓小芳，许晓明

(长春市园林植物保护站，长春130022)

摘要：采用了从不同采集地得到的3个玉簪白绢病菌株，选用了5种常见培养基，对3个白绢病菌株进行培养。实验结果表明，所有供试菌株在5种培养基上均能生长、产核。但是菌丝生长与产核量存在差异，3个菌株在PDA、玉米粉琼胶培养基和燕麦片琼胶培养基上均生长良好，以PDA最佳，营养琼胶培养基上生长最差；平均产核量以PDA上最多；故得出，PDA为最适培养基。且菌株之间的在菌丝生长和产核量方面也存在差异，具体表现为Y1>Y3>Y2，菌丝生长与产核量成正相关关系。

关键词：玉簪；白绢病菌株；菌丝生长；产核量；最适培养基

玉簪是玉簪属(Hosta)植物的统称，属百合科(Liliaceae)多年生宿根草本植物，主要分布在东北亚的温带与亚热带地区，如中国、日本、朝鲜及苏联的远东地区[1]。玉簪属名从1712年开始进行简单分类，经过多次更改确认，直到1905年Hosta才成为合法属名。目前美国玉簪协会及国际登陆以专著《The Genus Hosta》(1991)为基准[2]Schmid在研究新资料的前提下将玉簪属分3个亚属10个组，共43种，而中国有4种。目前，世界已命名的玉簪品种多达4000种，每年还有许多新的优良品种培育出来[3-4]。玉簪以品种繁多、花叶观赏俱佳、抗逆性强，深受人们的喜爱，至20世纪末成为世界销量第一的草本花卉[5-6]。另外，玉簪全株均可入药，主要具有清热、解毒、止血、止咳等功效。

玉簪在生长过程中极易遭受病原菌的危害，使叶片出现大片枯黄，影响开花观赏甚至发生茎基部腐烂引起整株死亡。其中发生最普遍最常见造成危害最严重的要属玉簪白绢病，发生面积大，危害时期长，危害程度严重，常常对玉簪的叶片造成极为严重的危害，影响观赏效果，常常是整个生长季，大片的玉簪都是遍地枯黄，只留一株株花蕊独立，而且不易防治。本文选用了从长春市区的御花园、胜利公园、杏花邨3处采集到的玉簪白绢病的病株，通过菌株分离纯化得到的3个白绢病原菌菌株。由于白绢病在三处所表现的致病力不同，所以为了更深入了解玉簪白绢病的生物学特性，更好的防治白绢病在玉簪上的发生及有效的防治，现在实验室条件下，选取5种不同培养基，进行培养，选出最适合玉簪白绢病菌株菌丝生长、更利于菌核产生的培养基。通过观察其对菌丝生长及产核量的影响，明确不同营养条件对玉簪白绢病菌株是否存在影响以及不同来源的菌株之间是否存在差异。

1材料与方法

1.1试验材料

供试的3个菌株分别来自长春市的御花园、胜利公园、杏花邨三个公园，将在3处采集到的带病植株进行病原菌组织分离、纯化得到3个玉簪白绢病病原菌，并采用常规方法将其在PDA培养基上进行培养[2]，得到相应菌株，编号分别为Y1、Y2、Y3，放于4℃的冰箱中保存。

1.2试验方法

供试培养基供试培养基为PDA、营养琼脂培养基、寄主叶片培养基、玉米粉琼胶培养基、燕麦片琼胶培养基，配方如下[6-8]。马铃薯葡萄糖培养基(PDA)：葡萄糖20.0g、马铃薯200.0g、琼脂20.0g、蒸馏水1000mL；营养琼脂培养基：蛋白胨10g、氯化钠5g、牛肉膏粉3g、琼脂15g、蒸馏水1000mL；寄主汁液(加葡萄糖)培养基：寄主叶10.0g、琼脂20.0g、葡萄糖20.0g、蒸馏水1000mL；玉米粉琼脂培养基：玉米粉30.0g、琼脂20.0g、蒸馏水1000mL；燕麦片琼脂培养基：燕麦片30.0g、琼脂20.0g、蒸馏水1000mL；将上述培养基高温灭菌后，取10mL倒入培养皿内，冷却后，接入5mm菌块，每个处理3次重复，25℃下培养，3d后测量菌落直径，并在无菌室拍照[8]。菌落在测量直径后继续培养10d，开始观察，35d后统计菌核产量。

2结果与分析

图1　供试菌株在各个培养基上的生长状况

图2　供试菌株在各个培养基上的产核状况(第21d)

培养基名称菌株编号菌落平均直径/mm菌丝生长状况平均产核量/个营养琼脂培养基Y1Y2Y326.323.622.7******1321511玉簪叶片培养基Y1Y2Y34034.633**********402420玉米粉琼胶培养基Y1Y2Y343.34139************1644882燕麦片琼胶培养基Y1Y2Y340.838.838.6************675252PDAY1Y2Y3454440************24464136

备注：“**”，生长差，“***”生长良好，“****”生长特别好。

2.13个菌株在5种培养基菌丝生长情况

从图1和表1可以看出，3个供试菌株在5种培养基上均能生长，但生长速度存在一定差异，以PDA、玉米粉琼胶培养基和燕麦片琼胶培养基最佳，营养琼胶培养基上生长最差。其中，菌丝生长最好的是在PDA培养基上，菌丝不但生长速度快，而且菌丝粗壮、浓密；其次是玉米粉琼胶培养基和燕麦片琼胶培养基，3天后菌丝也几乎长满整个培养基表面，但是菌丝与PDA上的比较，较为稀薄，纤细。3个供试菌株在营养琼胶培养基上生长都很缓慢，只有PDA上平均生长直径的一半。而且在5种培养基上，3个菌株之间的生长状况也有明显差异，Y1>Y3>Y2。Y1生长状况最好，其次是Y3，Y2最差。

2.23个菌株在5种培养基上的产核情况

从表1、图2可以看出来，3个供试菌株在5种培养基上均能够产生菌核尤其是PDA培养基，所有供试菌株产核的数量最多，菌核也最大；同时在产生菌核的时间上也有显著差异。燕麦片琼胶培养基最先产生菌核，是在接种后的第10天产生，且菌核分散、大小也极其均匀；然后依次是PDA培养基，第11天产核，菌核密集，个别菌核极大，颜色深，成熟度好，但是大小不均；玉米粉琼胶培养基第12天产核，且菌核分散、大小也较均匀；寄主汁液培养基第13天产核，菌核分散、大小均匀，颜色深，但是数量最少；营养琼胶培养基最后产生菌核，是在培养21天后，产生菌核,整个培养基表面布满气生菌丝，但不产生菌核，即使产生极少的菌核，菌核也极小，颜色很浅，直至第35天菌核才接近成熟，可以清洗统计。所以，无论是产核时间还是产核数量都是PDA最佳，而且菌核较大，成熟快。

实验中还发现在产核能力方面，3个菌株之间的也存在显著差异。从产核总数来看Y1(647个)>Y3(301)>Y2(203)。尤其在营养琼胶培养基上Y1产核数为132个，而Y2为15，Y3则为11个，菌核数量相差最大；差异最小的是燕麦片琼胶培养基Y1产核数为67个，Y2、Y3则均为52个。

3结论

玉簪是目前园林绿化上比较常用的宿根花卉，广泛用于各个庭院、绿地。而玉簪的白绢病是目前危害较重的常见病害，且不易防治，给园林养护工作带来极大困扰。鉴于园林花卉的特性，各地白绢病发生情况也不同，故本实验采集不同发病地点病株通过分离纯化得到的菌株，以探知其致病力的强弱，并筛选出最适合的培养基，为以后的深入实验做好基础，也有助于对该病害的进一步研究。实验结果表明，3个供试菌株均能在5种培养基上生长且产核，只是菌丝生长与产核量存在差异。除营养琼胶培养基菌丝生长较差外，供试菌株均能在PDA、玉米粉琼胶培养基、燕麦片琼胶3种培养基快速、良好，以PDA最佳，菌丝浓密、粗壮，生长速度最快；供试菌株在PDA上平均产核量最多。而且所选用的5种常用的培养基中，PDA培养基成本低廉最易取得，制作也很简单。故综合来看，PDA才是最适合玉簪白绢病菌培养的培养基。

同时，我们在实验中通过比较实验数据发现3个菌株的在菌丝生长和产核量方面存在显著差异，证明3个菌株之间的致病力存在较大差异，以Y1最强，其次是Y3、Y2，即，Y1>Y3>Y2，而且，在同一培养基上，一般来说，菌丝生长越好的，产核也越多。

参考文献

[1]傅立国，陈潭清．中国高等植物[M]．13卷．青岛：青岛出版社，2002：91-92．

[2]Schmid W G.Hosta Species Update W.George Schmid 2007[EB/OL].http://www.hostalibrary.org.

[3]李钱鱼,夏宜平.玉簪属植物种质资源及其园林应用现状[J].中国园林，2004，20(2)：77-79．

[4]Schmidw G.The Genus Hosta[M].London:Tmi ber Press,1991.

[5]Grenfell D.The gardener’s guide to growing Hosta[M].Portland,Oregon:Tinber Press,1996:160.

[6]方中达.植病研究法[M].北京：中国农业出版社，1998.

[7]李小霞.贵州省草乌病害调查及白绢病菌生物学特性研究[D].贵阳:贵州大学,2007.

[8]肖仲久,李晓霞.6种培养基对不同来源白术白绢病菌培养的影响[J].广州农业科技，2012(6).

中图分类号:S436.8+1

文献标识码:A

收稿日期：2015-12-10

作者简介：张丽(1976-)，女，高级农艺师，主要从事农业技术推广工作，E-mail:wjk8272915@163.com。 刘智会(1980-)，女，工程师，主要从事园林植物保护工作，E-mail:woliuzhihui@163.com。

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2016.02.016