复方中药组方对高尿酸血症影响的研究

张　扬(连云港市赣榆区人民医院药剂科，江苏 连云港　222100)



复方中药组方对高尿酸血症影响的研究

张扬*(连云港市赣榆区人民医院药剂科，江苏 连云港222100)

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.03.029

摘要目的：研究复方中药组方(AG)对高尿酸血症的治疗作用。方法：分别用酵母，氧嗪酸钾盐，腺嘌呤和乙胺丁醇三种方法诱导高尿酸血症模型，给药后通过检测尿酸(UA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、腺苷脱氨酶(ADA)等指标，探讨AG的治疗作用。结果：AG各剂量组均可显著降低酵母所致小鼠高尿酸血症的血清UA值，差异有统计学意义(P<0.05)；AG高剂量组可显著降低氧嗪酸钾盐所致小鼠高尿酸血症的血清UA值，差异有统计学意义(P<0.05)；AG各剂量组在7、14、21 d均可极显著的降低腺嘌呤和乙胺丁醇大鼠高尿酸血症的血清UA值，差异有统计学意义(P<0.01)；在此模型中，7、14 d 时AG高、中剂量组小鼠的尿液UA值显著降低，低剂量组小鼠尿液UA值在7 d有显著的降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；AG各剂量组的血清XOD活力均有极显著的降低，差异均有统计学意义(P<0.01)。结论：AG对不同造模法所致的高尿酸血症均有减低体内血清UA含量，抑制UA生成的作用。

关键词复方中药组方； 高尿酸血症； 尿酸

Research on Effects of Chinese Medicines Section(AG) on Hyperuricemia

ZHANG Yang(Dept.of Pharmacy, Lianyungang Ganyu District People’s Hospital， Jiangsu Lianyungang 222100, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To research the treatment effects of Chinese medicines section(AG) on hyperuricemia. METHODS: Three methods interms of yeast, oxonic acid potassium salt, adenine and ethambutol were used to induce hyperuricaemia model; the treatment effects of AG were investigated through the detection of uric acid(UA), xanthine oxidase(XOD) and adenosine deaminase(ADA) and some other indexes after administration. RESULTS: Different dose groups of AG could significantly decrease the serum UA value in the hyperuricemia mice which induced by yeasts, the difference was statistically significant(P<0.05). The high dose group of AG could significantly decrease the serum UA value in the hyperuricemia mice which induced by oxonic acid potassium salt, with statistical significance(P<0.05). Different dose groups of AG could significantly decrease the serum UA value in the hyperuricemia rat induced by adenine and ethambutol in 7 d, 14 d and 21 d, with statistically significant difference(P<0.01). In this model, high and middle dose group of AG could significantly decrease the level of urine UA value in 7 d and 14 d, and low dose group of AG could significantly decrease the level of urine UA value in 7 d, with statistically significant difference(P<0.05)；Different dose groups of AG could significantly decrease the serum XOD activity , the difference was statistically significant(P<0.01). CONCLUSIONS: AG could significantly decrease the serum UA value in different models induced by hyperuricemia and inhibit the generation of UA.

KEYWORDSChinese medicines section; Hyperuricemia; Uric acid

痛风是一种以持续性高尿酸血症导致尿酸钠晶体在关节及其周围组织沉积为特征的嘌呤代谢性疾病[1]。血尿酸(UA)升高是痛风、高尿酸血症的重要生化指标[2-3]，高尿酸血症被认为是发生痛风的前期状态。近年来，高尿酸血症和痛风的发病率日益增高，人们越来越重视药物治疗和新药地研发。目前，治疗高尿酸血症的药物主要包括抑制UA生成的药物，如別嘌呤醇；促进UA排泄的药物，如苯溴马隆；尿酸酶类药物，如拉布立酶等[4-5]。连云港市赣榆区人民医院(以下简称“我院”)根据传统中医配方研制出复方中药组方(AG)，经初步筛选发现疗效较好，本研究通过药理研究手段探讨AG对实验动物高尿酸血症的治疗作用及影响机制，现报告如下。

1资料和方法

1.1实验动物

清洁级小鼠140只(18～22 g)，雄性，由扬州大学比较医学中心提供，许可证号：SCXK苏2014-0007；清洁级大鼠80只(180～220 g)，雄性，由浙江省实验动物中心提供，许可证号：SCXK浙2014-0008。

1.2药品与试剂

AG：包括三七、冰片等成分，现成分及配比保密，将该复方浓缩成浸膏并干燥，1 g浸膏相当于6.8 g生药，三七及冰片磨成粉末入药，各成分按照处方混合。药物配制：临用前用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)研磨配制成所需浓度的均匀混悬液。苯溴马隆：德国赫尔曼大药厂，规格：50 mg/片，批号：1300894。別嘌呤醇：上海信谊万象药业股份有限公司，规格：0.1 g/片，批号：130823-01。痛风舒片：湖南康普制药有限公司，规格：0.32 g/片，批号：20131102。氧嗪酸钾盐：美国Sigma-Aldrich公司，批号：2213-75-2。酵母：英国oxoid公司，批号：1355226。腺嘌呤：美国Sigma公司，批号：A8626。盐酸乙胺丁醇片：杭州民生药业有限公司，规格：0.25g/片，批号：T13D521。尿酸试剂盒：南京建成生物工程研究所，批号：20140422。黄嘌呤氧化酶(XOD)测试盒：南京建成生物工程研究所，批号：20140329。腺苷脱氨酶(ADA)测试盒：南京建成生物工程研究所，批号：20140329。

1.3方法

1.3.1酵母所致小鼠高尿酸血症模型的建立及实验方法：取雄性小鼠70只，体质量18～22 g，按随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、别嘌呤醇组及痛风舒片对照组，AG高、中、低剂量组，每组10只。除空白对照组外，其余各组以酵母40 g/kg剂量灌胃给药，连续7 d，别嘌呤醇组、痛风舒片组和AG各剂量组于第5日开始灌胃给药，连续3 d。第8日眼眶取血[6]，测定小鼠血清UA和XOD活性，即1 L血清/浆在37 ℃时1 min转化1 μm的底物所需的酶量为1个酶活力单位(U)。血清UA值(mg/L)=(标准管OD值-空白管OD值)/(测定管OD值-空白管OD值)×50 mg/L；XOD活力(U/L)=(测定管OD值-空白管OD值)/呈色物摩尔消光系数×样品稀释倍数×1/(光径×反应时间)。

1.3.2氧嗪酸钾盐所致小鼠高尿酸血症模型的建立和实验方法：氧嗪酸钾盐是一种尿酸酶抑制剂，作为化学诱导剂可抑制尿酸分解，增加体内血清尿酸水平，极显著地提高小鼠血清尿酸水平，造成小鼠高尿酸血症模型，模型中动物血清尿酸水平能维持5 h[7]。

取雄性小鼠70只，体质量18～22 g，按随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、苯溴马隆组及痛风舒片组，AG高、中、低剂量组，每组10只。除空白对照组外，其余各组在取血前2 h用氧嗪酸钾盐按300 mg/kg剂量腹腔注射给药，各给药组在取血前1 h分别灌胃给药。然后各组分别在注射造模后2 h后眼眶取血[8]，测血清UA值和XOD活性。血清UA值(mg/L)=(标准管OD值-空白管OD值)/(测定管OD值-空白管OD值)×50 mg/L；

XOD活力(U/L)=(测定管OD值-空白管OD值)/呈色物摩尔消光系数×样品稀释倍数×1/(光径×反应时间)。

1.3.3腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血症的建立和实验方法：取大鼠80只，雄性，体质量180～220 g，分为空白对照组、模型对照组、苯溴马隆组、别嘌呤醇组和痛风舒片对照组，AG高、中、低剂量组。除空白对照组外，其他各组用腺嘌呤(100 mg/kg)+乙胺丁醇(250 mg/kg)[9]在上午定时灌胃，空白对照组组灌胃蒸馏水5 ml/kg，各组均从诱导模型时开始在下午定时灌胃预防给药，给药时间均为3周。每日均对大鼠的一般情况进行观察，每7 d禁食眼眶取血1次，分离血清，并采集尿液，测血清及尿液UA含量；第21日实验结束时,大鼠眼眶取血，按试剂盒说明测血清中黄嘌呤氧化酶(XOD)和腺苷脱氨酶(ADA)的活性。血清UA值(mg/L)=(标准管OD值-空白管OD值)/(测定管OD值-空白管OD值)× 50 mg/L；尿液UA值(mg/L)=(标准管OD值-空白管OD值)/(测定管OD值-空白管OD值)× 50 mg/L × 尿液稀释倍数；XOD活力(U/L)=(测定管OD值-空白管OD值)/呈色物摩尔消光系数×样品稀释倍数×1/(光径×反应时间)；ADA活力(U/mL)=(测定管OD值-对照管OD值)/(标准管OD值-空白管OD值)× 25 μg/ml。

1.4统计学方法

2结果

2.1AG对酵母所致小鼠高尿酸血症的作用

AG对酵母所致小鼠高尿酸血症的作用结果见表1。

Tab 1Effects of AG on hyperuricemia mice induced

组别剂量/(mg/kg)血清UA值/(mg/L)血清XOD活力/(U/L)空白对照组(n=10)48.58±6.916.80±1.22模型对照组(n=10)54.33±4.99#8.28±1.09#别嘌呤醇组(n=10)4022.65±5.07**5.95±1.16**痛风舒片组(n=10)60044.13±6.35**6.57±0.73**AG组高剂量组(n=10)45028.65±6.33**6.69±1.01**中剂量组(n=10)22538.46±7.93**6.95±1.23*低剂量组(n=10)11345.67±10.92*7.65±2.17

注：与空白对照组比较，#P<0.05，与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

Note: vs. the blank control group,#P<0.05，vs. the model control group,*P<0.05，**P<0.01

2.2AG对氧嗪酸钾盐所致小鼠高尿酸血症的作用

AG对氧嗪酸钾盐所致小鼠高尿酸血症的作用结果见表2。

2.3AG对腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血症的作用

AG对腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血症血清UA值的作用结果见表3，AG对腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血症尿液UA值的作用结果见4，AG对腺嘌呤和乙胺丁醇所

Tab 2Effects of AG on hyperuricemia mice induced

组别剂量/(mg/kg)血清UA值/(mg/L)血清XOD活力/(U/L)空白对照组(n=10)54.89±6.458.28±1.31模型对照组(n=10)74.78±7.22##8.42±1.30苯溴马隆组(n=10)2022.93±3.60**6.90±1.26*痛风舒片组(n=10)60070.65±9.188.00±1.46AG组高剂量组(n=10)45066.09±9.51*7.45±1.40中剂量组(n=10)22567.61±11.687.88±1.58低剂量组(n=10)11371.09±9.458.30±1.65

注：与空白对照组比较，##P<0.01，与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

Note: vs. the blank control group，##P<0.01，vs. the model control group,*P<0.05，**P<0.01

3讨论

AG是我院研究开发的治疗通风性关节炎的中药复方，配方包括三七、冰片等，对治疗痛风有较好效果。本研究中的三种高尿酸血症模型造模原理稍有不同，酵母是UA的前体物质，大量摄入可促进UA产生；氧嗪酸钾盐是尿酸酶抑制剂，可抑制UA分解；腺嘌呤和乙胺丁醇均可抑制肾脏排泄UA，使血UA水平升高[8-10]。XOD是嘌呤合成和代谢最后形成尿酸的关键酶[11]，可连续氧化黄嘌呤、次黄嘌呤生成UA，直接调控体内UA水平的变化[12]。ADA可催化腺嘌呤核苷分解为次黄嘌呤核苷，而后经核苷磷酸化酶催化生成次黄嘌呤，再经XOD的氧化作用最终生成尿酸[13]，XOD和ADA活性的升高有利于促进这些核酸的分解代谢，使UA生成增加[14]。

表3　AG对腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血症血清UA值的作用±s)

注：与空白对照组比较，##P<0.01，与模型对照组比较，**P<0.01

Note: vs. the blank control group，##P<0.01， vs. the model control group，**P<0.01

表4　AG对腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血症尿液UA值的作用±s)

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

Note: vs. the model control group,*P<0.05，**P<0.01

致大鼠高尿酸血症血清XOD及ADA活力的作用结果见5。

表5　AG对腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血症血清

注：与空白对照组比较，##P<0.01，与模型对照组比较，**P<0.01

Note: vs. the blank control group，##P<0.01，vs. the model control group，**P<0.01

在酵母所致高尿酸血症模型中，与空白对照组比较，模型对照组小鼠的血清UA值有显著的提高，差异有统计学意义(P<0.05)，造模成功。与模型对照组比较，别嘌呤醇组和痛风舒片组小鼠的血清UA值有极显著的降低，差异有统计学意义(P<0.01)；AG组中，高、中剂量组小鼠的血清UA值有极显著的降低，低剂量组的血清UA值有显著的降低，差异均有统计学意义(P<0.01，P<0.05)。说明AG各剂量均可显著地降低酵母所致小鼠高尿酸血症的血清UA值，对高尿酸血症有治疗作用。与空白对照组比较，模型对照组组小鼠的血清XOD值有显著的提高，差异有统计学意义(P<0.05)，说明此高尿酸血症模型是通过增加体内嘌呤物质含量，提高XOD活力，来提高体内UA含量的。与模型对照组比较，别嘌醇组和痛风舒片组小鼠的血清XOD值有极显著的降低；AG高剂量组的血清XOD值有极显著的降低，中剂量组的血清XOD值有显著的降低，差异均有统计学意义(P<0.01，P<0.05)。说明AG可以在一定程度上降低酵母所致小鼠高尿酸血症的血清XOD活力，对高尿酸血症达到治疗的效果。

在氧嗪酸钾盐所致小鼠高尿酸血症中，与空白对照组比较，模型组小鼠的血清UA值有极显著的提高，差异有统计学意义(P<0.01)，说明氧嗪酸钾盐造模成功。与模型对照组比较，苯溴马隆组小鼠的血清UA值有极显著的降低；AG高剂量组的血清UA值有显著的降低，差异均有统计学意义(P<0.01，P<0.05)。说明在单次治疗给药途径下，苯溴马隆组和AG高剂量组可降低尿酸酶缺乏时异常提高的血清UA值，达到治疗高尿酸血症的目的。与空白对照组比较，模型组小鼠的血清XOD值无较大变化，说明造模剂氧嗪酸钾盐对XOD活性无影响。与模型对照组比较，苯溴马隆组小鼠的血清XOD活力有显著的降低，差异有统计学意义(P<0.05)，说明苯溴马隆可降低尿酸酶缺乏所致小鼠高尿酸血症模型的XOD活性。

在腺嘌呤和乙胺丁醇所致大鼠高尿酸血症模型中，与空白对照组比较，模型组的血清UA值有极显著的提高，差异有统计学意义(P<0.01)，说明利用腺嘌醇和乙胺丁醇造大鼠高尿酸血症模型成功。与模型对照组比较，苯溴马隆组、别嘌呤醇组、痛风舒片组的血清UA值在7、14、21 d均极显著的降低；AG各剂量组的血清UA值在7、14、21 d均极显著的降低，差异均有统计学意义(P<0.01)。与空白对照组比较，模型对照组大鼠尿液的UA值无明显变化，说明此大鼠高尿酸血症模型造模成功，体内UA生成增加但UA排泄并无显著提高。与模型对照组比较，苯溴马隆组大鼠尿液UA值在7、14、21 d均极显著的提高；别嘌呤醇组大鼠的尿液UA值在7、21 d有极显著的降低，在14 d有显著的降低，差异均有统计学意义(P<0.01，P<0.01，P<0.05)；AG高、中剂量组大鼠的尿液UA值在7 d及14 d有显著的降低，低剂量组的尿液UA值在7 d有显著的降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较，空白对照组大鼠的血清XOD活力有极显著的提高，差异有统计学意义(P<0.01)，说明此大鼠高尿酸血症模型造模成功，体内UA生成增加。与空白对照组比较，苯溴马隆组、别嘌呤醇组及痛风舒片组大鼠血清XOD活力均有极显著的降低；AG各剂量组的血清XOD活力均有极显著的降低，差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组比较，空白对照组大鼠的血清ADA活力极显著的提高，差异有统计学意义(P<0.01)，说明此大鼠高尿酸血症模型造模成功，体内UA生成增加。与空白对照组比较，别嘌醇组的血清ADA活力极显著的降低，差异有统计学意义(P<0.01)。

本实验结果表明，AG对不同造模方法所致的小鼠及大鼠高尿酸血症模型均有降低体内血清UA含量，抑制UA生成的作用[15]，其中预防给药比单次治疗给药治疗高尿酸血症作用更好，其治疗作用可能是通过抑制UA合成来实现的，是否有促进UA排泄的功能还需要进一步的研究。

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(收稿日期：2015-11-09)

中图分类号R932

文献标志码A

文章编号1672-2124(2016)03-0360-04

*主管药师。研究方向：药学、医改、农村公共卫生。 E-mail：gyxwsjdcb@126.com