半枝莲多糖的Sevage法除蛋白工艺研究

刘晓茵，赵　帅，路　芳，靳丹虹

(1 长春医学高等专科学校，长春　130031； 2 长春中医药大学研究生学院，长春　130117)



半枝莲多糖的Sevage法除蛋白工艺研究

刘晓茵1，赵帅2，路芳1，靳丹虹1

(1长春医学高等专科学校，长春130031；2长春中医药大学研究生学院，长春130117)

摘要：以样品浓度、试剂添加量与供试液体积比、Sevage试剂中氯仿与正丁醇体积比、温度和料液比等为因素，采用正交试验设计，优化半枝莲多糖除蛋白的纯化工艺，结果表明：使纯化后半枝莲多糖中总糖含量最高的最佳工艺条件是A1B3C1，即：样品浓度5mg/mL、试剂添加量与供试液体积比1/5、Sevage试剂中氯仿与正丁醇体积比3/1。

关键词：半枝莲多糖；正交试验设计；Sevage法；除蛋白工艺

半枝莲为唇形科黄芩属植物的干燥全草，具有化瘀利尿、清热解毒等功效，临床上常用于跌扑伤痛、黄疸、疔疮肿毒、水肿、蛇虫咬伤、咽喉肿痛等症[1]。近年来药理研究发现，其中的有效成分多糖半枝莲多糖具有一定的抗衰老作用[2]，对小鼠S180肉瘤有一定的抑制作用[3，4]，对四氯化碳致小鼠肝损伤具有保护作用[5]。对其提取纯化工艺的研究少见报道，为此，作者仅对水提醇沉法制得的粗多糖进行Sevage法脱蛋白后的多糖中总糖含量工艺进行优化。

1仪器与药品

1.1仪器

U1901双光束紫外可见分光光度计(北京普西通用仪器责任有限公司)、电子天平BS224S(赛多利斯科学仪器北京有限公司)。

1.2药品

佛手(长春药材公司)、苯酚、浓硫酸、乙醇等均为分析纯；标准品：无水葡萄糖(飞宇生物科技有限公司，含量大于98%，批号：FY18720206)。

2试验方法

2.1半枝莲粗多糖的提取[6]

半枝莲多糖的提取工艺流程如图1。

2.2Sevage法纯化多糖

Sevage法纯化多糖工艺流程如图2。

2.3多糖的测定方法[8]

药材多糖的测定以葡萄糖为标准品，采用硫酸-苯酚比色法[8]。

半枝莲

药材颗粒

提取液

沉淀

粗多糖

干燥粗多糖

图1半枝莲多糖的提取工艺流程

干燥至恒重的粗多糖

多糖溶液(3份)

上清液

多糖沉淀(1～9号)

半枝莲样品液

图2Sevage法纯化多糖工艺流程

2.4标准样品溶液的配制

精密称取0.014 8g干燥至恆重的标准品无水葡萄糖，加入100mL容量瓶中，用水溶解至刻度，使成147.1μg/mL即得。

2.5标准曲线的制备[9，10]

依据参考文献[6]标准曲线制备方法得：以浓度C对吸收度A回归方程：A=0.008 9C+0.009 4，R=0.990 4。

3半枝莲多糖纯化条件的优化设计与统计分析

3.1半枝莲多糖提取条件的优化

采用正交试验法，对半枝莲多糖的纯化条件进行单因素考察，依据L9(34)正交水平进行试验，因素-水平设计如表1。

表1　正交试验因素水平

3.2试验结果与分析

根据表1进行正交设计试验，结果和方差分析见表2和表3。

表2　正交试验结果

表3　方差分析

4结论

(1)极差R反映了各因素对指标的影响大小，由结果RA>RC>RB知，影响半枝莲多糖得率从主到次的因素排序为A、C、B，即样品浓度、Sevage试剂中氯仿与正丁醇体积比、试剂添加量与供试液体积比。

(3)在水平α=0.05下，F0.05(2，2)=19，由于FA、FB、FC均大于19，故A、B、C三因素对半枝莲多糖的纯化影响均显著。

中药半枝莲的主要成分是黄酮类化合物，在临床上具有很重要的应用价值。近年来药理研究发现，半枝莲多糖也具有多方面的生理活性。通过水提-醇沉法可以获得较高收率的半枝莲粗多糖，但是，纯化粗多糖的效果不佳。本文尝试采用Sevage 法纯化半枝莲多糖，由于是萃取的方法，处理的样品量较少，在纯化过程的操作中，出现了乳化现象，难免有多糖的损失。因此，本文仅对脱蛋白后的多糖溶液，再经过醇沉后所得粗多糖中总糖含量进行测定，结果显示含量明显提高。当然，用Sevage 法纯化多糖仍有许多指标需要考量，如多糖的损失情况、蛋白的除去率等。◇

参考文献

[1]国家药典编写委员会编.中华人名共和国药典二部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：109-110.

[2]王转子，支德娟，等.半枝莲多糖和白花蛇草多糖抗衰老作用的研究[J].中兽医医药杂志，1999，4：5-7.

[3]袁辉，李春江，等.半枝莲多糖对小鼠S180肉瘤抑制作用的研究[J].哈尔滨商业大学学报(自然科学版)，2012，28(4)：396-398.

[4]张秀娟，张晶，等.半枝莲多糖对小鼠S180肉瘤及免疫功能的影响[J].齐鲁药事，2008，27(10)：629-630.

[5]赵杰，孙设宗，等.半枝莲多糖对四氯化碳致小鼠肝损伤保护作用的研究[J].中国中医药科技，2012，19(1)：39-40.

[6]纪耀华，纪跃芝，等.大黄粗多糖传统水提醇沉法最佳工艺研究[J].中国食物与营养，2010，1：62-65.

[7]纪耀华，马爱民，等.大黄多糖传统水提醇沉法最佳工艺优化研究[J].时针国医国药，2010，21(3)：634-635.

[8]纪跃芝，纪耀华，等.传统方法提取佛手多糖的最佳工艺设计[J].中国食物与营养，2011，9：63-66.

[9]纪耀华，纪跃芝，等.微波法提取大黄多糖最佳工艺优化研究[J].中药材，2009，32(8)，1291-1293.

[10]刘晓茵，等.超声波辅助提取大黄多糖工艺的优化[J].中国食物与营养，2010，12：51-53.

(责任编辑李燕妮)

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Deproteinization Process of Barbata Polysaccharide with Sevage Method

LIU Xiao-yin1，ZHAO Shuai2，LU Fang1，JIN Dan-hong1

(1ChangchunMedicalCollege，Changchun130031，China；2GraduateSchoolofChangchunUniversityofChineseMedicine，Changchun130117，China)

Abstract：Based on the sample concentration，reagent adding quantity and the test liquid volume ratio，sevage reagent chloroform and n-butanol in volume ratio，temperature and liquid ratio of factors，the deproteinization technology of barbata polysaccharide was optimized by using orthogonal experimental design.Results showed that the total sugar content in these polysaccharide purified A1B3C1 was the best process condition which were sample concentration 5 mg/mL，reagent adding quantity and the test liquid product 1/5，and Sevage reagent in chloroform and n-butanol volume 3/1.

Keywords：barbata polysaccharides；orthogonal experimental design；sevage method；deproteinization Process

作者简介：刘晓茵(1961—)，女，学士，副主任药师，研究方向：天然药物成分提取分离工艺。

基金项目：吉林省教育厅科“十一五”科学技术研究项目(项目编号：〔2013〕546)。