北疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的检测与分析

刘功成　张　倩　屈勇刚杨　蓓　王欣雨　王园园　李新顺

（石河子大学动物科技学院，新疆石河子832000）



北疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的检测与分析

刘功成张倩屈勇刚*杨蓓王欣雨王园园李新顺

（石河子大学动物科技学院，新疆石河子832000）

摘要：为了解2014—2015年北疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的抗体水平。试验从北疆的石河子、沙湾、玛纳斯、克拉玛依4个不同区域的16个规模猪场采集血液样品共计828份，采用间接ELISA法检测其抗体水平，结果发现PRRSV的平均抗体阳性率为75.36%，平均KQ值为58.12。16个猪场抗体阳性率达到70%以上的占81.25%，各猪场抗体水平差异极显著（＜0.01）。通过对16个不同规模猪场的血清学检测，表明北疆部分地区对PRRS的防控水平存在差异，防控力度仍需要继续提高。

关键词：PRRS；ELISA；抗体检测；阳性率

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的猪的一种繁殖障碍和呼吸系统症状的传染病。其特征为厌食、发热，怀孕后期发生流产，产死胎和木乃伊胎；幼龄仔猪发生呼吸系统疾病和大量死亡[1]。该病最早于1987年在美国中西部出现，随后在加拿大、德国、荷兰、英国、西班牙、比利时、澳大利亚、日本、菲律宾等国家相继发生[1]。近年来，北疆地区养猪业发展势头迅猛，给广大养殖户带来巨大利润的同时，也给疫病的防控带来巨大挑战。又恰逢2014—2015年养猪业的低迷期，北疆地区很多猪场相继出现了一些问题。在调查中，通过剖检笔者时常发现部分猪场有疑似PRRSV感染的状况。为此，对北疆地区规模化猪场进行了PRRSV的抗体检测，以期了解PRRSV的抗体水平，为该地区PRRS的防控提供流行病学数据。

1材料与方法

1.1血清样品

2014—2015年采自北疆部分地区16个不同规模猪场（能繁母猪500头及以上的场5个，301～499头的场4个，201～300头的场3个，200头以下的场4个）各个年龄段猪只的血液828份，其中仔猪、保育猪、后备母猪、经产母猪以及种公猪各采集181份、108份、95份、153份和84份。前腔静脉采血5 mL，静置析出血清，分离至1.5 mL的EP管中，-20℃保存。

1.2检测试剂盒和主要仪器

猪蓝耳病毒ELISA抗体检测试剂盒（购自武汉科前生物制品有限责任公司，批号：141115）、自动酶标仪（购自美国BioTek公司）。

1.3试验方法

1.3.1间接ELISA方法

根据试剂盒的操作步骤，对待检血清进行1 :40倍稀释(例如：195 μL样品稀释液中加5 μL待检血清)，同时洗涤抗原包被板。将稀释好的血清、阴性对照血清和阳性对照血清各取100 μL加入到洗涤好的抗原包被板中，同时设定阴阳对照组，均匀震荡后，置于37℃温箱温浴30分钟，然后弃去抗原包被板中的液体，对抗原包被板进行洗涤。再在每孔中加入羊抗猪酶标二抗，置于37℃温箱温浴30分钟，随后弃掉废液，再次洗涤，将洗涤好的抗原包被板每孔加入底物A、B，混匀，室温避光显色10分钟。最后，每孔加入终止液。在10分钟内，用酶标仪在630 nm波长下对样品的OD值进行测定，根据OD值的大小，判定血清的抗体水平。

1.3.2结果判定

KQ=（样品OD值/阳性对照平均值）×100，若KQ值≥20，判为猪繁殖和呼吸综合征病毒抗体阳性；若KQ＜20，判为猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阴性。

1.3.3统计分析

用Excel、SPSS软件对试验数据进行统计分析。

2结果

2.1北疆地区16个规模化猪场PRRSV抗体检测结果

A～P 16个不同规模猪场的PRRSV抗体阳性率范围在51.41%～100.00%之间；PRRSV平均抗体阳性率为75.36%，离散度均值为64%；运用SPSS软件进行单样本t检验得出值为0.007，说明16个不同猪场的PRRSV抗体阳性率差异极显著(＜0.01)，结果见表1。

表1　16个不同规模猪场PRRSV的抗体水平及分布

2.2部分猪场不同猪群的PRRSV抗体水平

为了更准确比较不同猪群的PRRSV抗体水平，笔者对部分猪场的仔猪、保育猪、后备母猪、头胎母猪、经产母猪、种公猪进行了分析，结果发现16个不同规模猪场中仔猪、保育猪、后备母猪、经产母猪、种公猪的PRRSV的抗体阳性率分别为58.01%（105/181）、62.04%（67/108）、90.53%（86/95）、88.24% （135/153）、79.76%（67/84）；其中仔猪的抗体阳性率最低，后备母猪和经产母猪的抗体阳性率最高，结果见表2。

表2　部分猪场猪群不同构成成分的PRRSV抗体阳性率分布情况

3讨论

3.1北疆地区16个不同规模化猪场的PRRSV抗体水平差异较大

北疆地区16个不同规模化猪场的PRRSV的抗体水平差异极显著，抗体水平达到农业部《2012年国家动物疫病强制免疫计划》抗体合格率≥70%的规定[2]的猪场占81.25%，个别猪场的抗体水平较低，免疫水平较差，需要引起足够的重视。16个猪场的抗体水平离散度均值为66%，个别猪场高达97%，结果明显高于农业部《2012年国家动物疫病强制免疫计划》阳性抗体离散度＜40%的规定[2]，说明该地区PRRSV的抗体水平分布很不均衡。

3.2猪群不同构成成分的PRRSV抗体水平存在差异

不同猪群构成的PRRSV抗体水平差异较大，阳性率较低的是仔猪和保育猪，分别为58.01%和62.04%，最高的是后备母猪（90.53%），种公猪的抗体水平为79.76%，需要引起足够重视。仔猪和保育猪抗体水平较低一方面可能是由于仔猪临近断奶时，母源抗体水平基本降到最低，此时，如果仔猪没有及时接种疫苗，那么仔猪就很容易受到病毒的入侵；另一方面可能是当仔猪断奶后从产房转入保育圈舍，环境、温度的改变等都会对仔猪造成一定的应激，而应激会造成部分仔猪感染发病。有人认为发生PRRS以后猪群就获得了免疫，就不会再发生流产、死胎等危害，所以对阳性猪不再进行免疫。因而当PRRS暴发时，没有引起足够的重视，人为造成PRRS的泛滥和蔓延[3]。

总之，通过对北疆地区猪PRRS抗体水平的检测和分析，笔者发现北疆地区PRRS的抗体水平不容乐观，仍需要加大对PRRS的防控力度。鉴于我国各地猪群普遍存在PRRS的感染情况，建议相关从业人员对该病的流行高度重视，提高饲养管理水平，强化卫生消毒意识，提高猪群机体自身免疫抗体水平，做到防患于未然[4]。而且在猪场日常管理中，要加强对猪场生物安全的防控，提高防疫人员的素质，严格按照免疫程序使用疫苗。

参考文献

[1]陈溥言.兽医传染病学[M].第5版.北京:中国农业出版社,2006:221-223.

[2]刘志勇,韩庆安,刘乃强,等.规模养猪场主要疫病免疫效果评估模型的建立［J］.中国兽医杂志,2011(7):88-90.

[3]蔡雪辉.猪繁殖与呼吸综合征的综合防制措施[J].养猪,2002 (3):35-36.

[4]韩雪,蔡林,倪建强,等.2009年我国猪群圆环病毒2型感染情况调查[J].中国兽医学报,2012,32(7):941-944.

■简讯

*通讯作者：屈勇刚（1971-），男，陕西渭南人，副教授，主要从事动物传染病诊断与防治工作，E-mail：quyonggang@shzu.edu.cn

作者简介：刘功成（1990-），重庆合川人，硕士研究生，主要从事动物传染病诊断与防治工作

基金项目：新疆石河子市农业科技攻关项目（2013NY04）

收稿日期：2015-11-04

中图分类号：S858.28

文献标识码：A

文章编号：1673-4645(2016)01-0041-03